Способ получения l-триптофана

Номер патента: 1541257

Авторы: Музыченко, Победимский, Решетник, Сотников

ZIP архив

Текст

1541257 1 Ою 10 Концентрация ДНКавы мг/мл среды 1,0 я 10 Время культивирования до выдервки ч Время вьдеркки, ч Концентрация Ь"трнптофаиа, г/лСуммарная концентрация сопутствующих аминокислот, в томчисле;фенилалаиинатирозинаалаиииа 48г 2 4 8 О 705 7,00 7,00 7,00 7,00 1000 10,40 10,60 10,70 10,707,80 0,62 1,72 0,20 0,60 0,05 0,12 0,37 1,00 1,54 0,52 0,12 0,90 1,54 0,50 О,11 0,93 1,83 0,50 О, 13 1,20 112 076 0,40 0,300 08 0,06 0,64 0,40 0,60 О,2 О 0,05 0,35 1,570,50 0,12 0,95 1,56 0,50 О,11 0,951,50 0,48 02 0,9 О туры, культуральную жидкость выдержи-вают в течение 4-6 ч в условиях пониженного аэрирования. ИспользованиеДНКазы в определенной концентрациив сочетании с вьщерживанием культуральной жидкости в течение 4-6 ч вопределенном режиме аэрирования приводит к понижению количества сопутствующих аминокислот (1.-фенилаланина, 101,"тирозина и 1.-аланина), которые на"капливаются в культуральной жидкостипараллельно с целевой аминокислотой,Е-триптофаном,Введение ДНКазы в концентрацииниже 1 к 1 0 в и выше 1 к 10 мг белка/млсреды не приводит к понижению концентрации сопутствующих аминокислот вкультуральной жидкости при выдерживании, Выдерживание в течение менее 20:4 ч приводит к недостаточному понижению уровня сопутствующих аминокислот,а выдерживание в течение более 6 чне меняет их уровня в культуральнойжидкости. Результаты соответствующих 25экспериментов суммированы в таблице,где поКазано влияние различных концентраций ДНКазы и времени выдержкикультуральной жидкости на содержаниесопутствующих аминокислот и 1.-триптофана,П р и м е р. Односуточную культуру ,штамма В. зиЪьь 17.з ВНИИгенетика,выращенную на косяках с агаром Хоттингера, пересевают в колбы Зрленмеера емкостью 750 мл содержащие 50 мл ,питательной среды следующего состава, %: сахар 5; кукурузный экстракт 2,КНРО 0,06; ИПРО,1 0,14; вода водопроводная остальное. рН среды доводят40%-ным раствором ИаОН до 7,4-7,6.Колбы вместе со средой предварительностерилизуют в автоклаве в течение40 мин при 120-121 С. После засеваколбы устанавливают на круговую ка"чалку (200-220 об/мин) и выращиваютпосевной материал в течение 20-24 чпри 37 С,Посевной материал вносят в количестве 8-10% (по объему) в лабораторныйферментер В 1 о-Р 1 о модель СЗО емкостью 1 л, содержащий 500 мл ферментационной среды следующего состава,%." сахар 10; Х 880 7 НоО 0,1; БаС 10,05; КНоРОа. 0,06; КоНРОа 0,14; кукурузный экстракт 2; мочевина 0,5;вода водопроводная остальное. рН среды доводят 40%-ным раствором 11 аОНдо 7,4-7,6, Ферментационную среду безмочевины стерилизуют аналогично описанному. Раствор мочевины готовятотдельно, стерилизуют в течение40 мин при 110-112 С и задают в ферментер перед посевом.Режим ферментации; температуракультивирования 37+1 С; скорость враощения мешалки 720 об/мин; аэрация1 л/л мин,Одновременно с инокулятом в ферментационную среду вносят ДНКазув количестве 1, 0 к 10мг/мл, По окончании процесса ферментации, когда наблюдается падение величины оптической плотности микробной суспензии,культуральную жидкость выдерживаютов течение б ч при 37 С, скорости вра41257 6 5 10 20 25 30 35 1,ОО 1,О.О. 1,О.10. 