Способ количественного определения витамина д в растительных кормах

ОПИОАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ тся посо Бюл, Рследоватства Лес нстиПоельск о Мирось ваьство СССР30/06, 1987.ННОГО ОПРЕДЕСТИТЕЛЬНЫХ КО иа ым ствится к аналитисоединений,на КоГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЧНРЦТИЯМПРИ ГКНТ СССР(57) Изобретение отноческой химии природныхв частности к определ Изобретение относится к аналитической химии природных соединений, в частности к определению витамина Р в растительных кормах, и является усовершенствованием способа по авт, св. СССР Р 1363060.Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка ка ротиноидов из экстракта неожщяемой Фракции.П р и м е р. Навеску корма 100 г заливают 400 мл этилового спирта, добавляют 100 мл 502-ного раствора гид роокиси калия и ведут гидролиз в течение 40 мин при 60 С в атмосфере инертного газа, Витамин Р экстрагиру ют гексаном (дважды .по 20 мл) из гидролизата, разбавленного водой до 0 в растительных кормах, и явля усовершенствованием способа по а св. Р 1363060. Целью изобретения ется повышение чувствительности ба за счет дополнительного отдел избытка каротиноидов из экстракт неомыляемой фракции. Дополнитель отделение каротиноидов в виде ос осуществляется путем центрифугир ния при (-10) - (-20) С в течен 30-40 мин. Изобретение позволяет 1 О раз снизить содержание кароти дов в экстракте, дает возможност дополнительно концентрировать ви 0в 5 раз по сравнению с извест (авт,св. 11 1363060) и довести чу тельность определений до О,1 мкг (4 ИЕ) в 1 кг корма. 403-ной концентрации этанола, отмывают водой от щелочи, сушат сернокислым натрием, помещают в центрифужниео пробирки и центрифугируют при -15 С в течение 30 мин, Выпавшие кристаллы каротиноидов отделяют фильтрованием и пропускают анализируемый раствор через колонку с окисью алюминия. лонку промывают 50 мл гексана и витамин П элюируют 1,5 Е-ным раствором изопропанола в гексане. Фракцию, содержащую витамин О , отбирают по времени выхода витамина Р из колонки, досуха упаривают в атмосфере инертного газа и растворяют в 400- 1000 мкл гексана. Затем 200-300 мкл пробы вводят в микроколонку с селика гелем жидкостного хроматографа высокого давления "Милихром и витамин1562849 Способ определения Объект анализа Предлагаемый Без добавки 5,12 0,02 Сено люцерновоеестественной сушки То же 6,20 5,09 6,10 0,38 1,00Без добавки 1,00Без добавки То жеИзвестныйТо жеПредлагаемый 0,02 0,02 0,03 0,05 и 11 Сено люцерновоеискусственнойсушкиТо же 0,04 0,20Без добавки 0,57Не обнаружено0,560,72 То жеИзвестный 0,04 0,03 0,20Без добавки То жеПредлагаемый Сено злаковое естественной сушкиТо же 0,02 0,04 0,03 0,05 1,01 0,70 0,97 0,14 0,30Без добавки0,30Без добавки То жеИзвестныйТо жеПредлагаемый Сено злаковое искусственной сушкиТо же То жеИзвестный О, 03 0,10Без добавки 0,10 То же 1Предлагаемый 0,05 0,04 0,25Без добавки Силос кукурузный15 мес храненияТо же 0,05 То же Известный0,10Без добавки 0,10 То же 0,05 0,30 0элюируют 40-607.-ным раствором гексана в хлороформе, Детектированиеведут в УФ-спектре при 266 нм, а содержание витамина В рассчитываютпо площади хроматографического пика За счет дополнительного отделения каротиноидов цз неомыпяемой фракции50 ,в виде осадка путем центрифугирования при -10-20 С в течение 30-40 мин изобретение позволяет в 10 раз снизить содержание каротиноидов в экстракте неомыляемой фракции при определении витамина Рв растительных кормах. Это дает возможность дополнительно концентрировать витамин П, в 5 раз по сравнению с известным изобрес учетом степени концентрирования его на хроматографической колонке,Результаты определения витамина Рв различных растительных кормах приведены в таблице. Введено Найденовитамина витамина Бг П мкг/кг Рмкг/кг 0,23Не обнаруженоНе обнаружено0,49,О,О 0,21Не обнаруженоНе обнаружено0,5 тением и довести чувствительность определений до 0,1 мкг (4 ИЕ)/ 1 кг корма,Достигнутая чувствительность является достаточной для анализа любых растительных кормов, в том числе и с особо малым (менее 0,5 мкг/кг) содержанием витамина Э что дает возможность широко использовать предлагаемое изобретение в сельскохозяйственном производстве для организа1562849 6щ и й с я тем что с целью поэьюения чувствительности способа за счет дополнительного отделения избытка каротиноидов из экстракта неомыляемой фракции, перед введением в колонну с окисью алюминия экстракт центрифугируют при -10-20 С в течение 30-40 мин и отделяют каротиноиды в виде осадка. ции рационального кормления сельскохозяйственных животных. Формула изобретения Способ количественного определениявитамина Э в растительных кормах поавт.св. Р 1363060, о т л и ч а юСоставитель М Пономарева Редактор Л. Гратилло Техред М.Дидык Корректор Л. БескидЗаказ 1062 Тираж 494 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101