Способ определения концентрации белка в молоке

,и 1755196 А 1 5 601 й 33/ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ для определения концентрации белка в молоке. Сущность изобретения: молоко разбавляют раствором"бромфенолоового синего, затем измеряют интенсивность флуоресценции в области 540 нм, индуцированной лазерным излученйем длиной волны 337,1 нм, мощностью 2-3 мВт, строят калибровочную кривую, по кбтброй определяют концентрацию белка в молоке. Способ позволяет проводить исследованиев течение 2 мин, 1 табл., 1 ил.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА В МОЛОКЕ(57) Использование: в медицине, в частно- . сти в акушерстве и медицинской биохимии Изобретение относится к медицине, в Недостатками известного Способа являчастности к акушерству и медицинской био- ются сложность и продолжительность выхимии, и может быть использовано для оп- полнения,ределения концентрации белка в женском и, Цель изобретения - упрощенйе и сокракоровьем молоке щение времени исследования.Известен способ определения концент- Способ осуществляют следующим обрарации белка в молоке путемизученияфлу- зом,оресценции при 540 нм пробы молока, Для проведения исследовайия молокаразбавленной дистиллированной водой в (женского или от сельскохозяйственных жисоотношении 1:20, вотных) пробу молока в количестве 0,1 млОднако данный способ недостаточно поМещают в кварцевуюкювету и разбавляточен. ют 2 мл водного раствора бромфеноловогоНаиболее близок к предлагаемому спо- синего (БФС) в концентрации 0,0016, Засоб определения белка, жира и углеводов, тем кювету с полученным растаором устазаключающийся атом, что пробу молокаоб- навливают в держатель флуоресцентнойрабатывают смесью хлороформа и метанола установки, состоящей из источника лазер(реактив Фолча), подвергают центрифугиро- ного излучения (ЛГИ) и детектора флуованию и к полученному осадку добавляют ресценции. Возбуждение.флуоресценциибиуретовый реактив. После перемешивания, осуществляют лазерным светом с длийойсмесь оставляют на 30 мин при комйатной; волны 337,1 нм, мощностью 3 мВт втечениетемпературе для образования комплекса: 60 с,Одновременноспомощьюавтоматичесине-фиолетового цвета, после чего прово-ского электронного самописца типа КПС дят фотометрию против биуретового реак- или стрелочного индикатора регистрируюттиванафотоэлектроколориметре(ФЭК)при ийтенсивность флуоресценции в областизеленом светофильтре. длины волны 540 нм, Пик интенсивности на вО ь,длине волны 540 нм указывает на относительное содержание белка в пробе молока,Для выражения количественного содержания белка в молоке в весовых единицах или процентном отношении строят стандартную (калибровочную) кривую, показывающую зависимость интенсивности флуоресценции; например, альбумина от его концентрации в водном растворе в пределах 1-10 г.П р и м е р 1, В кварцевую кювету помещают каплю женского молока объемом 0,1 мл и добавляют 2 мл 0,001-ного водного раствора БФС. Далее проводят облучение полученной смеси лазерным излучением (длина волны 337, 1 нм, мощность 3 мВт) в течение 60 с и одновременно регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм, Полученные значения интенсивности флуоресценции переносят на калибровочную кривую, построенную для альбумина (см. чертеже). По калибровочной кривой установлено содержание белка в исследуемой пробе молока 3,1,П р и м е р 2. В кварцевую кювету поме- щают каплю коровьего молока, поставляемого на молочную кухню, и добавляют к ней 2 мл 0,001-ного водного раствора БФС, проводят облучение полученной смеси лазерным излучением (длина волны 337,1 нм, мощность 3 мВт) в течение 60 с и одновременно регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм. По калибровочной кривой определяют концен- трацию белка в коровьем молоке, она равна г,г г%.Данные, полученные предлагаемым способом, совпадают с результатами биохимического анализа исследуемых проб на белок и с данными по известному способу,Они представлены в таблице.Однако время, затрачиваемое на опре 5 деление концентрации. белка в молоке известными методами, составляет около 60 мин,тогда как при использовании предлагаемого способа подобное исследование занимает до 2 мин.10 Всего проведено 150 исследованийпроб женского и коровьего молока, показавших высокую достоверность полученных результатов при минимальных затратахвремени на исследование. Это позволяет с15 высокой производительностью проводитьопределение концентрации белка в молоке.при массовом обследовании рожениц или вусловиях домашней кухни для оценки рациона питания новорожденных; а также в мо 20 лочной промышленности на поточнойсистеме,Формула изобретения25 Способ определения концентрациибелка в молоке путем исследования пробы молока с последующим расчетом содержания белка по калибровочной кривой, о тл ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения 30 способа и сокращения времени исследования, пробу молока разбавляют 0,01-ным водным раствором бромфенолового синего, воздействуют на пробу лазерным лучом с длиной волны 337, 1 нм и мощностью 2-3 мВт, 35 регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм и проводят расчет концентрации белка по калибровочной кривой.(ат,к еР) 1 Иъ М ю тф г оставитель В.Шабаевехред М.Моргентал рректор ВЯе дактор А.Ог Тираж Подписноеарственного комитета. по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж-Зб. Раушская наб., 4/б аказ 2890 ВНИИП Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101