Способ определения резистентности эритроцитов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН 9) (11) 6 А 48 И НОМИТЕТ СССРТЕНИЙ И ОТНЯТИИ ОСУДАРСТВЕН ПО ДЕЛАМ ИЗО АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ крови ау ум по биоф 1964, с.30 ике.315. ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Малый практикМ.: Высшая школа,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицинеточнее к гематологии и экспериментальной медицине, предназначено длявыявления распределения эритроцитовпо резистентности. Цель изобретенияупрощение и ускорение способа приболее точном выявлении распределенияэритроцитов по резистентности, Способосуществляют на установке, состоящей из кюветы 1 измерения, расположенной между фотоприемником 2 и монохроматором 3. Устройство имеет спектрофотометр 4 на пути проходящего света от источника 5 света. Кювета измерения имеет термостат 6 и магнитную мешалку 7. Блок 8 подачи гемолизирующего агента соединен с кюветой измерения капиллярной линией 9, Графопостроитель 10 подключен к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 к выходу фотоприемника 2К суспензии эритроцитов добавляют гемолизирующий агент непрерывно с постоянной скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, смесь переме- ф шивают и фотометрируют, преобразуют световое излучение в электрическийкоторый дифференцируют и регист еевв рируют. Определение резистентности ведут в координатах объем гемолити ка - дифференцированный электрический ток. 2 ил.ве 4 ь40 разрушенных эритроцитов, за единицувремени, измеренное в произвольных Изобретейие относится к областимедицины, преимущественно к гематологии и экспериментальной медицине, иможет использоваться для выявленияраспределения эритроцитов по резистентности.Цель изобретения - упрощение иускорение способа при более точномвыявлении распределения эритроцитов 10по резистентности.На фиг. показана блок-схемаустановки для осуществления способа;на фиг.2 - кривая распределения эри".троцитов. 15Схема состоит из кюветы 1 измерения, которая расположена между фотоприемником 2 и монохроматором 3спектрофотометра 4 на пути проходящего света от источника 5 света. Кювета 201 измерения снабжена термостатом 6и магнитной мешалкой 7. Блок 8 подачигемолизирующего агента соединен скюветой 1 измерения капиллярной линией 9. Графопостроитель 10 подключен 25к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 - к выходу фотоприемника 2.Блок 8 подачи гемолизирующего аген.та выполнен на основе промьппленного 30дозатора ДАЖ-1Для получения желаемой скоростиподачи гемолизирующих агентов в конст.рукцию дозатора внесены следующиеизменения: 35используют синхронный двигательРДс редуктором, который имеет,1,75 об/мин;на корпусе дозатора закрепленкронштейн с,держателем шприца отдозатора ДЖ на ведущем валу подъемника поршня(на который подается усиление от двигателя) закреплены дополнительныевалики для ременной передачи с диа- д 5метром 35 и 20 мм;с подъемником поршня шприца состыкован реохорд типа ППМЛ-И 5 (связанс самописцем).В результате модификаций блок подачи гемолизирующих агентов позволяет дозировать гемолизирующее веществос малыми скоростями подачи (0,05,0,10, 0,22, 0,45, 0,90, 1,35,1,80 мл/мин), легко и быстро заменятьгемолизирующий агент путем заменышприца с гемолитиком, регистрироватьизрасходованный объем гемолитика насамописце. Для дифференцирования сигнала, полученного от ФЭУ, используют лабораторный прибор йастольного типа для дифференцирования сигналов со следующими основными параметрами прибора: входной сигнал 0-2 В, выходной сигнал 0-100 нВ, максимальное время дифференцирования 360 с.П р и м е р. Берут кровь в количе-. стве 0,1 мл из пальца больного с дефицитом Вц на антикоагуляторе (гепарин 25 Ед/мл). Из цельной крови выделяют эритроциты путем центрифугирования (3000 об/мин, 5 мин на центрифуге ОПН) и промывают три раза физраствором, Разбавляют суспензию эритроцитов до оптической плотности В = 0,7 при длине волны = 670 нм. Помещают суспензию в кюве- ту 1 измерения (длина оптического пути 20 мм) в количестве 4 мл и включают термостат 6 и магнитную мешалку 7; выводят стрелку измерительного пишущего графопостроителя 10 на нулевую отметку и при постоянной температуре 1 = 25 С, непрерывно перемешивая, в кювету 1 измерения блоком 8 подачи добавляют 0,01 М НСВ, приготовленный на физиологическом растворе с постоянной скоростью 0,625 мл/мин. В результате воздействия гемолизирую щего агента эритроциты разрушаются, рассеяние света на эритроцитах умень" шается, вследствие чего увеличивается коэффициент пропускания суспензии на670 нм, что отражается в увеличении сигнала, снятого с фотоприемника 2. Этот сигнал дифференцируется дифференциатором 11 и подается на 7 координате графопостроителя 10Дифференциал (прирост) сигнала пропорционален числу разрушенных эритроцитов в единицу времени, т.ескорости разсп 5 аи рушения эритроцитов (-в , где Б - число разрушенных эритроцитов;11 - сигнал, поступающий в дифференциатор от фотоумножителя) Одновременно на Х координате графопостроителя 10 регистрируется объем гемолизирующего агента, поступающего в суспен зию эритроцитов. Таким образом, на графопостроителе происходит запись дифференциальной кривой гемолиза ваи щ координатах ( - 7) где - - числоас ф ыединицах; Ч - объем гемолизирующего агента, мл. Завершению процесса гемолиза соответствует возвращение стрелки графопостроителя на нулевую линию.Как видно из кривой на фиг.2 разрушение эритроцитов происходит по группам, На графике отчетливо выделяются 3 группы эритроцитов, различных по резистентности, Группасоставлена из самых нестойких эритроцитов, которые с постоянной скоростью разрушаются в области 0,7-1,8 мл;11 - эритроциты, разрушаемые в облас, ти 1,8-3,1 мл; 111 - эритроциты, разрушаемые в области 32-3,6 мл.Та же суспензия эритроцитов былаисследована известным способом. По графику, имеющему вид одиночного пика, нельзя выделить группы эритроцитов, различные по резистентности, что доказывает большую разрешающую способность предлагаемого способа.Предлагаемый способ позволяет сократить время определения до м 3- 5 мин против60-70 мин в известном способе.ф о р м у л а изобретения Способ определения резистентноСтиэритроцитов путем добавления к суспен зйи эритроцитов гемолизирующего агента, перемешивания смеси, фотометрнрования, преобразования светового излучения в электрический ток.и его регистрации, о т л и ч а ю щ и й с я 15 темчто, с целью упрощения и ускорейия способа при более точном выявлении распределения эритроцитов по резистентности, гемолизирующнй агент добавляют непрерывно с постоянной 20 скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, электрический ток дифференцируют, а резистентность определяют в координатах объем гемолитика - дифференцированный 25 электрический ток.