Способ серодиагностики сифилиса

(5)5 А 61 В 10/00 С)БР АВТОРСКОМУ СВ ЕЛЬСТВУ 9аучно-исследовательи сывороток и Ставроенный медицинский Н. Беднова, С.А. УгАГНОСТИКИ СИФИГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Ставропольскийский институт вакцинпольский государстинститут(54) СПОСОБ СЕРОДЛИСА ик Э.А. Реакция иммубсорбцией для специстики сифилиса. ЦКВИ Изобретение относится к медицине и может быть использовано для повышения точности серодиагностики сифилиса в РИФ- вбс,Целью изобретения является повышение точности способа Серодиагностики сифилиса за счет того. что дезинтегратультраозвученных бледных трепонем дополнительно центрифугируют, а в качествесорбента в реакции РИФ-абс используютсупернатант,Способ осуществляется следующим образом.Культуральные бледные трепонемы 1, Ч,ЧИ штвммов (по одному представителю откаждой внтигенной группы) выращивают ввнвэробных условиях на печеночном бульоне с добавлением кусков печени КРС. рН 8,2в течение 8 дней. Выросшую культуру фильтруют, центрифугируют при 5,5 Х 10 д в течение 30 мин, Осадок дважды отмываютизотоническим раствором хлоридв натрия.(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для повышения чувствительности серодиагностики сифилиса в РИФ-абс. Целью изобретения является повышение точности способа за счет того, что дезинтеграт ультраозвученных культур бледных трепонем дополнительно центрифугируют, а в качестве сорбента в РИФ-абс используют супернатант, Сорбент, приготовленный предлагаемым способом, обладает повышенной сорбционной емкостью к неспецифическим антителам сыворотки крови, что повышает чувствительность РИФ-абс, а соответственно и серодиагностику сифилиса на 6.8. а специфичность реакции на 22,2( Иэ полученного осадка готовят взвесь трепонем 10 микр. кл/мл по стандарту мутно)гсти, далее смесь дезинтегрируют в.течение 20 мин и центрифугируют при 10 д в течение 30 мин, Полученный осадок (клеточн ые стенки и наружные фибриллы культуральных бледных трепонем) используют для промышленного получения трепонемного анти- гена, а супернатант (отходы производства). содержащий белки цитоплазматического цилиндра (цитоплаэматические мембраны, мезосомы, внутренние фибриллы, цитоплазма клеток), используют в качестве сорбента при серодиагностике сифилиса в РИФ-абс. Полученный сорбент (супернатант) титруют, для этого его разводят 0,85 - ным йаС рН 7.2 в 2, 3. 4, 5 раз и ставят РИФ-абс с восьмью сыворотками: одна (1) реэкоположительная (4+). две (2, 3) слабоположительные (2+), пять (4-8) от людей, свободных от сифилитической инфекции, три из которых дают неспецифическиположитель 1650098ные результаты вРИФ (2+), Все сыворотки разводят предлагаемым сорбентом в соотношении 1:5 и исследуют в РИФ. За титр сорбента принимают такое его разведение, при котором сорбированные сыворотки больных сохраняют степень позитивности, а сыворотки лиц, свободных от сифилиса, не дают свечения.Оттитрованный сорбент стандартиэуют по сериям (установленный титр, т.е. его рабочее разведение вносят в паспорт), разливают по 5 мл во флаконы, лиофилиэируют по известному режиму сушки и укупоривают для последующего использования в РИФ- абс серологическими лабораториями.Для постановки РИФ-абс предварительно готовят следующие ингредиенты: исследуемую сыворотку крови инактивируют при 56 С в течение 30 мин; трепонемный антиген (взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса, полученная из 7-суточного орхита кролика) должен содержать 40-60 трепонем в поле зрения при микроскопии с темнопольным конденсором; сорбент (предлагаемый) разводят иэотоническим раствором хлорида натрия до укаэанного титра по паспорту; титруют сухую люминесцирующую сыворотку крови против глобулинов человека в РИФ-абс с сыворотками крови людей, разведенных предлагаемым сорбентом в соотношении 1:5 (5 сывороток крови больных сифилисом и 5 сывороток крови лиц, свободных от сифилитической инфекции), и устанавливают рабочий титр по наличию наиболее яркого свечения с положительными сыворотками крови и полное отсутствие свечения клеток трепонем с отрицательными сыворотками крови. Далее полученный титр люминесцирующей сыворотки проверяют на 100 сыворотках крови людей, причем из них 20 сывороток крови от лиц больных сифилисом.