Способ получения биокатализатора в полисахаридном носителе

(5) ОБ ЕТ ИЯ ОПИСАН ого науч- генетики организ- дователь- овского. Сороацпег Р, оГпегс 93.ммобинием их летки и а щиися при комнаПосле формироваоставляют на 20 мратуре для затверкалия.Недостаткамиются низкая мехаи невысокакатализатора нул био ния.Ц ско.П твом для и олис го с меси ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Саратовский филиал Всесоюзнно-исследовательского институтаи селекции промышленных микромов и Саратовский научно-исслеский институт химии Саратгосударственного университета(56) Нассе О., КеиМедпетйЯпчаоЫхаоп оФ асгоЫо сез пвасгсев, - Ецг 1975, и. 1, р, 291 -Кирстен М.П. Дж., Кафлен М.П.лизация клеток и ферментов включв гель. - В кн. "Иммобилизованныеферменты." - М.; Мир, 1988, с. 60 -Изобретение относится к прикладной микробиологии и биотехнологии и касается получения полисахаридных гранул, содержащих иммобилизованные включением в гель фурцелларана клетки бактерий.Из известных носителей для получения иммобилизован ного биокатализатора наиболее близким к предлагаемому является использование каппа-каррагинана для иммобилизации микроорганизмов путем включения в гель. Способ состоит в следующем: каррагинан растворяют в 0,9-ном растворе хлорида натрия, нагревают до 60 С, охлаждают и при 40 С смешивают с суспензией клеток в соотношении 9:1 до . конечной концентрации полимера 2, При 40 С добавляют смесь из шприца по каплям в 3-ный раствор хлорида калия, находя(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОКАТАЛИЗАТОРА В ПОЛИСАХАРИДНОМ НОСИТЕЛЕ (57) Использование: прикладная микробиология и биотехнология. Сущность изобретения; полисахарид - фурцелларан, набухает в растворе хлорида калия в течение 1 ч, затем его перемешивают в течение 40 мин при 80 С, Полученный раствор охлаждают до 65 С и смешивают с суспензией бактериальных клеток до конечной концентрации фурцелларана 1,5 - 33. Готовую смесь прокапывают в охлажденную до 50 С двухфаз-. ную систему, состоящую из вазелинового масла и 100-ного раствора хлорида калия. При этом формируются гранулы биокатализатора с механической прочностью 80 гlгр нулу,тной температуре (22 С). ния гранул с клетками их ин при комнатной темпедения в растворе хлорида известного способа являническая прочность грая стабильность гранул в процессе использоваель изобретения - повышение механий прочности целевого. продукта.оставленная цель достигается посредиспользования в качестве материала риготовлвния гранул водного раствора ахарида фурцелларана смешиванием суспензией клеток и прокапыванивм в охлажденную двухфазную систему.1742330 клеток состоит в следующем,фурцелларан помещают на 1 ч в 0,2;4- 5ный раствор хлорида калия. Затем растворяют его при 80 С и постоянномперемешивании, охлаждают до 650 С и смешивают с суспензией клеток после чего прокапывают в двухфазную систему - 10вазелиновое масло и 10 Д-ный раствор хлорида калия при 5 С. Гранулы извлекают ипромывают дистиллированной водой. Время, необходимое для формирования гранул,составляет 5 - 6 мин, Образовавшиеся гранулы имеют правильную сферическую форму и одинаковые размеры,П р и м е р 1. Готовят суспенэию бактерий штамма А 1 саИ 9 епез 1 аесаИз КЗЧ 21 в фи 20 состоящую из вазелинового масла и 10,4 ного раствора хлорида калия.Способ получения иммобилизованных зиологическом растворе в концентрации 2 мг сухой массы клеток на 1 мл. 4 г фурцелларана помещают в 100 мл 0,20-ного раствора хлорида калия на 1 ч при комнатной температуре (22 С), а затем перемешивают в течение 40 мин при 80 С. Готовый раствор полимера охлаждают до 65 С и смешивают с суспензией клеток в равных объемах до конечной концентрации полимера 2и прокапывают в двухфазную систему, состоящую из ваэелинового масла и 10-ного раствора хлорида калия, охлажденную до 5 С, Сформировавшиеся сферические гранулы оседают на дно сосуда, Они имеют размеры 3 - 4 мм и не требуют дальнейшего фракционирования. Время нахождения гранул в 100 ь-ном растворе хлорида калия 10 мин. Механическая прочность гранул составляет 80 г/гранул,П р и м е р 2. Готовят суспенэию клеток бактерий штамма А 1 саИцепез 1 аесаИз КЯЧ в 0,9;-ном растворе хлорида натрия в концентрации 2 мг/мл сухой массы клеток, Каппа-каррагинан растворяют в 0,90-ном растворе хлорида натрия при 60 С, затем охлаждают и при 40 С смешивают с суспензией клеток в соотношении 9:1 до конечной концентрации полимера 2; и прокапывают в 3 ь-ный водный раствор хлорида калия при комнатной температуре (22 С). После формирования гранул с клетками их оставляют на 20 мин в 3;-ном растворе хлорида калия. Механическая прочность гранул равна 25 г/гранулу.