Способ определения скорости образования костной ткани

(088,1.Ап77. СКОРОСТИ1 И тся к медитологии и ение точнос животному вв азец костно 3 сме ы абсолютно й смене).907. Изобретениеа именно к травЦель -ба.Способ га г е носитс опедии.посоатологии и о илметакрищие сменылютныйный метилаключают в Образец лат, пров по 24 чв спирт - 1 одят через следу каждой: 1/2 абс /2 стабилизирова т (мономер): три азом,Иивотдят тетр20 мг/кглом 10 д ены става ета ому внутривенциклин гидрохлвеса животногей. Через 3 дизвлекают кос рид в дозе илиз с интервая после второйь и выпиливамети нъекции з толщинои затв из нее поперечн 2 бр т 1 сутки в 60 Х- инкубируют вовного фуксина вчение 1,0-1,5 ч,в батарее спирентрации (703,ец Фиксируюте. Образеастворе осспирте в т ном спир5 Е-ном рбОЖ-номзатем отов восх езвоживаютодящей копц в ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОСТНОЙ ТКА (57) Изобретение относи цине, а именно к травма ортопедии. Цель - повыш способа. С этой целью дят костный маркер, обр повыпение точности сосуществляют следующим об,801684674 сткани экспериментального животного инкубируют в течение 1-1,5 ч в 57-ном растворе основного фуксина в 602-ном этиловом спирте. Затем готовят серийно срезы через 150-200 мкм. После этого определяют суммарную площадь костной ткани, образованной эа период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах. Затем находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной тканиПрименение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравнению с прототипом за счет оценки объемной скорости обра. зования кости. ированного метилметакрилата мономера): предполимеризованныйлметакрилат:свежий предполимериованный метилметакрилат в форме дляердевания. В этой среде образец омещают на 2-3 сут в термостат при емпературе 37 С, располагают в центое будущего блока в вертикальном поожении, на две формы, исследуемой тороной вниз.Готовый блок обтачивают, придаая ему форму цилинлра диаметрон5-7 см и высотой 1 см. 11 зучаемую сто рону блока шлиФуют на шпийовальцомкруге для Выделения поверхности шлцФаи получеция параллельности поверхнастей блока. Параллельность поверхностей констролируют путем измерениятолщины блока в трех равцоудадецныхточках у его краев.Поверхность кости полируют ца ОФотобумаге до исчезновения царапин.Микроскопируют поверхность кости подбпюоресцетным микроскопом с Воэбуждаюцим Фильтром (максимум пропускания в диапазоне 420-460 нм) и барьерным Фильтром (максимум пропускация520 нм).При увели сеии микроскопа 60 хФотограФируют все участки костнойткани, заключенные между двумя полос - 20ками маркера, и определяют их пл 4 адьпутем накладывания сетки и подсчетаквадратов, приходящихся на эту кость,Квадраты, частично занятые к.;стью,считают как 0,5 квадрата, 25При увеличении микроскопа 10 хс помощью сетки, встроенной в окулярили наложенной еа поверхность образца. определяют общую площадь костнойткани шлиФа путем подсчета квадратов, приходящихся на кость. Квадраты, частично занятые костью, считают как 0,5 квадрата.ПлФуют, коцтролир.,я параллельностьповерхцс стей, и затем полируют поверхность блока, с тем чтобы получитьпоследующгй шлФ кости, расположенныйна расстоянии 150200 мкм ат предьдущего.Аналогичныь способом исследуют 40заданное количество серийных поверхностей (эадаццый обьем костной тка ни).Суммируют площади новообразаваннойкости всех шпиФов, 45Суммируют площади костной тканивсех шпиФов.Скорость образования костной ткани определяют из отношения полученныхпоказателей,П р и м е р 1. животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид израсчета 20 мг/кг веса, Через 10 сутповторно вводят гакую же даэу тетра,циклина гидрохлоргда. Через 3 сутизвлекают поперечный срез серединыдиафиза правой малой берцовой коститолщиной 2 мм и Фиксируют его в60;,.