Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей

(5)5 6 01 М 33/50 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(7.1) Киевский медицинский институт им.акад. А,А.Богомольца(56) Педиатрия, 1976, М 11; с. 27-30,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ФОСФОЛИПИДОВ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЕГКИХ У ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано в клинической практике для контроля за состоянием липидного комплекса Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть использовано для контроля за состоянием липидного комплекса конденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей.Цель изобретения - упрощение и уменьшение его инвазивности.П ример 1. Больной С.,8 лет,диагноз: бронхиальная астма, смешанная форма, средней тяжести, период нестойкой ремиссии. С 2-месячного возраста проявления экссудативного диатеза на молочные смеси, в настоящее время. эпизодически проявления пищевой аллергии по типу крапивницы, В 4-летнем возрасте появились впервые приступы удушья после перенесенного бронхита, В дальнейшем приступы провоконденсата выдыхаемого воздуха в норме и при патологии, в частности, у детей, Целью изобретения является прощейие способа и уменьшение его инвазивности, Способ состоит в отборе конденсата выдыхаемого воздуха с последующей экстракцией липидов в конденсате выдыхаемого воздуха из подкисленных растворов хлороформа. После метилирования определяют спектр жирных кислот липидов и уровень свободного холестерина из одной биологической пробы. В случае снижения содержания жирных кислот. С 18:2 и С 20:4, а также содержания свободного холестерина в липидном экстракте ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена фосфолипидов. Способ значительно проще известного и отличается атравматичностью. 1 табл,цировались острой респираторной инфекцией, резкими запахами, контактом с собакой. При постановке скарификационных аллергопроб положительные результаты с домашней пылью , шерстью собаки , яйцом курицы .2 мл конденсата выдыхаемого воздуха поместили в.пробирку с притертой пробкой объемом 10 мл, подкислили 2 - 3 каплями соляной кислоты концентрацией в соотношении 1:1, затем экстрагировали 5 мл хлороформа в течение 1 мин осторожно встряхивая. Нижний хлороформный слой отделили с помощью пипетки Пастера после 30 мин выдержки на холоде (при 40 С). Для полноты реакции пробу экстрагировали 3 раза при тех же условиях, Объединенные хлороформные экстракты концентрировалиупариванием воздуха в токе азота при 45- 50 С на водяной бане, Сухой осадок подвергли метилированию по известному методу для проведения газохроматографического анализа.Анализ метиловых эфиров проводили на газовом хроматографе серии Цветс пламенно-ионизационным детектором в изотермическом режиме.Условия анализа спектра ЖК липидов: стеклянная колонка размером 2 м и диаметром 3 мм, заполненная 5 ф ПЭГС на хроматоне М-АЧЧ-НМОЗ (зернение 0,125 - 0,160 мм), температура, С; колонки 186; испарителя 270, расход,мл/мин:газа-носителя азот) 35; водорода 35; воздуха 200, скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч, шкала чувствительности - 10 А, обьем ., пробы 1 - 2 мкл, продолжительность анализа 15 мин.Количественную оценку проводили по методу нормировки площадей и определили доли кислот в %. Погрешность определения +10.Условия анализа свободного холестерина (СХС): стеклянная колонка размером 1 м и диаметром 3 мм, заполнения 5, ЗЕна хроматоне Й-АЮ-НМОЯ зернение О,125 - 0,160 мм), температура, С: колонки 270; испарителя 290, расход, мл/мин: газа-носителя (азот) 45; воздуха 200; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч, шкала чувствительности 10 А, обьем пробы 3 - 5 мкл, продолжительность анализа 5 мин.Количественную оценку содержания СХС осуществляли методом калибровки. Индентификацию и количественный расчет проводили с помощью стандартного раствора холестерина с концентрацией 1 мг/мл, чувствительность определения 0,2 мкг/мкл,После расшифровки хроматограмм получили. ЖК : С 16:0-39;4; С 18:0-21,6; С 18:О - 31,1; С 18:2 - 7,9; С 20:4 - следы, СХС следы,П р и м е р 2, Больная М., 5 лет, диагноз: астматический бронхит, ремиссия; рецидивирующая крапивница. У ребенка проявления экссудативного диатеза с 6-месячного возраста. После приема цитрусовых отек Квинке и проявления крапивницы в 2 года. С 4 лет проявления затрудненного дыхания на резкие запахи впервые на запах ацетона), Затрудненное дыхание связано с цветением трав. Диагноз установлен впервые.фосфолипидов. 1015202530 40 45 50 Исследования по предлагаемому способу проводили как в примере 1.После расшифровки хроматограмм получили. ЖК : С 16:0 - 49,7; С 18;0-23,3; С18:1 - 23,3, С 18:2-0,5; С 20:4 - следы, СХСследы.П р и м е р 3. Группа здоровых детей(5 чел;) в возрасте 5-7 лет в анамнезе которых отсутствовала бронхиальная астма, была набрана из травматологическогоотделения,Условия. анализа спектра ЖК липидов и СХС по примеру 1.После расшифровки хроматограмм получили. ЖК : С 16:0 - 35,3; С 18:0 - 12,3; С18:1 - 23,8; С 18;2 - 18,6; С 20:4 - 2, СХС 0,2 - 0,5мг/мл.В таблице представленырезультаты реализации предлагаемого способа на группах детей с заболеваниями легких и контрольной группе здоровых детей.Преимущества предлагаемого способа; упрощение стадии экстракции общих липидов (исключение этапа выделения фосфолипидов) позволяет сократить. время наэтапе подготовки проб к газохроматографическому анализу, что обеспечивает экспрессность способа; атравматичность способа позволяет проводить многократные отборы конденсата у детей для осуществления контроля в процессе лечения; способ исключает трудоемкий метод тонкослойной хроматографии, может быть использован и для выявления лиц с повышенным риском развития бронхолегочной патологии, способ прост и легко выполним средним медицинским персоналом.Формула изобретения Способ определения нарушений обмена фосфолипидов при заболеваниях легких у детей, включающий отбор биологической жидкости, получение экстракта общих липидов и анализ жирокислотного состава фосфолипидов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и уменьшения его инвазивности, в качестве биологической жидкости используют конденсат выдыхаемого воздуха, в экстракте дополнительно определяют содержание свободного холестерина и при снижении содержания жирных кислот С 18:2 и С 20:4, а также содержания холестерина ниже контрольного уровня определяют нарушение обмена1727070Жирокислотный спектр липидов и содержание холестерина в липидных экстрактах конденсата выдыхаемого воздуха у детей Достоверные отличия от контрольной группы при р0,01,Составитель Н, Гуляевадактор Л. Пчолинская Техред М,Моргентал Корректор Н, Корольказ 1276 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10