Способ прогнозирования рецидивов острого лимфобластного лейкоза

(19) (11) 1 И 33/5 51) БРЕТЕ ВИДЕТЕЛЬСТВУ О дификации разраантигенам: Т 6,ИКО. Лейкозньчают из перифериного мозга больболевания. Учет омощью люминесц дополнительным ов в фазовом ко бразом с той же росмотром препарарасте, Аналогичныманелью МКА провомфоци ской Изобретемедицины,лим областн ки реци лейкозаЦель ивов острого ф(ОЛЛ).изобретения - поиней диагностики ре относитастности аэдел ематологии, й доморфоло.й диагностивышен о ности, р а ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Центральный научно-исследовательский институт гематологиии переливания крови(54) СПОСОБ. ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ ОСТРОГО ЛИМфОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА(57) Изобретение относится к разделумедицины, в частности гематологии,и касается ранней доморфологическойиммунологической диагностики рецидивов острого лимфобластного лейкоза(ОЛЛ). Цель изобретения - повышениеточности ранней диагностики рецидивазаболевания до появления его клиникоморфологических признаков. Способвыполняется следующим образом. Вострой фазе заболевания с помощьюпанели моноклональных антител (МКА)выявляют дифференцировочные антигены, характерные для лимфобластов каждого больного, в реакции непрямой им-мунофлуоресценции в микролуночной мокасается вопроса ранической иммунологичес отана панель из МКА9, Т 10, САП,А, 1 а,е лимфобласты полу ческои крови или ко ых в острой фазе зареакции проводят сентного микроскопа дят исследование антигенов литов, выделенных из периферичекрови больных в периоде ремиссии.Исследования повторяют регулярно навсем протяжении ремиссии с интервалом 1-4 месПоявлениелимфоцитов,положительно реагирующих хотя бы содним из применяемых МКА в количествах, превышающих пределы ик нормальных значений, являются предвест.ником начинающегося рецидива заболевания. Положительный эффект способазаключается в том, что предложеннаяпанель МКА позволяет распознать лейкозные клетки 967 больных и проводитьраннюю доморфологическую диагностикурецидивов заболевания в максимальномчисле случаев по появлению на зрелых лимфоцитах любого из антигенов,характерных для лейкозных лимфобластов в остром периоде, 1589215болевяния до появления его клиникоморфологических признаков.Способ осуществляют следующим образом,В острой фазе заболевания с помощью разработанной панели МКА выяв-ляют дифференцировочные антигены,характерные для лимфобластов каждого больного, в реакции непрямой иммунофлюоресценции. В периоде ремиссиис той же панелью МКА регулярно с интервалом в 1-4 мес проводят исследование морфологически зрелых лимфоцитов периферической крови. Появление лимфоцитов, положительно реагирующих хотя бы с одним из приме,няемых МКА в количествах, превышающих пределы их нормальных значений(М + 36), является предвестником начинающегося рецидива заболевания,Исследование антигенов лейкозных лимфобластов проводят в реакциинепрямой иммунофлюоресценции в микролуночной модификации с использованиемшести препаратов МКА, входящих в разработанную панель, Лейкозные лимфобласты получают после лизированияэритроцитов из 5-10 мл гепаринизированной периферической крови или1 мл костного мозга, взятых у больных в острой фазе заболевания, Суспензию доводят до концентрации 4510 клеток в 1 мл раствора Хэнкаи прикрепляют к поверхности стекла35микролунок с помощью поли-Ь-лизинаКлетки обрабатывают сначала указанными препаратами МКМ (по 20 мкл) прио:инкубации в течение 30 мин при 4 С,а затем после двукратного отмываниямикролунок раствором Хэнка на клетки наносят ФИТЦ-меченые козьи антитела против мышиного у-глобулина (по20 мкл), После инкубации при 4 С втечение 30 мин препараты двукратнооТмывают раствором Хэнка и в микролунки вносят по 5 мкл 50%-ного раствора глицерина. Препараты накрывают покровым стеклом и запаивают.