Способ выделения сперматозоидов

) , 3 (1 ц ", ОСВ.".сГОСУ/ГГСТ 1 Г сЛЙ КД,;. Г Г ГО 1.".ЭГРЕТЕИЯМ И О ГК ЬИЯМ ТР 11 Г 4",г Г СССР С 1,И-ЬЕ ЫЗОБРЕТ:БКЯК Р.ВТОРСКОЛУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(7 ) /сстсзхански 11 госудэрст енный медиЦ 11 нский инст Гут им.(, В.Луначарского(56) Функциональные методы исследованияв биохимии,/Под ред. ЦОкно, - Киев, 1981,с.182, 184,(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СПЕРУАТОЗО- ИДОВ Изобретение относится к медицине, аи.лснно к биохимии, и ма:(ет быть испагьзо.яэна, в частности, для лабс рата ного анализа спермзтсзаи;Ов,Цельа и обретения является повышеНИЕ В ЬХСДаЕЛЕЕСГО ПРО иУКта,Образец спермы смешизается с растворам г.пэ;1 на до канчнсй ханс,е,тр,",ци " -3;Ь с паслелу 1 ощи 11 центрифугиравэнием. Впро чз аег 1 ам соасах испалсьзуется нОсОВГааа 1 З аГГЧ 1 атИН 1 Раит СГ 1 Ематазас 1 д:1. Иссл ,уе.лля аггл 1 стс 1 нацссяС; СПЕЧ стся 111 .р-. с 1;Лси:В ВЗОИ"С-. Ь тГ 1 с 1 Г;.1 ар;1 Нд с 1 Е СЛКа ЛастС,Ерс 111 а,пакры "зз арго снап аОзаи;.сы. Уеханлзм разРуца "."ри ст 1 а 1, ссз" к т е счижеи С-г,-,., 1.,(1, и иЬ,р,И и оим и.гии;, Р н- Ст и и и. т, Кон(57) Изобретение относится к меди 1 ине. э именно к биохимии, и мо (ст б 1;ть ,;спользавано, в частности, для лаборатоонаго анализа сперматозоидов. Цельа изобретения ЯВЛЯЕТСЯ ПОВЫШЕН; Е ВЫХСДэ ЦЕЛЕО; -, ПРадукта, Поставленная цель достигается 1 ем, что образец спермы смешива от с раствором гепарина до конечной его концентрации 2 - 3 с последуощим центрифугировэнием. Способ позволяет г,овысить выход целевого продукта до 84,9,4, что почти в 2 раза выше прототипа. 2 табл. троль за осаждением сперматозоидов проводится путем подсчета их числа в надасадочной жидкости, при использовании ГдфЭ рина Си 1,ии аЕоо 81", Саог.аМ тазаидав. Т:ким образам. использование гепарина приводит к повышениго вьхода спеоматозоидса,Прсдлагаемый спасаа апробирован ь результате исследований 23 Образца спермы. Во всех набладениях пслуч н пслакительный з."фект - повышение зффективнастсгОба (табл 1 сппсбэ ияВ табл,1 показана злиссилссть аса.;:дсеНИслвр 11 ЭТСЗО,саа От УС 11 цатаС.с Гр иРИН. П р и ь е1 , -1.р;лэ ст бс,"ь 1;ега С дав 36 мл спспмь сГ 1 с;Блзтс,с гл 15"-ного рзст;",р .епзрпиа (ло конечной ко;цвнтрэции ,.),".,з-Ге цвигр:.,угруют при 000 об/м;". в те е:г.-: 10;.",. Чэлччеиный осадок исполь.у от для приготовления в 1 ззков, 8 надосг :,)чи,зй .идкости 1 одсчет сперзтозоид"в,",:- 2, 10 .П р и м е р 2. Э;.:; лт бель ного А 10 лет, сбьсм 3 0 мл, кол.г:;ство сперматозоидов 100 10. Для в 1 деления спер лето:оидов 2,0 мл спер:лы смв.вив:,от с 0,5 мл 10",Л-ного гепарина (до ко е:; сй конце трэци 2) и далее центрифуг;.руют при 3000 сб/мн в течение 10 мии. Г олучеинь й осадок спсрматозоидов используют для выделеня аросина, 8 надоса".,ч:.