Берут тонкие обезжиренные предметные стекла, на обратной стороне которых определяют границы нанесения ингредиентов реакции (диаметр 0.7), Затем в пределах круга на стекло наносят трепонемный антиген, высушивают на воздухе и фиксируют 10 мин в химически чистом ацетоне. Далее инвктивированную испытуемую сыворотку крови разводят сорбентом, предварительно разведенным по титру в соотношении 1:5, наносят ее на мазок антигена, помещают во влажную камеру, которую затем ставят в термостат при 37 фС на 30 мин ( фаза реакции), По истечении времени камеру извлекают из термостата, предметные стекла с первой фазой реакции двукратно промывают фосфатным буфером. причем при втором промывании для более полного удаления белков, не участвующих в реакции, предметные стекла выдерживают в фосфатном буфере в течение 10 мин, далее высушивают и наносят 5 на мазок люминесцирующую сыворотку, помещают во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин (И фаза реакции), По истечении времени исследуемый образец промывают фосфатным 10 буфером в такой же последовательности, каки после. первой фазы реакции, после чего высушивают, наносят на поверхность мазков нелюминесцирующее иммерсионное масло (диметилфталат) и приступают к учету РИФ абс в люминесцентном микроскопе с ртутнокварцевой лампой (ДРШ), Учет реакции осуществляют по степени свечения бледных трепонем.П р и м е р 1. У больного В. клинические 20 проявления первичного сифилиса, однакосеродиагностика в стационарном комплексе РСК на сифилис отрицательная. При постановке РИФ-абс с ультраозвучейным антигеном получен слабоположительный 25 результат (2+). Постановка РИФ-абс с сорбентом, приготовленным описанным способом, дала реэкоположительный результат (4+), Данный способ позволяет установить диагноз: сифилис первичный в РИФ-абс.30 Положительный эффект достигается тем.что повышается чувствительность РИФ-абс в два раза, что является исключительно ценным для выполнения оптимальных терапевтических мероприятий в сжатые сроки у 35 данной категории больных.П р и м е р 2. У больного С. клиническиеи серологические исследования в РСК на сифилис установили диагноз: сифилис первичный серопоэитивный, Сыворотка крови 40 больного С, в РИФ-абс с ультраоэвученнымтрепонемным антигеном дала положительный результат (3+), с сорбентом, приготовленным описанным способом, в РИФ-абс реакция была резкоположительной (4+). Дан ный способ, таким образом. повышает степеньпозитивности (на 1). переводя положительные реакции в резкоположительные.П р им е рЗ. Больная Г. при заболеванииострой вирусной инфекцией дала положи тельные реакции в РСКна сифилис. Клинических проявлений позднего сифилиса не выявлено, однако исследования спиномоэговой жидкости (ликвора), полученного при пункции, дало слабоположительный реэуль татв РСК. В РИФ-абссыворотка кровибольной и ликвора дали с ультраоэвученным трепонемным антигеном положительные результаты (3+), с сорбентом, полученным по изобретению, в РИФ-абс реакции были резкоположительными (4+),1650098 Составитель И. ЕмельяненкоТехред М.Моргентал Корректор А. Осауленко Редактор А. Мотыль Заказ 1560 Тираж 453 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул, Гагарина, 101 Предлагаемый способ позволяет установить диагноз: поздний сифилис, в этом примере повышает степень позитивности (на 1+), переводя положительные реакции в реэкоположительные, 5Таким образом, сорбент, приготовленный предлагаемым способом, обладает повышенной сорбционной емкостью к неспецифическим антителам сыворотки крови, что повышает чувствительность 10 РИФ-абс, а соответственно и серодиагностику сифилиса на 6,86, а специфичность" реакции на 22,2 ф.Фо р мул а и зоб ре те н и я Способ серодиагностики сифилиса путем постановки реакции РИФ-абс с использованием деэин 1 еграта ультраозвученных культур бледных трепонем в качестве сорбента, отличающийся тем,что,сцелью повышения точности способадеэинтеграт дополнительно центрифугируют, а в качестве сорбента используют супарнатант.