Способ консервирования гемолимфы насекомых

ЕТСКИХ ТИЧЕСК СовСОЦИА Б 1)4 А 01 И 1/02 3 ЖЯЖМйБ" Е, Б.: ИСАНИЕ ИЗОБРЕТ У 28гии и пар ьство СССР 1/02, 1981 тносится к биологии,тамологии, и можето при изучении цито" Изобретениев частности кбыть использов выи ци мических и биохи ов функцииомых.ения - предотвращениетов и удлинение срока других вопро емолимфы насек Цель изобре слипания гемоциоч натГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт зоолоазитологии АН ЛитССР(54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ГЕМОЛИМФЪ НАСЕКОМЫХ(57) Изобретение относится к биологии, в частности к энтомологии, и может быть использовано при цитомормор ологических, иммунох их хранения.П р и м е р. Вариант 1, Берут0,05 М раствор полиэтиленгликоля в0,15 М растворе хлористого натрияи закапывают его на предметные стеклапо одной (г 0,03 мп), по две ( 0,06 мп),по три (н 0,09 мп),по четыре ( 0,12 мп)капли и к ним добавляют по однойкапле гемолимфы насекомых, напримергемолимфы гусениц большой или малойпчелиных огневок,Полученную смесь перемешиваютстеклянной палочкой и наблюдают под,ЯО 1496741 2фологических .иммунохимических и других вопросах функции и биохимии гемолимфы.насекомых. Цель изобретения - удлинение срока хранения гемоцитов и предотврашение их слипания - достигается путем добавпения к известному консерванту гемолимфы насекомых, содержащему раствор натрия серноватистокислого пятиводного (0,02-3,0 М), стрептоцида растворимого (0,02-0,26 М) и трилона Б (этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата (0,03-0,22 М), после чего в консервант вводят гемолимфу насекомого в соотношении (1:1)-(4:1), 1 табл. роскопом за поведением гемоцитов.Вариант 2. В мерный 50-миллилитролиндр вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватистокислогоого. Туда же вливают 0,5 мпаствора трилона Б и 2,5 мп 0,35 Мраствора стрептоцида растворимого и до 40,-миллилитровой отмет-, ки добавляют дистиллированной воды. Ма 4 Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,02 стрептоцида растворимого и 0,003 М трилона Б, Раствор закапывают на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0, 12 мп, и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насек мых, перемешивают стеклянной пало кой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация3 1496741рия серноватистокислого пятиводногосоставляет О, 02-0, 03 М, стрептоцидарастворимого - 0,01-0,016 М и трилонаБ - 0,0015-0,0024 М,Вариант 3, В мерный 50-миллилитровый цилиндр вливают 20 мл 0,08 Мраствора натрия серноватнстокислогопятиводного, Туда же вливают 0,92 мл0,29 М раствора трилона Б и 5 мл0,35 И раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитровой отметкидоливают дистиллированной водой, Получают раствор, содержащий 0,04 Мнатрия серноватистокислого пятивод-,ного, 0,04 И стрептоцида растворимого и 0,007 М трилона Б, Раствор закапывают на предметные стекла по одной,две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, к ним добав ляют по одной капле.гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют, В готовой смесис гемолимфой концентрация натрия серноватпстокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,02-0,03 М и трилона Б -0,0035-0,006 М.Вариант 4. В мерный 50-миллилитровый цилиндр вливают 20 мл 0,08 Мраствора натрия серноватистокислогопятпводного. Туда же вливают 0,92 мл0,29 М раствора трилона Б и 10 млО, 35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитровой отметки35доливают дистиллированной водой. Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного,0,09 М стрептоцида растворимого и0,007 М трилона Б, Раствор закапыва Оют на предметные стекла по одной,две, три и четыре капли, что составляет .около 0,03-0,12 мл, и к нимдобавляют,по одной капле гемолимфынасекомых, перемешивают стекляннойпалочкой и микроскопируют, В готовой смеси с гемолимфой концентрациянатрия серноватистокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,045-0,07 Ми трилона Б - 0,0035-0,006 М50Вариант 5, В стеклянную колбувливают 20 мл 0,08 М раствора натриясерноватистокислого пятиводного, Тудаже вливают 10 мл 0,29.раствора трило 4на Б и 10 мл 0,35 М раствора стрептоцида растворимого. Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,09 М стрептоцида растворимого и 0,07 М трилона Б. Раствор закапывают на предметное стекло по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватистокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,045-0,07 М и трилона Б - 0,035-. 0,06 М.Данные опытов по изучению влияния в вариантах приведенных растворов на слипание гемоцитов гемолимфы гусениц большой пчелиной огневки приведены в таблице.гИз приведенных в таблице данных видно, что полиэтиленгликоль .в физиологическом растворе, приготовленный и использованный по известной методике, к сохранению гемоцитов совершенно не пригоден, так как дает 1007. их слипание, в то время, как предложенный консервант в каждом варианте применения снижает процент слипания гемоцитов не свьппе 307, что делает возможным их изучение под микроскопом.Формула изобретенияСпособ консервирования гемолимфы насекомых путем ее введения в раствор консерванта, содержащего натрий серноватистокислый пятиводный в концентрации 0,02-3,0 М; о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью предотвращения слипания гемоцитов и удлинения срока их хранения, перед введением гемолимфы в консервант вводят стрептоцид растворимый в концентрации 0,02-0,26 М и этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата в концентрации 0,003-0,22 М, а введение гемолимфы в раствор консерванта осуществляют в соотношении (1:1)-(1:4) .1496741 Количество испытываемого раствора,1 1 1 0,06 0,09 О, 12 0,15 0,03 Количество добавляемой гемолимфык раствору, мл 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 Процент слипания гемоцитов Составитель Ю,МамаевТехред М,Яндык Корректор Н,Король Редактор М,Бандура Заказ 4351/5 Тираж 421 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Вариантывыполне нияспособа 10015-20 2-5 1-3 2-20 100 5-10 5-10 0-310-15 100 1 т 5 1-3 0-2 5-10 10010-20 1-2 0-3 3-6 10010-30 3-10 2-6 4-27