Способ получения простагландинов

1497185 КЕ ПГЕ 0,75-0,80 ПГР 5 096-0965 Кй ПГРз 0,2-0,25 ПГВз 0,35-0,40 3однозамещенный фосфат калия 2,0;сеано-кислый цинк 0,01; серно-кислоежелезо 0,02, и выращивают тем жеспособом в течение 3 сут прн 28 С.6Выделение мицелия и получениеэкстракта.,Культуральную жидкость отделяютот мицелия центрифугированием при3000 об/мин в течение 5 мин, осадок3 рава промывают физиологическимрастворЬм, отделяя промывные воды.К 50 г (сырая масса) отмытогомицелия вносят 20 мл 0,01 М трис-НС 1буфера рН 8,0. Полученную суспензию 15подвергают разрушению посредством УЗ,Разрушение проводят в условиях постоянного охлаждения (температура невьппе 10 С) при 22 кГц, 220 В, общеевремя разрушения 3 мин, интервал 20обработки УЗ составил 3 с с перерывом в 2-3 мин для устранения возмбжности инактивации Ферментов в результате разогрева.Полученную после разрушения УЗ 25суспензию центрифугировали при18 тыс. об/мии в течение 20 мин приохлаждении.Полученный буферный экстракт, содержащий 360 мг белка в 100 мл 300,01 М трис-НС 1 буфера рН 8,0, использовали в реакции биосинтеза простагландинов,Б р и м е р 2. К 12,4 мг арами. доновой кислоты (953 чистоты) прибавляют 360 мл белка актиномицетаЗсг.зрЬегоЫез в 100 мл.трис-НС 1 буфера рН 8,0; 5,7 мг гидрохинона. Через раствор пропускают воздух при37 Ф 0,5 С в течение 7 мин, затем 49добавляют этиловый спирт в соотиоше- онии 1:7 (Ч(Ч), экстрагируют простагландины этилацетатом, хроматогра-фируют на ксдЬнках с кремниевой кислотой ГОСТ 4214-70, вымывая простагландины 157-ным метанолом в этилацетате. Получают 3,75 мг ПГРз, 1 мгПГЕз, 0,5 мг ПГА 0,3 мг ПГВАнализ простагландинов.УФ-спектроскопия. Образец ПГ растворяют в этиловом спирте и снимают50спектр в УФ-области света. Имеетсяпоглощение при Л,п224 нм и 280 мм,что соответствует простагландинамгрупп А и В. Образец ПГ изомеризуютв щелочной среде по известной методи 55ке, снимают УФ-спектр - имеется поглощение при 1280 нм, что соответствует ПГЕ. К 0,02 г образца добавляют 2 мл концентрированной серной кислоты и оставляют при комнатной температуре на 2-3 ч. Затеи добавляют 2 мл спирта и снимают спектр в Уф и видимой области света 21.0 - 540 нм. Имеется поглощение при304, 330, 465 и 528 нм, что. соответствует простагландинам группы Р и при 3354, 365, 452, 477 нм, что соответствует ПГЕ з.Тонкослойная хроматография. Выполняют на пластинках "БПцйо 1" со свидетелями ПГ фирмы "Бегча" в системах:1. хлороформ - метанол - уксусная кислота - вода (90 ф 8:1 ф 0,8) Кй ПГР, 0,18-0,20 ПГЕп 0,38-0,40 ф ПГАз + ПГВ 0,6-0,55 2. бензол - диоксан - уксуснаякислота (20 ф 20;1) 3, серный эфир - метанол - уксусная кислота (90:1:2) Биотестирование образцов ПГ осуществлялн на полоске матки или кишки крысы, наблюдая увеличение амплитуды сокращения и учащение ритма.Радиоизотопный метод. Для тестирования образования ПГ использовалась арахидоновая кислбта меченная по углероду, с последующей тонкослойной хроматографией. Идентифицированы ПГР (, ПГЕ у, ПГА з + ПГВ заПредлагаемый способ обеспечивает более высокий выход ПГ. Формула и з о б р е т е н и яй Способ получения простагландинов, включающий ферментативную конверсию арахидоновой кислоты с последующей экстракцией органическим растворите,пем н хроматографическнм выделением продукта, о т л,и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повЬппения выхода продукта, в качестве ферментного препарата используют экстракт БСгерошусез зрЬегоЫез ВКПМ 8-573, про1497185 6дом колоночной хроматографии на кремниевой кислотедукт экстрагируют этилацетатом, авыделение и очистку выполняют метоСоставитель А.Семенов Техред М.Дидык Корректор М.Демчик Редактор М.Келемеш Тираж 352 Заказ 4402/28 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5