ой жидкости подсчет сперматозоидов "вля 1 от око, о 17 10".П р и м е р 3. Эхкулхт здорзвгго человека 3., 22 лет, сбь",.м 2,5 мл, число сперматозоидов 53 10, Для выделения сперглатозоидов 2,0 мл спеомы смсживают с 0,5 мл 10,",-кого гепарииз (до конечной концентрации 2";.,) и далее центрифугиру,от при 3000 об/мин в течение 15 мин.1 олученный осадок содержит сперматозоиды. В надосадочной жидкости осталось 11,2 10" сперматозоидов,П р и м е р 4. Эякуллт здорового человека УЗЗ года, обвей 4,5 мл, число сперматозоидов 75.0 10. Для выделения сперматозоидов ЗЯ л спермы сме;вивают с 3,0 мл 6-ного раствора гепзрииа (до конечной конце. трзции З,.) и цеитрифугирупри 3300 сб/м, и 5 мии Получеииьй осадок использ,/аког для полче 1 ия кросига 8 иадосадочиой жидкости осталась 8,2 10" Спер 1 латозои Яв.П р и м е р 5, Эхкулят здооового челсвека П., 29 лет, онем 5,0,л, ко;.част о сперматозоидов 130 10. Для выделения сперматоэои,;оа 3,0 мл спермы с;.сшивают с 1,0 мл 10",:-ного раствора гепарина (до конечной кокцеитрзци 2,5;) и,феитри.:угируат пои СГО сб/:, 5."л;1, Получ нный осадок. используют .,ля получения акросина. Б кадосадочной жидкости осталос. 29 10 сп:;о.атоэои,озП р и м е р 6, Эякулят больного А., 42года, обьем 3.2 мл, Количество спермзтоэо 5 идол 65 10. Для выделения сперматозоидов 3,0 мл спермы смеьивают с 1,0 лл10,.;"ного раствора гепарина (до конечнойкоицеитрацли 2,5) и цснтрифугируот при3000 об/мин 10 мин, Полученный осадок10 используют для изготовления мазков. 8надосадочной жидко:ти число сперматозоидов 15 10,Способ неосуществим пои концентрациях гепаринз менее 2%, так как при этом15 значительно снижается зггл:отииация сперматозоидоь, При концентрациях более Зоьрезкого увеличения агглю 1 анирующей способности гепарина не наблюдается и неимеет смысла применять более высокиеконцентрации (табл.1).20 8 таол.2 показана эффективность выделения сперматозоидов.В предлагаемом способе по сравнениюс известными эффективность выделениясперматозоидов составляет 84,9;ь. Прове 25 денное выделение по известному способупоказало, что осаждается только 47,4 О/,спеэлатозоидов (табл,1), Таким образом,предлзгае;лый способ почти в даа раээ (точнее в 1,79 раза) более эффективен.30 Указанные преимущества позволяютиспользовать предлагаемый способ в лабораторном исследовании спермы и научныхисследованиях по биологии и биохимии репродукции.35Формула иэоб рете ни я Способ выделения сперматозоидов,включающий центрифугировэние образца спермы при 3000 об/мин в течение 10-15 40 мин,отличающийся тем,что,сцельюпозыв.гния выхода целевого продукта, к образцу спермы добавляют гепарин в конецкой концентрации 2-3%.,1 ос то 1 Состаеитель,Тс"ениндз(тор 1 л,Шуллз Техред У.Уоргентал Корректор С.Черн оисноеотхрытиял при ГКНТ СС