Способ определения мочевины в крови

)5 601 й 33/ ПИСАНИ БРЕТЕНИ ВИДЕТЕЛЬСТВУ ВТОРСКО а 150 (Огеа, 3438773880. МОЧЕВИНЫ а, биология ия содержазобретения: при длитель%рытточноии биоии в них ого рас- фосфоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Черновицкий государственный университет(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯВ КРОВИ(57) Использование: медициндля количественного определенния мочевины в крови, Цель иповышение точности способа Изобрете ской химии и биологии и ме личествен ног мочевины в тк стях.Известен спас деления мочевинь тах, Недостаток с завершить анализ ских проб, поэтому ван для отсроч количества мочеви бах. ние относится к биологичеможет быть использовано в дицине для отсроченного коо определения содержания анях и биологических жидкооб количественного опрев биологических обьекпособа - необходимость в день забора биологичеон может быть испольэоенного определения ны в биологических проЦель изобретения - повышение сти способа при длительном хранен логических проб за счет стабилиэац мочевины, добавления к пробе водн твора 9-фенантрилметилтрифенил нийхлорида (ФТФ). Способ осуществляют следующим оном хранении проб. Сущность изобретения: к пробам крови добавляют предварительно 0,075%-ный водный раствор 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида в соотношении проба; реактив 1;10, затем добавляют 5%-ный раствор трихлоруксуснойкислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости диацетилмонооксима 5,0 ммоль/л, тиосемикарбазида .0,9 ммоль/л, соли трехвалентного железа 25,0 мкмоль/л, серной к-ты 0.9 моль/л, затем инкубационную смесь нагревают 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и колориметрируют в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при 490-540 нм. 3 табл,В три пробирки вносят по 1 мл 0,075 ного водного раствора ФТФ, Далее в оп ную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора мочевины, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2-8 С, В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают вхолодильнике. На 60-й или любой удобный для работника день, но не позже 60-го определяют количество мочевины во всех накопившихся пробах.П р и м е р. В три пробирки вносят по 1 мл 0,075%-ного водного раствора ФТФ, Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора мочевины, в контрольную 0,1 мл, дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2-8 С, В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холо1774262 ТаблицаЗависимость получаемых показателей содержания мочееины в пробах сыворотки крови от продолжительности их хранения и концентрации ФТФ (е таблице представлено среднее арифметическое из трехпараллельных определений) е ее е г еег ее ееге ееге е г ее геее До прибавления раствора ФТФ (т.е. по способу-прототипу) 4,72 15 минут хранения 4,72 4,69 5 суток, хранения 4,72 4,У 0 10 суток хранения 4,78 4,71 20 суток хранения 4,73 4,72 30 суток хранения 4,77 4,75 40 суток хранения 4,68 4,784,75 468 4,70 4,75 4,75 4,70 4,72 4,У 0, 4,73 4,74 4,75 Я,У 4 4,72 4 74 4,74 471 473 фФ 4 21 Ьгг 4,71 4,71 4,72 В,УЗ 4,73 . 471 4,68 4,70 4,72 474 476 4,76 4,67 4,71 4,74 4,78 4 18 а4,08 22 389 3,92 3 ее 472 4,74проб 4,69 4,67 478 469 475 471 475 2,09 3 12 Зь 16 1,22 4,УО 479 4,72 4,74 4,72 2 а 82 264 дильнике. На 60-й или любой удобный для работника день, но не позже 60-го определяют количество мочевины во всех накопившихся пробах, для чего к ним добавляют по 1 мл 10-ного раствора трихлоруксусной 5 кислоты, центрифугируют, переносят по 1,5 мл центрифугата в химические пробирки, приливают по 2 мл 0,9 моль/л серной кислоты, по 2 мл раствора 5,0 ммоль/л диацетилмонооксима (содержащего соль трехвалентного 10 железа 25,0 мкмоль/л и 0,9 ммоль/л тиосемикарбозида), перемешивают содержимое помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и колориметрируют опытную и стандар тную пробы против контроля в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине световой волны 490-540 нм, Расчет проводят по известной формуле.Исследования показали, что ФТФ в 20 концентрациях 0,02-0,3 обеспечивает сохранность мочевины в пробах сыворотки крови неизменной на протяжении 75 суток (табл. 1).