Способ консервации изолированных клеток печени

(56) Алиев М.А сервации изоли ни. - Здравоох 1982, Р 3, с. (54) СПОСОБ КО НЫХ КЛЕТОК ПЕЧ ы конлеток печ рованныхранение74-76.НСЕРВАЦИИЕНИ азахс гоном 2 - 4 о ции.ОЛИРО Фаи 4 ГОСУДАРСТаЕННЦЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИИ(71) Казахский научнкий институт клиничементальной хирургиинова(57) Изобретение может быть использовано,в трансплантологии для создания банка изолированных клеток печени. С целью увеличения жизнеспособности клеток на 1 мл среды изолированные клетки печени помещают в охлажденную до 2-4 С среду 199. Герметично подсоединяют вакуум-отсос-ии создают разрежение 1 О .мм рт.ст. Ампулу заполняют газообразным аргоном (данную процедуру повторяют 2-3 раза). Ампулы запаивают и храонят при 2 -4 С. На 10 и 20 сутки ампулы вскрывают, заменяют надосадоч ную среду 199 свежей, заполняют ари запаивают. Хранят ампулы приС до 30 сут от начала консерва 1 табл.Изобретение относится к медицине, преимущественно к трансплантологии, гепатологии и цитофизиологии, и может быть использовано для создания банка изолированных клеток печени.Цель изобретения - увеличение жизнеспособных клеток на 1 мл среды путем хранения взвеси клеток в атмосфере аргона.Способ осуществляют следующим образом.Изолированные клетки печени помео щают в охлажденную до +2-4 С среду 199 в концентрациях 1,25 10 - 20 хб х 10 клеток/мл. При +2-4 С к ампулеб о с взвесью изолированных клеток печени герметично подсоединяют вакуум-отсос и создают разрежение-10 мм рт.ст., после чего, не нарушая герметичности, ампулу заполняют газообразным аргоном (указанную процедуру повторяют 2-3 раза) . Ампулы эапаивают с помощью горелки и хранятопри +2-4 С. На десятые и двадцатые сутки ампулы вскрывают, осторожно удаляют надосадочную среду 199 и заменяют ее тем же количеством свежей среды 199, охлажденной до +2-4 С, после чего заполнение ампул аргоном и запаивание их проводят вновь,Храонят ампулы при +2-4 С до 30 сут от начала консервации.Результаты 30-суточной консервации изолированных клеток печени, пров денной согласно предлагаемому способу в атмосфере аргона (А), в сравнении с консервацией в атмосфереовоздуха (В) при +2-4 С с двухкратной сменой среды 199 ( , М+ш) представлены в таблице. 289437 2ток печени в атмосфере аргона на 468 , АСТ - на 25-72 , калия - на 2940%, кальция - на 8-17%, меди - на5-20 , железа - на 6-22%, а концент рация натрия выше на 2-9%, что свидетельствует о менее выраженном внутриклеточном отеке. Закисление средыпри использовании аргона наступаетзначительно медленнее.1 О Электронно-микроскопические исследования подтверждают, что использование аргона согласно предлагаемому способу позволяет уменьшитьвнутриклеточный отек, лучше сохранить мембранные структуры, ядро,митохондрии.Консервированные согласно предлагаемому способу изолированныеклетки печени биологически активны -при трансплантации в условиях остройпеченочной недостаточности они компенсируют утраченные функции поврежденной печени, поддерживают метаболизм в течение "критического периода недостаточности печени, усиливают в ней репаративно-восстанови-.тельные процессы и создают условиядля выздоровления 43,3-70 животныхс моделью острой печеночной недос- .таточности.Использование предлагаемого способа консервации изолированных клеток печени обеспечивает по сравнениюс известными способами пролонгирова 35 ние срока хранения и уменьшение степени их гибели, что позволяет создать 30-суточный банк, где имеетсяот 52,8+0,4 до 90,3+ 3,2(от исходного количества) жизнеспособных40 и функционально активных клеток.Данные биохимических методов исследования и атомно-абсорбционной спектрофотометрии о содержании в среде консервации (среде 199) веществ, по которым можно судить о степени разрушения клеток, показывают, что концентрация АЛТ достоверно ниже при хранении изолированных клеформула изобретенияСпособ консервации изолированныхклеток печени в закрытой стерильной 5 емкости, содержащей газ и среду 199,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что сцелью увеличения жизнеспособных клеток на 1 мл среды, емкость над средойзаполняют газообразным аргоном.1289437 Срок наблюдения, сут Способ Среда консервации 10 20 30 в среде, клет/мл Среда199 20 е 10 78,6+0,4 59,+0,8 52,8+0,4 А 66,2+1,1 47,7+0,6 43,9 ф 0,9 В 68,5 ф О, 5 62, 7+0,9 55,4 ф 0,6 1010 А 66,411,60, 1 ф 0,5 48,740,8 В 78,7 ф 1,3 66,6+1,6 57,9+1,2 5 1 О В 2,510 А 79,2 ф 2,2 65,1+2,5 59,6 ф 2,8 В 1,2510 96,1+2,6 93,5+3,2 90,3+3,2 88,4+3,2 78,012,7 73,4+2,В Составитель М, Позняк Редактор С. Лысина Техред Д.Олейник Корректор В. БутягаЗаказ 7834/3 Тирвк 653 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5