Способ исследования структуры биологических объектов, излучающих свет

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 119) (11) 1 ) 5 С О 1 Х 2 1 / ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ИСА БРЕТЕНИ Н А ВТОРСКОМУ СВИД":ТЕЛЬСТ 4437527/31-2506.06.8830.08.90. Бюл. И 32Институт биофизики СО АН СССРсноярский государственный унитетО.А.Кудрявцева, В.А.Охонин.Барцев543.42.065 (088,8)Харрик Н. Спектроскопия внутго отражения. М,: Мир 1970 ворцов Г.Е, и др,. Микроскопыашиностроение, 1969, с. 25,Изобретение отметодам исследоваобъектов и может птически ри сл осится ия био ыть ис ии возмож ическихьзован в бактериально плазматическ тологи Цель стополкос но ностью физиол еломления которог казател- 1,33 Сповечени вое расвечения в ертеже показано б осуществ ого рефрак ломляющий яют при помо ометра, соде птический эл ьног акте еделен оптичес яющем элементе оптическом прел Исследовани странения прелементкрыт альноиэлен коего которыи п ом, В центр оптическог ется окно,олуцилиндр аемым экра рхней гран виде е расстояние от до области лослое.н я ьзуют непрони части в арактерн ела сред ет оценит границы р кран мент ения в кализации испол и расстоности и Для оцеинцип вз и обратимост мент ни. световых(21) (22) (46) (71) и Кр верс (72) и С,И (53) (56) реннс, 3С обретения - определени ния, области локализаци е направления распроомленной волны позволя(54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫБИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ, ИЗЛУЧАЮЩИХСВЕТ(57) Изобретение относится к оптическим методам, конкретно - к способу исследования структуры биологическихобъектов, излучающих свет. Цель изобретения - определение местоположенияобласти локализации свечения. Исследуемый объект приводят в оптическийконтакт с преломляющим элементом.Регистрируют угловое распределениеинтенсивности свечения объекта в пре -ломляющем элементе. По угловому распределению рассчитывают расстояние от клеточнои стенки до области локализации свечения. 1 ил,овании светящихся бактелокализация источниковлюминесценции в перим пространстве, заполнен ю, с оптической плотогического раствора, поторое помещают исследуемые клетбактерий, Клетки фиксируют приши покровного стекла и винта, Э1589155 сред с пс 1,38 ( ота находити л Реп елозил ения писточник ве агавя что иерипла волны свет релом ю ем элементе запол крепится держателем. Регистрацию свечения произвопят под различными углами возле нижней круглой поверхности преломляющего элемента через свето 5 вод на микрофотометрической установкеВ рефрактометре используют оптический элемент из стекла ТФс показателем преломления п = 1,76.П р и м е и, Определение области локализации люминесцентной системы в светящихся бактериях РЬо 1:оЬасегз.цш 1 ез.о 2 ппЫ, Длина волны максимума све чения данного вида бактерий равна475 пм,. 15Бактерии выращивают на скош,:ином сйаре в течение нескольких часов при комнатной температуре, Суспензию бактерл отмьн ьгх 3% -ным рас твором ИаС 1 нгносят пипеткой через окно на преломляющий элемент. Для обеспечения оптического контакта межцу исследуемЫми клетками бакгерий и преломляюшим элементом и,цля поддержания метаболизма клетки (работы люминесцент пой системы) сверху бактерии покрывают твердым слоем агара, а затем фнксируют при помощи покровного стек - ла и винта. Измерение интенсивности свечения производят возле нижней ЗО круглой поверхности преломляющего элемента в диапазоне углов от Зэ до 55Значение 1(Ц ) согласнс графику 1(С) при (Р == 50 равно 1(чэ ) - 0,23, Интенсивности свечения 1 Ч)1- 1 р) -. 0,08 соответствует угол С - 55По оси ординат отложены относительные значения интенсивности свечения, которые рассчитывались поФормуле У,с ксгде 1 - значение интенсивности приопределенном угле регистра "ции .1, . - максимальное значение интенсивности в данном диапазоне углов. 1 л фоновое свечениеПредельный угол при греломлении света ня границе раздела азматическом пространств физиологическим раство-. ром) и п -= 1,76 (показатель прелом=оления оптического элемента) (р = 50При расположении исследуемых клеток. бактерий на преломляющем элементенаблюдается проникновение света в область углов больше предельного дляданных сред,Полученные данные о затухании наблюдаемого свечения при углах С ) Спозволяют оценить характерное расстояние от клеточной стенки до областилокализации люминесцентной системы,Длина волны света в среде с показателем преломления п = 1,76 длябактериальной люминесценции составляет 575 нмй = -- 270 нм,1,76Вычисляем значение расстояния Ъ 270 (нм),43,1.1 кпр - япрТаким образом, способ позволяет определить местоположение области локализации свечения.Формула изобретенияСпособ исследования структуры биологических объектов, излучающих свет, толщина которых соизмерима с длиной световой волны, включающий измерение свечения объекта в контакте с преломляющим элементом, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью определения местоположения области локализации свечения, исследуемый объект с показателем преломления и приводят в оптический контакт с преломляюшим элементом, имеющим показатель преломления п ) и , рассчитывают С - предельный угол полного внутреннего отражения для сред исследуемый объект преломляющий элемент, регистрируют угловое распределение интенсивности свечения объекта в преломляющем элементе 1(Ц), по графику зависимости 1(Ч) находят угол (7 , при котором интенсивность свечения составляет 1/е интенсивности свечения, соответствующей величине угла(о и оп+1 Р 9 ределяют Е - расстояние от клеточной стенки до области локализации свечения по формуле1589155 Составитель О,Бадтиеваедактор А.Ревин Техред Л.Олийньпс Корректор Т,Палий изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 Заказ 2536 Типаж 513ВНИИПИ Государственного комитет113035, Москва,Подписноео изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС35, Раушская наб., д. 4/5