Способ определения хемотаксиса лейкоцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ц 5 6 01,И 33/53 НИЕ ИЗОБРЕТЕН О клеток при иммуноэпидемиологических исследованиях, Выделенные из крови обследуемых лиц лейкоциты в количестве 1,0-1,5 млн/мл вносят в лунки планшет, содержащие питательную среду, с размещенными в них несколькими капиллярами. Капилляры предварительно заполняют составом, содержащим агар и питательную среду при их соотношении соответственно равном (0,8- 1,0):100. Капилляры инкубируют в течение 8 - 10 чизвлекают из лунок планшет и измеряют длину пробега мигрировавших клеток с помощью микроскопа с окуляром-микрометром. Производительность способа увеличена в 4-5 раз, а точность - в 3-5 раз выше, чем в способе-прототипе. 3 табл. ги Под редакна, 1987, с.(54) СПОСОБ ОПРЕ СИСА ЛЕЙКОЦИТОВ (57) Изобретение от частности к иммунол ния является повыше водительности опр ЕЛЕНИЯ ХЕМОТА при комнатной температуре для набухания и пропитывания агара. Затем агар в среде 199 помещают в водяную баню, где при температуре кипящей воды происходит расплавление агара. Далее золю агара дают остыть до 50-55 С и в него вносят при перемешивании 1 мл среды 199, содержащей 0,16 мл (8%) эмбриональной телячьей сыворотки,0,0008 г(0,04%) глютаминовой кислоты и 0,012 мг (из расчета 0,86 мг на 100, мл среды) К-формилметиониловых пептидов.Капилляры плоские, 5-канальные,40,25 мм, заполняют агаровым золем, для чего их опускают в вертикальном положении в вышеописанный состав, представляющий собой жидкость (т - 50 - 55 С). Для застывания жидкости в капилляре их оставляют при комнатной температуре, после чего извлекают, Далее клеточную взвесь раскапывают по 0,1 мл в лунки планшет. Туда же в вертиЫ ОО ОО СР овыш- едителксиса.щим обГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Иммунологические метоцией Р. Фримеля. М.: Меди333-338. осится к медицине, в гии, Целью изобретение точности и произеделения миграции Изобретение относится к клиническойиммунологии и может быть использованопри диагностике нарушения хемотаксисалейкоцитов у обследуемых лиц,Целью изобретения является иние точности и увеличение произвоности способа определения хемотаСпособ осуществляется следуюразом.Объектом исследования служит гепаринизированная кровь в количестве 2 мл, ко-,торую смешивают с 2 мл 1 %-ной желатины,отстаивают при 37 С в течение 10-15 мин.Надосадок извлекают, отмывают в среде199, просчитывают клетки и составляют клеточную взвесь с концентрацией 1 млн/мл.,Затем готовят состав для заполнения капилляров, Для этого берут навеску 20 мг порошка агара(ОЫео), К ней добавляют 1 мл среды199. Выдерживают смесь в течение 20 мин 1712880 А, Ошибка опь 0 каэатель нт аль 0+ 0,8 и =10=10 0,4 382 0,4 инаобега 5+ 0,5и =10 кальной позиции помещают капилляры опытные и контрольные. Инкубируют 10 ч извлекают капилляры и измеряют длину пробега мигрировавших клеток с помощью микроскопа с окуляром-микрометром ув.10 х 25).П р и м е р . 1. Нейтрофильную взвесь получают путем седиментации на градиенте плотности МРВ-М, Чистота, выделенных нейтрофилов составила 95-98, жизнеспособность 98 по исключению трипанового синего, Осуществление способа отличается от описанного в примере тем, что нейтрофилы вносят в лунки планшетв количестве 1,5 млн/мл,Капилляры заполняют смесью следующего состава: эмбриональная телячья сыворотка 13 мл, глютаминовая кислота 0,06 г, М-формилметиониловые пептиды 0,0086 мг, агар 0,8 г, среда 199 до 100 мл, а инкубацию проводят в течение 8 ч.Результаты опыта по определению длины пробега в 10 каналах капилляров представлены в табл. 1.Результаты миграции нейтрофилов из чистой взвеси представлены в табл. В 2. Результать 1, указанные в таблицах и примерах, соответствуют числу делений линейки в окуляре при увеличении, окуляр 10, обьектив -25. При необходимости для перевода результатов в миллиметры. полученные значения делят на 25. Разбросы .определения миграции в каналах капилляра составляют 1,6 - 3%, Результат фиксируется в виде средней арифметической,Сравнительный анализ предлагаемогоспособа и способа-прототипа представлен втабл. 3,Под порядковыми номерами (1,2 и т.д.)5 представлены по способу-прототипу абсолютное количество мигрированных клетокна обратной стороне мембраны, а по предлагаемому способу - длина пробега с помощью окуляра-микрометра (ув. 10 Х 25).10 Как видно из таблицы, ошибка опытаспособа-прототипа превосходит ошибкупредлагаемого способа в 3-5 раз при определении хемотаксиса, т.е, точность предлагаемого способа в 3-5 раз выше по15,сравнению со способом-прототипом,Формула изобретения Способ определения хемотаксиса лей коцитов, включающий их выделение и определение длины пробега мигрирующих клеток, отл ича ю щи йс ятем,что,с целью повышения точности способа и увеличения его производительности, лейкоциты в коли честве 1,0 - 1,5 млн,наносят в лунки планшетс питательной средой, в них в вертикальной позиции размещают капилляры, заполненные средой, содеркащей в 100 мл эмбриональную телячью сыворотку 8-13 мл, 30 глютаниновую кислоту 0,04 - 0,06 г, И-формил-метиониловые пептиды 0,0086-0,86 мг, агар 0,8-1 г, инкубируют в течение 8-10 ч,, извлекают капилляры и измеряют длиныпробега мигрирующих клеток с помощью 35 микроскопа с окуляром-микрометром.1712880 Таблица 3 дактор В.Трубче орректор Н.Король Заказ 533 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 оизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 а= 226,620гп = 71.663РоС внесением д= 1,7 в=О, Р =1,8 оставитель Б,Мануйехред М,Моргентал д= 2,2 а =0,66 Р = 2,7