-ноь спирте в течение суток. алее ицкубируют его в 5%-цам растворе основного Фуксина в 60%-ном спирте в течение часа и заключают в метилметакрилат. Для этого образец последовательно проводят через следующие среды: 70%-ный спирт, 90%-ный спирт, три смены абсолютного спирта, 1/2 абсолютного спирта - 1/2 стабилизированного метилметакрилята (мономера), три смены стабилизированного метилметакрилата (мономера), предпалимериэоваццый метилметакрилат, свежий предпалимеризованный метилметакрилат в Форме, соответствующей будущему блоку. Р каждой смене перед окончательным помещением в Форму для затвердения образец находится в течение суток.3 атвердевание происходит в течение 2-3 сут в термостате при 37 С, После этого затвердевший блок извлекают из Формы, обтачивают его для придания Формы цилиндра диаметром 5-6 см и высотой 1 см. Образец располагается в середине блока, причем его изучаемая поверхность примыкает к одной из поверхностей блока. Эту поверхность блока шлиФуют на шлиФовальном кругеФ для получения ее параллельности с противоположной поверхностью и выделения костной поверхности. Параллельность поверхностей контролируется измерением толщины блока в трех равно- удаленных точках у его краев, После этого полируют костную поверхность на Фотобумаге до исчезновения цараг,иц и проводят микроскопию костной ;:оверхности под Флюоресцентным микроскопом при падающем освещении. При этом ФатограФируют все участки кости, заключенные между полосками маркера, гри увеличении микроскопа 60 х. На ФотограФиях при увеличении 240 х определяется площадь кости, заключенной между полосками маркера, путем наложения сетки и подсчета квадратов сетки, риходящихся на нее. Площадь ноьаобразованцой кости данного шпифа составляет 0,22 мм . При микроскопии при увеличении микроскопа 10 х с помощью сетки, встроенной в окуляр, определяют площадь костной ткани путем подсчета квадратов сетки, приходящих ся на кость. Площадь кости составпяет 7,41 мм.Далее шлиФуют и полируют поверх- ость блока, с тем чтобы и лучить сне;.;ующий шлиФ кости, расположе 1 ьй:а расстоянии ,. 0 1 км ат Гредыцщего. По13 ммрость костеобразования:37,3 ммМ 0,035, или 3,5%. Таким образом, кость, сформированная эа 100 дней составляет 3,5% в обгем объеме кости. нению с прототипом за счет оценкиобъемной скорости образования кости. Ф о р м у л а изобретения Составитель А.Бобров РедактОр А,Маковская Техред М.Моргентал Корректор Н РевскаяЗаказ 3502 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина,101 5 16846 лученный шлиф исследуют как опипано выше. Площадь новообразованной кости в нем составляет 0,27 мм, а общая площадь кости - 7 50 мм. Аналогичу5 ным способ м получают и исследуют геще 18 шлифов проходя таким образом 1 мм длины кости.Суммарная площадь костной ткани, образованной за период между введе О ниями маркера во всех шлифах, составила 5,41 мм. Суммарная площадь костной ткани во всех шпифах - 150,01 мм".Скорость образования костной ткани определяют путем нахождения отноше ния между полученными показателями (она составила 0,036).П р и и е р 2. Животному внутривенно вводят тетрациклин гидрохлорид иэ расчета 20 мг/кг веса. Через20 10 сут повторно вводят такую же дозу тетрациклина гидрохлорида, Через 3 сут извлекают поперечный срез сере" дины диафиза правой малой берцовой кости толщиной 2 мм, фиксируют его в 60%-ном спирте в течение суток, инкубируют в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном спирте в течение 1,5 ч и заключают в метплметакрилат. Дистальную поверхность среза 30 поэтапно шлифуют. Поверхности шлифов изучают с помощью флюоресцентного микроскопа. Расстояние между соседними шлифагй составляет 200 мкм. Всего исследуют 5 шлифов, что соответствует толщине среза кости 1 мм. При микроскопии каждого шлифа фотографируют костную ткань, заключенную между двумя полосками маркера (т.е. кость, сформированную за период меж ду введениями маркера). Площадь сформированной кости определяют на фотографиях с помощью сетки. Кроме этого, для каждого шлифа при малом увеличении микроскопа с помощью сетки, встро 74 6енной в окуляр, определяют площадь костной тканиПлощадь костной ткани равна разности общей площади среза кости и площади костно-мозговой полости.Суммарная площадь образованной за 10 дней кости для изученных шлифов составила 1,3 мм, а суммарная площадь костной ткани - 37,3 мм, Ско 1Применение способа позволяет повысить точность определения скорости образования костной ткани по сравСпособ определения скорости образования костной ткани, включающий введение экспериментальному животному маркера н оценку его отложения, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, об разец констной ткани инкубируют в течение 1,0-1,5 ч в 5%-ном растворе основного фуксина в 60%-ном этиловом спирте, готовят илифы серийно через 150-200 мкм, определяют суммарную площадь костной ткани, образованной эа период между введениями маркера во всех шлифах, определяют суммарную площадь костной ткани во всех шлифах, находят отношение полученных показателей и определяют скорость образования костной ткани.