Способ получения иммуносорбента

САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ СОКИ СОВЕТСКНХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ ЗфЕСПУВЛНВГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР (ГОСНАТЕНТ СССР)(71) Научно-исстедоватевский конструкторскотеююпогичеаве юститут биологичеаа акпеаа(73) НИКТИ БАВ НПО "Вектор(54) СПОСОБ ЙОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРбЕНТА(7) Изобретеее относится к медицне, в частности к иммунохаем, и может быть ислотъэовано длявыдепюия с помощью аффвеой хроматографиииммуноглобулина 6, а также ГС-фрагментов и юв 3 Ц иц 1 17545 АЗ(51) 615 3 53 муеых комплексов из крови и других бнопсгических жидкостей С цепью повышения емкости иммуносорбента по связьеанию иммуноглобупина 6 аминопропипсипохром активируют 12,0 13,0%-ным раствором гпутарового апьдегида к вапентно связываот с ее белок А из ЯатпуЬсосав ацгецв при концентрации пооеднего в реакционной смеси 3,0 - 6,0 мг/ю с последующей обработкой и промывкой иммуносорбента известными способами 8 результате получают с емкостью по иммуноглобуаму 23 - 32 мг г сорбента который может быть использован дпя выделения иммунопюбупинов не менее 20 разИобретение относится к медицине, вчаст. ости к иммунохимии, и может быть использовано для выделения с помощью аффин ной хроматографии иммуноглобулина6, а также ГС-фрагментов и иммунных комплексов из крови и других биологическихжидкостей,Основными характеристиками иммуносорбента являются его сорбционная ем, кость по иммуноглобулину 6, устойчивостьк воздействию микроорганизмов и фермен. тов, стабильность в процессе многократноГо использования.Цель изобретения - повышение сорбционной емкости иммуносорбента по иммуноглобулину 6.Поставленная цель достигается тем, чтосогласно способу получения иммуносорбента путем активации носителя, промывки егобуферными растворами, ковалентного связывания белка А иэ ЙарЬуососсоэ аогеоэ сактивированным носителем и промывкиполученного иммуносорбента буфернымирастворами, в качестве носителя используют аминопропилсилохром, который активируют глутаровым альдегидом приконцентрации 12 - 137 ь, а ковалентное свя зывание белка А с активированным носителем проводят при концентрации его 3-6мг/мл с последующей обработкой иммунэ.со. беата известными приемами,гредлагаемый спо:об выполняется след ющиь образом и включает в себя несколько этапов,1. Промывка аминопрспилсчлохрома1,0 М раствором чаС и дистиллированнойводой.". Активация аминопропилсилохромаг 1 роизводство Олайнского завода химреакзивов) глутаровым альдегидом при концентрации2-13 в течение 2 ч при комнатнойтемпературе и рН 8,0.3, Промывка активированного аминопропилсилохрома дистиллированной водой и0,1 М К-фосфатным буфером, рН 8,0.4. Ковалентное связывание белка А сактивированным аминопропилсилохромомс концентрацией белка А в реакционнойсмеси 3-6 мг/мл в течение 16-20 ч при комнатной температуре и рН 8.0.5, Промывка иммуносорбента 1 М раствором чаС и 0,1 М К-фосфатным буфером,рН 7,0,6 Восстановление свободных альдегидных грурп и стабилизация связи между белком А и силохромом обработкойиммуносорбента 0,1 М раствором чаВН 4 втечение 30 мин при 2-4 С и рН 7.0.7. Промывка иммуносорбента последовательно растворами 1,0 М МаС. 0,1 М К П р и м е р 2. 1. Активацию аминопропилсилохрома проводят согласно примеру 1 при концентрации глутарового альдегида 13,0 в реакционной смеси.2. Иммобилизацию белка А на аминопропилсилохроме проводят согласно примеру 1 при концентрации белка А в реакционной смеси 6,0 мг/л. Емкость имму нссорбента по свиному иммуноглобулину 6составила 31,7 мг/г, Иммуноглобулин 6 был гомогенен при дискэлектрофорезе в 7,5- ном полиакриламидном геле.П р и м е р 3, 1. Активацию аминопропилсилохрома проводят согласно примеру 1Р 5 10 15 20 25 35 40 45 фосфатного буфера, рН 7,0, 0,1 М уксусной кислоты, рН 3,0. и 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 7,0.Полученный иммуносорбент имеет сорбционную емкость по иммуноглобулину 6 23 - 32 мг/мл и может быть использован не менее 20 раз для выделения иммуноглобулинов без существенного изменения его емкости.П р и м е р 1. Активация аминопропилсилохрома глутаровым альдегидом.10 г аминопропилсилохрома последовательно промывают 1,0 М раствором йаС и дистиллированной водой, а затем вносят а 100 мл 12,5-ного раствора глутарового альдегида, приготовленного в 0,075 М К- фосфатном буфере, рН 8,0. Реакционную смесь инкубируют на качалке в течение 2 ч при комнатной температуре. Активированный аминопропилсилохром промывают дистиллированной водой для удаления глутарового альдегида, а затем 0,1 М К-фосфатным буфером, рН 8,0,2, Иммобилизация белка А.10 г активированного аминопропилсилохрома вносят в 100 мл 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 8,0, содержащего белок А с концентрацией 4,5 мг/мл, и смесь инкубируют на качалке при комнатной температуре в течение 17 ч. Иммуносорбент промывают 1,0 М раствором йаС и 0,1 М К-фосфатным буфером, а затем восстанавливают свободные альдегидные группы путем инкубации иммуносорбента 0,1 М раствором йаВН 4, приготовленным на 0.1 М Ма-фосфатном буфере, рН 7,0, в течение 30 мин при 2 - 4 С. Иммуносорбент промывают последовательно растворами 1,0 М йаС, 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 7,0, 0,1 М уксусной кислоты, рН 3,0, и 0,1 М К-фосфатного буфера, рН 7,0, Емкость полученного иммуносорбента по связыванию иммуноглэбулина 6 из свиной сыворотки составила 24,8 мг/г, Иммуноглобулин 6 был гомогенен при диск-электрофорезе в 7,5-ном полиакриламидном геле.