Способ идентификации генотипов африканского проса

(5)5 А 01 Н 1/00, 1/04 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНОТИПОВ АФРИКАНСКОГО ПРОСА(57) Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекИзобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекции и семеноводству биохимическойгенетики, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов игибридов африканского проса.Цель изобретения - повышение точности и.информативности исследования,Способ состоит в том, что спирторастворимый белок семян-пенисетин извлекаетсяизопропиловым спиртом при нагревании иразделяется электрофорезом в пластинчатом полиакриламидном геле с последующим проявлением пенисетиновыхкомпонентов трихлоруксусной кислотой иокрашиванием кумасси В - 250, определением мобильности каждого компонента, составлением белковых (пенисетиновых) .формул линий и сортообразцов африканского проса, ЬО 1687138 А 1 ции и семеноводству, биохимической генетике, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса. Целью изобретения является повышение точности.и информативности исследования. Способ состоит в том, что спирторастворимые белки извлекают изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей, и идентификацию проводят по белковым формулам, располагая компоненты спектра относительно реперного компонента Вм, 1 табл,Способ иллюстрируется следующими. примерами.П р и м е р 1. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка, отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 65 изопропанола, перемешивают и помещают в водяную баню на 1 ч при 60 С, После центрифугирования при 7000 д в течение 15 мин надосадочную жидкость собирают и упаривают досуха под феном, Полученный осадок растворяют в 100 мкл раствора, содержащего 8 М мочевины, 10 сахарозы, 5 2-меркаптоэтанола и 0,6 уксусной кислоты и. оставляют на 0,5 ч при комнатной температуре, Затем раствор белка нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин и наносят в 1-сантиметровый "карман" геля 40 - 50 мкл.Электрофорез проводят в пластинках полиакриламидного геля (ПААГ) размером 110 х 110 х 1 мм, содержащего 10 акриламида, 8 М мочевины в качестве катализирую 1687138щей системы используют аскорбиновую кислоту, сернокислое закисное железо, ТЕМЕД и персульфат аммония. Электрофорез ведут 30 мин при постоянном напряжении 250 В, а затем еще 4,5 ч при напряжении 400 5 В, После окончания электрофореза гели фиксируют в течение 1 ч в 12,5 раствора трихлоруксусной кислоты, затем окрашивают в течение 2 - 3 ч при покачивании в 0,001-ном растворе кумасси В, приго товленном на 12,5-ном растворе трихлоруксусной кислоты. Затем гели заливают дистиллированной водой и замеряют относительнуюю электрофоретическую подвижность(ОЭП) всех окрашенных белковых зон. 15 За реперный принимают характерный, встречающийся во всех образцах мощный компонент в средней части геля, ОЭП которого условно принимают эа 50, ОЭП остальных измеряют на специальном устройстве. 20 приняв за точку отсчета верхнюю границу геля. Компоненты группируют по подвижности: А - субфракция от 0 до 35; В - субфракция от 36 до 59 и С-субфракция от 60 до 100 и составляют пенисетиновые фор мулы для каждого генотипа см.таблицу 1). П р и м е р 2. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 2 ООмгмукии заливают 600 мкл 60.30 изопропанола, перемешивают и помещают в водяную баню на 1 ч 15 мин при 60 С.Остальную процедуру осуществляют по примеру 1,П р и м е р 3. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 707 ь изопропанола, перемешивают и помешают в водяную баню на 45 мин при 60 С, Осталь-, ную процедуру осуществляют по примеру 1.Пенисетиновая формула характеризует каждый сортообразец африканского проса, на ее основе цифровые и буквенные (паспортные) данные можно хранить в памяти ЭВМ,Предлагаемый способ биохимической идентификации генотипов африканского проса отличается объективностью, надежностью, экспрессностью при распознава; ни и сорта образцов, возможностью хранения информации в памяти ЭВМ, .Ф о р мул а изобретен и я Способ идентификации генотипов африканского проса, включающий экстракцию спирторастворимых белков из семян,.их электрофоретическое разделение с получением белковых спектров и идентификацию генотипов путем анализа компонентного состава полученных спектров, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности и информативности исследования, экстракцию проводят изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей и при анализе компонентного состава определяют относительную электрофоретическую подвижностькаждого компонента, принимая за реперный компонент Вбо.68 - 78 63 57 19 4 Э Э 7 63 65 68 - 78 63 65 68 - 76 Х57 19 19 25 32 92 92 92 92 Х57 43 43 25 32 25 32 57 50 19 57 19 50 19 25 32 57 57 43 ЗО 92 10092 59 50 9 57 К К 2 45 65 68 - 78 92 100 65 68 - 78 92 100 45 50 57 19 50 53 К 1 О 57 ХеК Остнстое 1 сз 92 92 65 68 78 57 50 43 65 68 - 78 57 50 4 Э 43 68 - 78 59 63 57 Составитель В. ДемкинРедактор М, Недолуженко Техред М.Моргентал Корректор С.Черни Заказ 3654 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-.издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 ХОстистое 11 Х 125 ХК25 32 25 3232 25 32 34 25 3225 3225 32 34 25 32 65 68 - 78 65 68 72 78 65 68 72 78 48 - 78 65 - - 78 68 - 78