0 (контроль) 528 0 .2 4 6 8 790 7,95 7,95 790 7,10 715 705 7,10 700 7,10 7,05 7.00 7,О 7,07 147 1,46 0,43 0,43 О,О,0,93 0,82 1,46 1,46 043 0,43 0,1 О О,11 0,93 0,92 1,46 0,42 0 11 0,93 1,46 1,45 0,44 0,45 О, 11 О 1 О0,91 0,90 1,35 1,33 0;46 0,44 0,09 0,09 О,8 О 0,80 1,56 0,50 О,11 0,95 1,3434 0,38 0,40 о,ое о,ое 0 84 О, еЬ 1,35 1,45 0,42 0,45 О,ОЕ О,1 О О 85 0,90 5 15 щения мешалки 720 об/миц и расходе воздуха О,1 л/л-мин. Концентрацию Ь-триптофана и сопутствующих аминокислот (алании, фенилаланин, тирозин) в культуральной жидкости определяют с помощью аминокислотного анализатора.Контролем служит процесс без использования ДНКазы и выдержки в определенном режиме в течение 6 ч,Добавление в среду культивирования ДНКазы в количестве 1,0 к 10 7 мг/мл с последующей выдержкой культуральной жидкости в течение 6 ч в режиме пониженного аэрирования ведет к снижению суммарной концентрации сопутствующих аминокислот с 1,47 г/л в контрольном варианте до 0,6 г/л в опытном, Концентрация фенилаланина в контрольном варианте составляет 0,43 г/л, а в опыте 0,20 г/л; концентрация тирозина снижена с О,11 г/л (контроль) до 0,05 г/л (опыт); концентрация аланина - с 0,93 г/л (контроль) до 0,35 г/л (опыт). Выход целевого продукта - Ь-триптофана составляет при этом в опытном варианте 10,7 г/л. Таким образом, внесение в среду культивирования фермента ДНКазы в концентрации 1,Ок 10 ь - 1,Ох 10мг/мл с последующей выдержкой культуральной жидкости в течение 4-бч в режиме пониженного аэрирования способствует уменьшению по сравнению с контролем концентраций сопутствующих аминокислот на 9-593 при высоком выходе Ь -50 50 52 2 4 6 8 0 2 4 6 тоиптофана. При изменении дозы вносимого стимулятора в условиях выдержкикак в сторону уменьшения, так и всторону увеличения не наблюдаетсяснижения количества сопутствующихаминокислот в культуральной жидкости по сравнению с контролем, Внесение различных концентраций ДНКазыбез последующей выдержки культуральной жидкости в режиме пониженногоаэрирования также не приводит к снижению концентраций сопутствующих аминокислот. Формула изобретения Способ получения Ь-триптофана, предусматривающий культивирование продуцирующего его штамма Васа 11 ив зиЪс 1118 ВНИИгенетикав условиях аэрирования в питательной среде, содержащей сахар, кукурузный экстракт, мочевину, воду и минеральные соли в виде Фосфатов калия, сульфата магния, хлорида натрия, до максимального накопления биомассы с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения его качества за счет снижения концентрации сопутствующихаминокислот в культуральной жидкости,в питательную среду дополнительновводят дезоксирибонуклеазу в количестве 1 к 10 ф в 1 "О мг белка/мл среды,при этом после окончания процесса выращивания культуральную жидкостьвыдерживают в течение 4-6 ч.

Смотреть

Заявка

4268147, 24.06.1987

КАЗАНСКИЙ ХИМИКО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. С. М. КИРОВА

РЕШЕТНИК ОЛЬГА АЛЕКСЕЕВНА, ПОБЕДИМСКИЙ ДМИТРИЙ ГЛЕБОВИЧ, МУЗЫЧЕНКО ЛЕОНИД АФАНАСЬЕВИЧ, СОТНИКОВ ВАЛЕРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C12P 13/22

Метки: l-триптофана

Опубликовано: 07.02.1990

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1541257-sposob-polucheniya-l-triptofana.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения l-триптофана</a>

Похожие патенты