Учет реакции проводят на люминесцентном микроскопе с контрольным просмотром клеток в фазовом контрасте. Дифференцировочные антигены лимфобластовопределяют по наличию поверхностногосвечения на клетках. Аналогичным образом с той же панелью МКА проводят55ис.следование антигенов лимфоцитов,выделенных иэ периферической кровибольных в периоде ремиссии с помощью градиентного центрифугирования. Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалом в 1-4 мес,П р и м е р 1. Больной Б., 15 леч,Диагноз: острый лимфобластный лейкоз.Бластные клетки, выделенные иэ 5 млгепаринизированной крови в остромпериоде болезни и исследованные сразработанной панелью МКА, содержалиантигены 1 а, ИК 0-11, СА 1 Л,А, Т 10, Т 9(количество антиген положительныхклеток составило 91,55, 70,90 и 50%соответственно), Антиген Тб на лимфобластах больного не был выявлен,В момент констатации полной клиникогематологической ремиссии, достигнутой через 2 мес, количество морфологически зрелых лимфоцитов крови, содержащих антигены 1 ау ИКО 11 САТ,АТ 6, Т 9, Т 10 соответствовало нормальным значениям, Однако через 1 мес впериоде полной клинико-гематологической ремиссии (при наличии в пунктатекостного мозга 3% лимфобластов) приповторном исследовании лимфоцитовкрови с той же панелью МКА было обнаружено повышение количества клеток,имеющих антигены ИКО(б 8%) Т 10(18%) при нормальном количестве лимфоцитов, содержащих антигены 1 аСАБРА, Тб, Т 9. Рецидив болезни былвыявлен спустя 1,5 мес при морфологическом исслецовании пунктата костного мозга (копичество лимфобластовв нем составило 12,5% при последующем неуклонном прогрессировании заболевания),П р и м е р 2. Больной Л., 18 лет. Диагноз: острый лимфобластный лейкоз. Властные клетки, выделенные иэ 5 мл гепаринизированной крови в остром периоде болезни, при исследовании с разработанной панелью МКА содержали антигены 1 а, ИКР(количество антиген-положительных клеток сос тавило 70 и 85% соответственно). Антигены САЫА, Тб, Т 9, Т 10 на лимфобластах больного не были выявлены, 1 ерез 1 мес после констатации полной клинико-гематологической ремиссии (при наличии в пунктате костного мозга 4% лимфобластов) при исследовании морфологически зрелых лимфоцитов крови с той же панелью МКА наряду с нормальным количеством клеток, сод ржащих антигены Та, СИЛА, Т 6, Т 9 и Т 1 С, выявлялась увеличенная популяция лим"1589215 6 ляющем большинстве случаев (у 9 бй больных),левания. Составитель Р.ГуменюкРедактор Ю.Петрушко Техред Л,Дидык Корректор Л.Пилипенко Заказ 2539 Тираж 513 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно в издательск комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 фоцитов, содержащих антиген ИКО(467), Рецидив болезни был выявлен клинико-морфологическими исследованиями через 3 мес (количество бластных клеток в периферической крови 803).Указанные примеры показывают, что использование известного способа не позволило бы прогнозировать рецидив заболевания. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность иммунологического прогнозирования рецидивов ОЛЛ до появления его клиника-гематологических признаков за счет использования для диагностики не одного, а нескольких МКА, направленных к различным дифференцировочным антигенам, выявляемым на лейкозных лимфобластах.Способ может быть применен практически у всех больных ОЛЛ, так как с помощью разработанной панели ЛКА лейкозные клетки распознают в подавФормула изобретения5 Способ прогнозирования рецидивовострого лимфобластного лейкоза путем выявления дифференцировочного антигена с помощью моноклональных антител на лейкозных лимфобластах вострый период и лимфоцитах в периодремиссии и при обнаружении этого антигена в период ремиссии в количествах, превышающих пределы их нормальных значений, прогнозируют рецидивзаболевания, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точностипрогнозирования, для выявления ан тигенов используют комплекс специфических моноклональных антител, и приобнаружении одного или несколькихантигенов прогнозируют рецидив забо