Способ диагностики рака легких

ОЮЗ СОВЕТСКИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 904(51) 4 А 61 В 10/00 й, ГЯЖВ 3И":.А ).п.зг.ю 4 Е .Б.",1.) Л ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ гическии научнь Быковская,Куприяновай антиген брон диагностике рака диология, 986 ИКИ РАКА я к иммунорадиои может быть исностического тесых с подозрением ретения - упрости диагностики. ределяется цитоИзобретениелогическим исслиспользовано втеста ири обследнием на рак легкЦель изобрети повышение тлегкого. ится к иммунорадиониям и может быть тве диагностического и больных с подозреедов каче ован ого ни- упрощение способ ти диагностики рак чно венозной кр объемом 20 с ТА. Соотно 9:1. Пробир ной температ Затем проб ри 200 д, из н т примерно ереносят ее вПример. 1 О мл вносят в пробирку раствором Ма 2 ЭД и 1 ха 2 ЭДТА равно нач при комнат дания эритроцитов фугируютО мин п жидкости забираю с тромбоцитами и и ови оольного м" с 5%-ным шение крови ку оставляют уре для осеирку центриадосадочной 4/5 плазмы другую проГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный онколоцентр АМН СССР(56) Раково-эмбриональнхоальвеолярнь:х смывов влегких. - Меди ци нская р11, с. 51 - 54.(57) Изобретение относитслогическим исследованиямпользовацо в качестве диата при обследовании больнна рак легкого. Цель изошение и повышение точиИммунорадиологически оп токсическая активность тромбоцитов. Тромбоциты периферической крови больных раком легкого осуществляют специфическое цитотоксическое действие против клеток иеревиваемой линии рака легкого АКЛ, причем диагностическая точность равна 89,5%, тогда как тромбоциты больных хроническими воспалительными заболеваниями легких и тромбоциты здоровых лиц не способны к осуществлению подобного литического эффекта, т. е. специфичность метода равна 100%. У прототипа специфичность метода равна 71,7 й, а диагностическая точцость 88,7%. Технически предлагаемый способ более прост в выполнении и менее травматичен для обследуемого. Таким образом, предлагаемый способ диагностики рака легкого может быть предложен в качестве одного цз диагностических тестов ири комплексном обследовании больных с подозрением на рак легкого. 2 табл. бирку, которую центрцфугируют 10 мин ири 200 д. Надосадочную жидкость, содержащую только тромбоциты, переносят в пластиковую пробирку и центрифугцруют 15 миц при 1600 д. Осадок тромбоцитов ресуспен йь дируют в 1 мл среды КРМ 1640 (б 1 ВСО), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки,% 1.-глютамица, 1% буфера НЕРЕ 8 и по 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина (среда А). Количество тромбоццтов подсчитывают в камере Горяева прц ио- ф моши микроскоиирования, после чего суспензию тромбоццтов разводят средой А до концентрации 100 р,10" /мл. Прц помощи последовательных разведений готовят сусиензии с концентрациями громбоццтов 50 0",25 10, 12 О", 10, 5О, 2,5 О", 1,2 О",0,6 1 О, 0,6 1 О, 0,3 10 и О, 5О" /мл.1509040 где о (опыт) Фор,иула изобретения Табница 1 Соотношениеоектор:К 250;1 125:1 100:1 50:1 25:1 12:1 6:1 5: 1,5:1 1000:1 500:1 2,2 З,8 2,5 2,5 Х ннтониза зВ качестве клеток-мишеней (КМ) используют монослойную культуру перевиваемой линии аденокарциномы легкого человека(АКЛ),5Для получения меченыхСг КМ накануне опьта 5 О" клеток АКЛ инкубируют в0.5 мл среды 199, обогащенной 10% сыворотки крупного рогатого скота (среда Б),содержащей 75 - 100 мкКи Ха 26 Сг 0.1, периодически встряхивая пробирку. Через 40 - 60 мин инкубации клетки трижды отмывают 10в среде Б по 10 мин при 200 д и засеваютпо 2)(10 клеток в 0,2 мл среды А в плоскодонные 96-луночные микропластины. Наследующий день, перед добавлением тромбоцитов, КМ дважды отмывают средой Б.Тромбоциты в 0,2 мл среды А из каждогоразведения добавляют к КМ, в результатеполучены следующие соотношения тромбоцит: КМ 1000:1, 500:1, 250:1, 125:1, 100:1,50:1, 25:1, 12:1, 6:1, 3:1 и 1,5:1. Через 18 иинкубации при 37 С в атмосфере 5% СОа 20из каждой лунки отбирают всю жидкостьдля определения радиоактивности в у-спектрометре. Процент лизированных КМ оценивают по формуле:% лизиса КМ= К 100%,и- выход изотопа излизированных КМ;с (спонтанный вы- - высвобождение изоход) топа интактными 30КМ;п (полное включе- полное включениение) изотопа в КМ,Процент цитолиза также может быть определен методом окраски клеток трипановым синим, однако этот метод использует ся только для суспензионных культур и неприемлем для монослойной культуры клеток АКЛ.Используя указанную формулу подсчетацитолиза и подставляя значения количеств импульсов в минуту, определяют процент лизированных КМ в каждом из соотношений (табл. 1). 4В табл, 1 приведены данные цитолитической активности тромбоцитов больного раком легкого против клеток АКЛ (раститровка соотношений эффектор: КМ).Таким образом, в приведенном примере, во-первых, максимальный уровень цитолиза КМ (29,8%) отмечен при соотношении эффектор КМ, равном 50:1. Это соотношение признано оптимальным и используется во всех дальнейших экспериментах; во-вторых, уровень цитолиза превышает дискриминационную величину на 19,8%. Это позволяет диагностировать рак легкого у данного больного, что было впоследствии подтверждено при морфологическом исследовании биоптата из опухоли.В табл. 2 дано сравнение цитотоксичности тромбоцитов периферической крови больных раком легкого и обследованных контрольной группы против клеток АКЛ .В результате проведенных исследований установлено, что метод определения цито- токсичности тромбоцитов периферической крови обследуемых против клеток АКЛ технически более прост в выполнении, не требует сложной и дорогостоящей аппаратуры для бронхологического исследования и бронхоальвеолярного лаважа,Исследование цитотоксической активности тромбоцитов в качестве диагностического теста нри раке легкого составляет новизну изобретения. Способ диагностики рака легких путем радиоизотопного исследования в биологических жидкостях, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, исследование проводят с тромбоцитами крови, добавляют их к меченым клеткам перерываемой линии аденокарциномы легкого в соотношении (25 - 75):1, инкубируют, определяют процент лизированных клеток и при значении этого показателя больше или равном 10% диагностируют раклегкого,29,8 18,9 1,й 2 -3,6 -131509040 Таблица 2 Цитотоксическая активностьтромбоцитов, % Обследуемые Число об- Достоверследован- ность ных Больные раком легкого 23,2+8,9 19 рс 0,001 Еонтрольнаягруппа 4,3+2,7 21 Составитель В. Зотов Редактор Л. Козориз Текред И. Всрес Корректор С. Черни Заказ 55594 Ти раж 643 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР3035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., л. 4;5 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгорол, уп. Гагарина. О