В табл, 2 представлены результаты со держания мочевины в сыворотке крови и крови, которые хранились на 1-60 суток после добавления к ним 0.0757 ь-ного водного раствора ФТФ в сравнении с результатами содержания мочевины в аналогичных про бах, хранившихся без ФТФ. Как видно из этих данных, этот показатель значительно отклоняется от исходных величин, начиная с 10-го дня хранения.Средняя относительная ошибка опи санного способа определения мочевины,вычисленная из 200 определений исследуемого показателя (по 200 определений в крови и в сыворотке крови) в сроки, указанные в табл. 2, равнялась 4,63 о/,.В табл. 3 приведены результаты определения мочевины в сыворотке крови доноров, у которых наблюдались минимальные, средние и максимальные отклонения от величин, полученных по способу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин, полученных по описанному способу, не отличается от величин, полученных по способу-прототипу, более чем на 5. Формула изобретения Способ определения мочевины в крови, включающий добавление к пробе крови 5- ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование с последующим добавлением к надосадочной жидкости диацетилмонооксима 5,0 ммоль/л, .тиосемикарбазида 0,9 ммоль/л, соли трехвалентного железа 250 мкмоль/л, серной кислоты 0,9 моль/л, затем инкубационную смесь нагревают в течение 10 мин на кипящей водяной бане, охлаждают и колориметрируют в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при 490-540 нм, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет стабилизации мочевины, предварительно к пробе добавляют 0,075 о-ный водный раствор 9-фенантрилметилтрифенилфосфонийхлорида в соотношении 1:10 проба крови;реактив,Оэ 92 О 2 С75 суток 4.72 4,74 4,70 4175 4,72 4,74 4,75 4,70 4,7 О Оэб 2 О 64 0,04 вместо 555 ТФ к биологическим пробалг приливали 1 мл дистиллированной воды и хранили их до 75 руток- подчеркнуты показатели проб, в которых содерэоамие моцевины уменьшалось в процессе хранения Примеча ниео Таблица 2Показатели содерпания мочевины в нН/л в сыворотке крови (и к 10) и,крови (и д 10)доноровэ полученные по предлагаемому способу и способу-прототипу (М щ) Использованный спо- Сроки хранения биологическихсоб определения ноцевнны 1 Г 1. кидкостей в сутках- - - г-" - - - -"г-- т" 20 3045 1 601. эфСыворотка крови По предлагаемомуспособу Н -о 6,6630,16 э отличим от по- каэателейвполученных по способу-прототипу(605120022 нН/л) 6,861-0,34 6,3710,30 6,340,32 6 097 Й 025 61842013 бэ 80-0031 60450127 6026-0119 6,350,25 0 ЛЛ 43,8 О,З 2,2 2,6 7,1 4,5 2,5 5,Сыворотка, хранивааяся без ФТФ м 6066-0116 6127-0030 6,62-0,30. 6,61.0,28 5,010,29 4,19-0,78 .317900 э 90 301820,75 совворотка раэлоэвилась 42 2,3 1,5 Кровь 2,3 23 3.7 51 По предлагаемомуспособу м е и 5,9600,21 5,53-0,20 5,73-0,19 5,88-0,22 5,63 Э 0,23 6,20 э 0,22 507220122 5,68-Оэ 21 50630017 51320019отличия отпоказателей,полученных поспособу"прототипу+ - содеркание иоцееины в пробах уменьочллось из-эа пропопкительного их хранения,- содеркание иоцевины в сыворотке крови по способу-прототипу равнялось 6,5120,22 иМ/л и определялзсь в день заборасыворотки у доморов.- содеряание мочевнны в цельной крови по способу-прототипу рав яло 51 32 , 3н сь 5 8300 23 иМ/л и определялось в.день забора в крови у доноров.+н+ - средняя величинаотличия 31582,э+5 - средняя велицина 2 отличия 31552и . количество доноров, е крови которых определялось содеряание иочевины,М - средняя величина, полученная путем статистической обработки,Э ш - средняя ошибка средней величиныТ а б л и ц а 3 и тели содерхания мочевина (в ии/л) в сыворотке крови доноров, у которых набподалнсьоказате одминимальные средние и наксималье и наксимальные отклонения от величин, полученных по способу-про ув день забора крови (в таблице представлены результаты, выбранные изгруппы, состояогей н 10 доноров Срок цзнания сыворотки, суткивитими 1 ) 1 ) 5 1 ) 10 )15 ) 20 ).10 1.05 (00 1 иии,1характеротклонений ДОНОР 5,86 .5,501,6 4,76,18 6,784,2 9,05,53 51524,8 4,2 5,77+6,45 о5,27 Мининаль мые б. С, В.Средние О.Р.И.Максимальные В.Н.И. в строке Указано содерювнле ноцевины в иН/л.в строке указано отклонение в э от показателя, полуценного по способу"прототипу. Прииечаниео+