Способ определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов

(5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР БРЕТЕН ОПИСАНИЕ ЕТЕЛЬСТВУ ОМ АВТ(54) СПОСОБ ОНИЯ ПРОНИЦАРОЦИТОВ Е- ТИзобретение отнименно к методам иссмости эритроцитов,Цель изобретенияшение точности спасоЦель достигаетсяэлектропроводностиэритроцитов и расчетренных показателей,ют наличие нарэритроцитов,Способ осущзом. сится к медицине, едования проница-упрощба и пов за счет ис плазмы и а соотнош по котором ушений следования гемолизата ения измеу определя- мембран ествляют сл обра из локтевои вены встряхивают 8 - робирке с бусами. Затем ставят в под углом 45 на 45 - 60 мин, Отазму с верхним слоем лейкоцитов цитов, повторно центрифугируют ты 10 мин при 1500 об./мин. Отбиму и объединяют ее с первой порстеровской пипеткой со дна 0,1 - 0,2 мл эритроцитов и перенотую пробирку, три раза проводят со ся 10 мин в п термостат бирают пл и эритро эритроци рают плаз цией. Пабира ют т в чис л. Мбнаучно-исследовательскиства и педиатрииьева и А,А.Ильин8)химических исследованирокоровой, 1977.ПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕМОСТИ МЕМБРАН ЭРИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования, и может быть использовано для определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов. Цель изобретения - упрощение способа. Цель достигается тем, что измеряется злектропроводность плазмы и гемолизата эритроцитов и по соотношению их устанавливается индекс ионной проницаемости, при величине которого 0,1 и выше определяют нарушение проницаемости эритроцитов. процедуру замораживания - оттаивания. Отбирают гемолизат и помещают в капилляр, в другой капилляр помещают плазму, вставляют в оба конца капилляра электроды, термостатируют (15-250 С) и измеряют электропроводность. В качестве прибора для измерения электропроводности используют омометр с переменным током, а показатель проницаемости рассчитывают по формуле Элект оп оводность плазмыЭлектропроводность гемолизатаИзвестный способ построен на оценке АТФ-активности опосредованного критерия, по которому могут судить о проницаемости мембран эритроцитов только для катионов(йа, К, Са, М 9 и Н ), Он включает 16 приемов (не считая приемы метода при определении белка по Лоури), довольнс громоздких, со сложными расчетами. Актив ность АТФ выражается в количестве продук та реакции, образуемого в единицу времен и отнесенного к единице массы белка.1712886 50 55 Из приемов известного способа наиболее сложными являются получение "теней" эритроцитов путем добавления буфера с постепенно снижающейся концентрацией эритроцитов (при этом нужно добиваться вымывания гемоглобина из оболочки эритроцита без разрыва мембраны на части), определение раздельно Ма + К -АТФ; Мо - АТФ и Са - АТФ (что требует больших затрат времени). О проницаемости мембран эритроцитов судят только по активному транспорту катионов(йа, К, Са, Мд ), не учитывая транспорт анионов (С 1, НСОз, РО 4 и т,д.).В мембране эритроцитов имеются анионные каналы, делающие мембрану эритроцита проницаемой для НСОз, СГ и т.д причем перенос их через мембрану осуществляется пассивно, т,е. без гидролиза АТФ,Предлагаемый способ прост в выполнении и доступен, Для оценки проницаемости мембран по предлагаемому способу используют амперметр и методику определения электропроводности. Метод доступен для освоения на уровне лаборантаДля сравнения достоверности обоих методов было обследовано 30 проб крови, из них 20 проб были с функциональной нагрузкой в виде гипо- и гипертонических сред для инкубации отмытых эритроцитов, Такое модельное исследование эритроцитов приводит к существенному перераспределе-нию заряженных частиц в гемолизате, что может являться прямым следствием в вынужденном изменении как пассивного, так и активного транспорта ионов через мембраны.В таблице приведены результаты анализа (30 проб) крови, проведенного двумя методами.Из таблицы следует, что проницаемость мембран изменилась, если брать во внимание средние величины (М .ф в), как при определении АТФ-активности, так и по индексу ионной проницаемости (пр), причем закономерность в изменении проницаемости мембран эритроцитов обоими методамисохраняется, но если учесть, что кровь взятаот одного донора, полученные размахи от5 максимума до минимума по АТФ-активности с 1-й до 10-й пробы больше в 4 раза, с10-й по 20-ю - в 3,7 раза, а с 21-й по 30-ю -в 8,5 раза, что свидетельствует о низкойвоспроизводимости известного метода.10 При определении индекса ионной проницаемости размах во всех трех вариантахколебался только от 1,0 до 1,2 раза, что свидетельствует о повышении точности предлагаемого метода в 4,8 раз по сравнению с15 базовым. Кроме того, более ярко выраженпроцесс, нарушения проницаемости мембран эритроцитов по индексу между контролем (контакт эритроцитов с плазмой) иопытными пробами.20 Необходимо обратить внимание на перекрестные значения величин АТФ-активности. Очень близкие величиныАТФ-активности были (например, в опытах1 и 21,или 2,11 и 22, или 4,12,24 ит.д.), хотя25 условия опыта в них различные,При определении проницаемости мембран эритроцитов по предлагаемому способуперекрестных величин, близких по значению, не имеется, что также подтверждает30 точность предлагаемого метода, в несколько раз превышающую точность базового метода определения проницаемости мембранэритроцитов по АТФ-активности,Ф о р м у л а. и з о б р е т е н и я35 Способ определения нарушения проницаемости мембран эритроцитов путем исследования физико-химических свойств. эритроцитов,отличающийся тем,что,с цельо упрощения и повышения точности40 способа, исследуют электропроводностьплазмы крови и гемолизата эритроцитов,рассчитывают отношение полученных величин и при его значении выше 0,14 и ниже0,10 определяют нарушение451712886 ф ф о о сч Ф Ф о о съ ьФ Ф л л л л л ф ф ф + 9ООООООООООоооооооооофо з с о-счсъч вфла фво СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЪ сч сч в о о о - с ъ в ф ьллфффффффКее геО О О О О О О О О О " в ооса Т о СЧСЪеВФЛфВО е аещ ещещСч о З яТо о ввфооЬ е ее е СЧ СЧ СЧ Не е еОООООООО 3 о о о о З щ 2 Т Ф ОСЧФеСО ф Ф ф Л Се) Ф ОсчФлфооовоооо: О Е йВОЛ ф В О СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ СеЭ в ЬО лФР +Ял.4 СЪ Ф В Ф Л СО В О ее е е е СЧ с о Е с ес ВфВЛ фэло О О СО СОВ ооооо СЧ СЧ еФ Рв о а в " о Т