П р и м е р 3. Иммобилизацию клеточной суспензии штамма Рзеодовопаз ротЫа ТШв концентрации 1,7 г сухой массы на 1 мл проводят аналогично примеру 1, ПОД- готовленные гранулы в количестве 10 г вносят в 100 мл синтетической минеральной среды следующего состава, г/л: КэиНРО 4 30 35 40 45 50 55 6,0; КН 2 Р 04 3,0; КаС 0,5; КН 4 С 1,0,содержащую в качестве единственного источника углерода и энергии неионогенное; оверхностно-активное вещество - синтанол ДСв концентрации 0,5 г/л. Через 1 сут инкубации при 30 С при аэрации данный штамм разрушает субстрат до оста гочной концентрации в среде культивирования 30 мг/л.П р и м е р 4. Свободные клетки штамма РзецгОгпопаз ромба ТШ 18 в концентрации 1,7 мг сухой массы на 1 мл в количестве 5 мп (соответствует 10 г биокатализатора) вносят в 100 мл синтетической минеральной среды следующего состава, г/л; Ма 2 НР 04 6,0; КН 2 РО 4 3,0; йэС 0,5; ИН 4 С 1,0, содержащей в качестве единственного источника углерода и энергии неионогенное поверхностно-активное вещество - синтанол ДСв концентрации 0,5 г/л. Черезсут инкубации при 30 С при аэрации дан-. ный штамм разрушает синтанол до концентрации 150 мг/л. П р и м е р 5. Иммобилизацию клеточной суспензии штамма АсаИ 9 епез 1 аесаИз КРпроизводят аналогично примеру 1. Приготовленные гранупы в количестве 10 г вносят в 100 мл синтетической минеральной среды следующего состава, г/л; Мэ 2 НР 04 6,0; КН 2 РО 4 3,0; КаС 0,5; КН 4 С 1,0, содер-. жащей в качестве единственного источника углерода и энергии фенол в концентрации 0,5 г/л. Через 3 сут инкубации при 30 С при аэрации данный штамм разрушает фенол до концентрации 20 мг/л.П р и м е р 6. Свободные клетки штамма А 1 саИ 9 епез аесаз КЗЧв концентрации 2 мг сухой массы клеток на 1 мл в количестве 5 мл (соответствует 10 г биокатализатора) вносят в 100 мл синтетической минеральной среды следующего состава, г/л: Йа 2 НР 04 6,0; КН 2 Р 04 З,О; КаС 0,5; КН 4 С 1,0, содержащей в качестве единственного источника углерода и энергии фенол в концентрации 0,5 г/л. Через 3 сут инкубации при 30 С при аэрации данный штамм разрушает фенол до 20 мг/л,Получение биокаталиэатора в полисахаридном носителе имеет следующие преимущества: механическая прочность гранул увеличивается в 4 - 5 раз, что создает воэможность для более длительного использования (купьтивирования)в биотехнологических процессах с,иммобилизованными микроорганизмами; гранулы, сформированные предлагаемым способом, имеют одинаковые размеры, сферическую форму и не нуждаются в дальнейшем фракциОнирОвании.1742330 Составитель О.ИгнатовТехред М,Моргентал Корректор А, Осауленко Редактор И.Дербак Заказ 2262 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Ф ормул а изобретен и я .Способ получения биокатализатора в полисахаридном носителе путем приготовления раствора полисахарида, охлаждения его и смешивания с суспензией клеток микроорганизма с последующим прокапыванием полученной смеси и формированием гранул,отлича ю щи йся тем,что,с целью повышения механической прочности целевого продукта, из полисахаридов выбирают фурцелларан, раствор готовят при 80 ОС в течение 40 мин после предварительного набухания фурцелларана в растворе хлорида калия в течение 1 ч, полученный раствор охлаждают до 65 С и смешивают с суспен зией клеток до конечной концентрации фурцелларана 1,5 - 3,0, а прокапывание . осуществляют в охлажденную до 5 ОС двухфазную систему, состоящую из вазелинового масла и 10-ного раствора хлорида 10 калия.