Способ диагностики снижения резерва хемотаксиса фагоцитов

фиксируют в смеси Никифорова в течение 1 О мин, промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают по методу РомановскогоГимзы. И полученных препаратах прово"5 дят дифференцирование и подсчет клеток с помощью светового микроскопа при увелпчении 7 90. Для количественного определения содержания нейтрофи лов и макрофагов просматривают по 1 О полей зрения в каждом препарате, подсчигывают их сумму и вычисляют; среднее содержание клеток в 1 поле зрения (Иммунологические методы./Под 15 ред. Г,Фримеля. Пер., с нем. А.П,Тарасова. - И., Медицина, 1987 - с. 335),Показатели резерва хемотаксиса нейтрофилов (РХН) и макрафагов (РХИ) вычисляют по следующим формулам:20Н о - Нк Мо-Мк РХН = - -100%, РХМ = -- -хНо М М 100%, где Н о и М о - среднее содержание нейтрофилов и макрофагов в опыте (в стимулированном тесте), Н и М- среднее количество нейтрофилов н мак-рофагов в 1 поле зрения в контроле (в спонтанном тесте). Формулы опреде- ления РХН и РХМ раэработанына принци- пах математической пропорции, в кото рой количество клеток в стимулированном тесте (Но или И, ) принимается за 100%, а разница в ст:щулированном и спонтанном тестах (Н -Нили И -М )о к о К является искомой величиной. По величине РХН через 3 ч и РХМ через 12 ч судят о резервных возможностях нейтрофилов (нейтрофильная фаза хемотаксиса) и макрофагов (макрофагальная фаза хемотаксиса). При.показателях 40 резерва хемотаксиса фагоцитов в пределах 76-100% устанавливают нормальный резерв, при показателях 51-75% " незначительно сниженный, 26-50% - умеренно сниженный и 0-25% - резко 45 сниженный резерв хемотаксиса клеток.П р и м е р 1. Больной К., 12 лет (история болезни Р 438). Диагноз: острый бронхит, Йа 7-й день лечения в связи с ухудшением"состояния ребен" 50 ка было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов. С этой целью после предварительной дезинфекции кожи на обоих предплечьях (в области средней трети) одномоментно сделаны , 55 кожные "окна" размером ЗЯ 5 мм скари-. фикационным способом. Одно кожное "окно" служило дпя спонтанного теста, а другое кожное "окно", - дпя стимуликованного теста. В качестве стимулятора использовано ниэкоинтенсивное излучение гелий-неонового лазера при ППМ 0,64 мВт/см и экспозиции облучения 3 мин. Оба кожных "окна" покрыты предметными стеклами (2,5 х 2,5 см) и фиксированы к коже конечностей лейком пластырем Смену стейл у проводили через 3 и 12 ч. Результат исследования получен через 13 ч, т.е. в 1-ые сутки обследования ребенка. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 20,8, в спонтанном тесте -В3,2, резерв хемотаксиса нейтрофилов - 84,6%; через 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте - 15,2, в спонтанном тесте - О, резерв хемотаксиса макрофагов - 100%. Во время проведения исследований побочных эффектов и осложнений от лазера не наблюдалось. Эаключение: резерв хемотак" сиса нейтрофилов и макрофагов соответствует нормальным величинам. Следовательно, данный случай не требует коррекции резерва хемотаксиса фагоцитов.П р и м е р 2, В связи с реабилитацией ребенок Т, 13 лет (история болезни В 639) находился в дневном стационаре по поводу астматического бронхита (атопическая форма средней тяжести, период клинической ремиссии). С целью решения вопроса о выборе средств реабилитаций в комплексе обследований было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов. Для этого одновременно было выполнено два кожных "окна" (ЗХ 5 мм) в области средней трети обоих предплечий, ОдноИ Икожное окно оставалось интактным и служило для спонтанного теста. На другое кожное "окнодля стимуляции хемотаксиса фагоцитов воздействовали ниэкоинтенсивным излучением гелий- неонового лазера при ППИ 1,1 мВт/смф и экспозиции облучения 3 мин (стимулированный тест). Обе ранки асептического воспаления покрывали стерильными предметными стеклами (2,5 ф 2,5 см) и фиксировали в коже предплечья,с помощью лейкопластыря. Стекла меняли через 3 ч для оценки нейтрофильной Фазы миграции и через 12 ч для оценки макрофагальнойФ фазы миграции. Результат исследования получен через14 ч. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте " 40,5,/Составитель А.АносовРедактор 11.Стрельникова Техред А,Кравчук . Корректор С,Пекмар Заказ 1580 Тираж ПодписноеВЧИИПИ Государственного комитета пр изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Иосква, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский крнбимвт Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,( в спонтанном тесте - 3,2, резерв хемотаксиса нейтрофнлов - 92,13; череэ 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте - 5,53, в спонтанном тесте - 3,5, резерв хемотаксиса мак 5 рофагов " 3647. При проведении об.ледований и наблюдении в течение 1 мес после лечения осложнений и побочных эффектов не наблюдалось. За ключение; РХН сохранен, РХМ умеренно снижен. Следовательно, в данном случае необходима коррекция нарушений резерва, хемотаксиса макрофагов.Предлагаемый способ технически 15 прост и доступен для практического выполнения в лечебно-профилактических и научно-исследовательских учреждениях, позволяет быстро и точно определить резерв хемотаксиса фагоцитов. При использовании низкоинтенсивного лазера в качестве стимулятора хемотаксической активности фагоцитов в 6 раз сокращается время выполнения способа и на 2-3 суток сокращаются сроки обследования больных. При воспроизведении способа обеспечивается синхронность постановкй стимулированного испонтанного тестов и устанавливается адекватность клеточного реагирования, а также устраняется неточность результатов, обусловленная динамикой заболеваний и лечения. Использование способа в клинике повышает точность оценки функциональных свойств Фагоцитов и дает воэможность дифференцированно определить различную степень резерва хемотаксиса фагоцитов не только при сострой патоло" гии, но и при рецидивирующих, затяжных и хронических бронхолегочных заболеваниях. Точность способа цри рецидивирующей, затяжной н хронической;патологии повышается на 727-8337.,При оценке резерва хемотаксиса фагоцитов учитываются только абсолютныепоказатели, отражающие истинные резервные их свойства. Способ позволяет дифференцированно оценивать степень резерва хемотаксиса фагоцитов Идает точные критерии его нормы и сниженин. Данный способ безопасен длябольных и не имеет ни осложнений, нипобочных эффектов. При наблюдении эа50 здоровыми и 50 больными детьми впроцессе обследования и через 6-12,месяцев после него ни в одном случаене возникло каких-либо осложнений ипобочных действий. 1. Способ диагностики снижения резерва хемотаксиса фагоцитов путем измерения прироста числа этих клеток в стерильном кожном "окне", о т л нч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, облучают одно из симметрично расположенныхкожных окон излучением гелий-неонового лазера, определяют относительную разницу в количестве фагоцнтов в облученном и необлученном Окнах и при превышении числом Ьагоцитов в облученном "окне" на 75 Х и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса Фагоцитов2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что используютлазерное излучение с плотностью мощности 0,885+0,245 мВт/см при длительности облучения 3 мин.