Способ определения уровня клеточного деления

(51)5 С 1 30 ОПИСАН К АВТОРСКОМУ Т ТЕЛ ЬСТВУ ологии и гет д 9 е, 9 гозотп08,РОВН го делени к в данной ГОСУДАРСТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(71) Институт молекуля рнойнетики АН УССР(56) М 1 пот С.Я,: Тпе ргоЫепзапб беатп, - Ркаапз Бопз,4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕКЛ ЕТОЧ НОГО ДЕЛ ЕНИЯ Изобретение относится к биологии, в частности цитологии, и предназначено для определения уровня клеточных делений.Способ рекомендуется использовать во всех случаях, допускающих микроскопирование фиксированной клеточной ткани, например, при изучении действия мутагенов, биологически активных веществ и других агентов на растущие клетки, при изучении онкогенеза и в иных целях.Целью изобретения является повышение точности способа и его унификация,Способ состоит в измерении размера клеток в любой заданный. момент на протяжении времени роста ткани и вычислении количества клеток (в процентах), находящихся в состоянии собственно деления и последующего роста по формуле Оо - Од )1000,5 Оогде Р" - уровень клетклеток в ф,Оо - средний размер кткани при отсутствии делени(57) Изобретение относится к биологии, в частности цитологии, и предназначено для определения уровня клеточных делений, Целью изобретения является повышение точности способа и его унификация. Изобретение предусматривает определение уровня клеточного деления по формуле Р" = Оо - Оп),100 6:0,50 о, где Р" - уровень клеточного деления; Оо - средний размер неделящихся клеток в анализируемой ткани; Эп - средний размер клеток в заданный момент времени,Оп - среднии размер клеток в анализируемой ткани в данный момент.Способ допускает использование любых методик приготовления цитологических препаратов, на которых можно исследовать необходимое количество клеток, в частности, возможно использование следующей методики;Фиксация материала в растворе Карнуа (6:3:1) - 2 сут.Хранение в 96 спирте неограниченно.Пропитка материала в смеси 96 этанола с концентрированной соляной кислотой (3:1) - 45 мин при комнатной температуре.Мацерация в этой же смеси при 60 - 20 мин.Дополнительное фиксирование клеток с одновременным устранением иэ ткани остатков соляной кислоты - несколько смен на протяжении дня в спирт-уксусной смеси (3:1).Окраска в ацеторсеине до 3 сут.Дифференциация окрашивания в 45- ной уксусной кислоте каждого образца ткани индивидуально.=49,0 Удаление включений путем нагреванияв 45%-ной уксусной кислоте (вплоть до закипания) или в более разбавленных ее растворах,Приготовление временных препаратов. 5П р и м е р 1, У одной из линий клеточнойкультуры золотого корня ВЬобоа гозеа, вконце пассажа (на 50-й день), когда клеточные деления отсутствуют, а средний размерклеток в связи с этим в данном пассаже 10является максимальным, он составляет100,4 мкм, Пир этом уровень клеточных делений принимают за О, Требуется определить в процентах какой уровень клеточныхделений будет в этой ткани на 1, 5, 14 и 30-й 15дни роста,Для этого в эти дни определяют средние размеры клеток, которые составляютсоответственно 91,8; 67,6; 84,5 и 92,8 мкм,Далее для каждого из этих дней проводят 20расчет уровня клеточных делений по приведенной формуле П р и м е р 2, На материале одной из линий клеточной культуры раувольфии змеиной /ВаощоЛа зегреп 11 па ВемЬ/ штамма Ксредний размер клеток в микронах, вы численный на ОЙ, я, 14 д и 21 д дни ее роста, т.е. Он, равен соответственно 65,6- 43,8 - 29,8-50,7, За Оо принят средний размер клеток культуры на 30-й день ее роста, равный 58,0 мкм, когда деления в ткани 45 отсутствуют, а значит составляют 0,00%, а размер клеток является максимально возможным, являясь характерным именно для данной культуры, но при данных конкретных условиях, Относительно него уровень 50 пролиферацииво все остальные выбранные дни определяется по приведенной формуле На 0 день; П р и м е р 3. При культивировании клеток руты душистой йцта цгачеоепз) требуется узнать, как отразится на пролиферации, а значит и росте культуры, изменение срока пересадки, если ее производить не на 26-й день, как обычно, а, например, на 20-й.С этой целью после пересадки вычисляют средний размер клеток в 0-й день, 7-й, 17-й и 26-й, На 26-й день, как и всегда на этот день, делений клеток не наблюдают, а средний размер их при этом достигает максимального для неделящихся клеток этого вида культуры, и эту величину, составляющую 116,7 мкм, используют как Оо, В другие дни, соответственно. средние размеры клеток, т,е. Он, являются 97,4 - 114,6 - 84,3 мкм. В соответствии с формулой уровни пролиферации составляют,Как видно из вычислении, на 7-й день роста культуры, когда обычно, т.е. при пересадке в оптимальный срок, уровень пролиферации относительно высок, в данном случае при пересадке культуры на 20-й день он падает крайне низко, что отрицательно отразится и на продуктивности культуры,Настоящий способ является более точным, Кроме того, этот способ настолько универсален, что может быть применен для определения уровня клеточных делений в любой культуре клеток без каких-либо его изменений, Использование этого способа позволит повысить эффективность исследовательских работ, связанных с необходимостью определения уровня клеточных делений,ФормСпособ о деления, вк оула изобретенияопределения уровня клеточноглючающий приготовление цит1684337 6 Составитель В,ДемкинТехред М.Моргентал Корректор О,йипл е Редактор В.Трубченко Заказ 3485 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент",г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 логических препаратов из анализируемой растительной ткани и микроскопическое определение цитогенетических показателей, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа и его унификации, в анализируемой ткани предварительно определяют средний размер неделящихся клеток, а затем средний размер клеток в заданный момент времени и. уровень клеточного деления вычисляют поформулеР ОО Оп 1000,5 Оо5 где Р 1" - уровень клеточного деления;Оо - средний размер неделящихся клеток в анализируемой ткани;О - средний размер клеток в заданныймомент времени,10