Штамм бактерий lастовасillus асidорнilus, используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища

//(С 12 И 1/20,1:2 И ГКНТ СССР САНИЕ ЕТЕНИЯ лин,Изобретениегической про быть использова паратов - эубио для нормалиэаци галища,Целью изобрет птамм, обладающиия явл антиби ется новыйтикоустойгезивными енными выр остью и Йствами Штамм Ь с 111 ця аного штаем селекорЬ 11 ця с 1 оорЬ 1 ця има 1.,асЫо.(ии, ИсходВРвыде- взрослой сг. получен иэрЬ 11 ця ВР- ный штамм лен из вла,ас 1 анищ здоров енши ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) 2-й Московский государственныймедицинский институт им,Н.И,Пирогов(56) Ленцнер А,А Миксельсаар М,ЗКирх Р,А, Лактофлора близнецов иэкспериментальных животных одногоромета, - Актуальные вопросы иммунодиагностики и иммунорегуляции, Материалы Ч научной конференции по проблеме клинической иммунологии, Тал1982, с210. тносится к микробиошленности и можето для получения преиков, используемыхмикробиоценоза вла(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 1,АСТОВАС 11 ДЛ)БАС 1 РОРН 1 ЖЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЬЮ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКПРЕПАРАТОВ ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ МИКРОФЛОРЫ ПРИ НАРУШЕНИИМИКРОБИОЦЕНОЗА ВЛАГАЛИЩА(57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности и можетбыть использовано для получения препаратов - эубиотиков, используемыхдля нормализации микробиоценоэа влагалища, Цель изобретения - созданиештамма бактерий 1.ассоЬас 111 ця асЫорЬд 1 ця, обладающего антибиотикоустойчивостью и выращенными адгезивнымисвойствами, Штамм получен путем селекции, депонирован в ЦентральномМузее промьппленных микроорганизмовпод номером ЦМПМ В, Штамм 1.,асйорЬ 11 ця в виде свечей используютдля лечения нарушений микробиоценозавлагалища, 2 табл,Штамм Ьас(.оЬас 111 ця асЫорМ цядепонирован в Центральном Музее промьпппенных микроорганизмов института"ВНИИгенетика под номером ЦМПМВи характеризуется следующимипризнакамиКультурально-морФологическиесвойства. Длинные и тонкие неспорообраэующие клетки окрашиваются грамположительно, В чистой культуре клетки располагаются бессистемно. В жидкой селективной среде МРС растет диффуэно. Характерен придонный рост,вся среда при этом остается прозрачной, иногда бактерии распределяютсяпо стенкам пробирки, 1491884На плотной среде МРС образует колонии Б-типа, круглые с ровными краями, гомогенные, .непрозрачные, пигмента не образуют; профиль колонийвыпуклый, без блеска, легко снимаются петлей с поверхности плотной среды.Штамм может расти на следующихсредах: обезжиренное молоко - на вторые сутки после посева молоко свертывается, с образованием плотного сгустка и отделением сыворотки; на жидкой синтетической среде Н,Наепе 1количество жизнеспособных клеток 15при этом достигает 10 -10 в 1 мл;6первые пассажи штамма дают обильныйпридонный рост на жидкой среде Блаурокка для бифидобактерий; в последующих пересевах рост штамма может 20истощаться; в полужидком (0,77.) агаре Блаурокка (при посеве в пробиркис 9 мл среды) образует слегка выпуклые дисковидные колонии,Физиолого-биохимические признаки,Оптимум роста при 37,5-38,0 С, оптиомум рН 6,2-6,4, анаэроб,Каталазы не образует,. Сбраживает сахарозу, мальтозу,галактозу, фруктозу, лактозу, раффи- З 0нозу; че сбраживает ликсозу, ксилозу, маннит, рамнозу, дульцит, цитруллин, рибозу, сорбит,Кислотообразование при выращивании в обезжиренном молоке 92 (по 35Тернеру),Устойчивость к антибиотикам и антагонистические свойства приведеныв табл. 1.40П р и м е р 1, Изучение влияниялактобактерий 1.,асЫорпд 1 цв на восстановление вагинальной нормофлорыу женщин,Под наблюдением находилось 18 женщин в возрасте 23-35 лет с вагинальным дисбактеризом, У всех женщин отмечался резко выраженный дефицит мо"лочнокислой лактофлоры, Количестволактобактерий во влагалище всех обследованных женщин составляло 1010 кл,/г, В то же время число стафилококков и дрожжей достигало 1 О10 кл,/г исследуемого материала,ьУ 8 женщин определялись энтеробактериив количестве 1 О - 10 кл./г иссле 5дуемого материалаВсе обследованные женщины былиразделены на две равные и эквивалентные группы, Женщины первой группыполучали ежедневно в течение 10 днейместно штамм Е,асддорЬ 1 цз В 9 Вв количестве 1 10 жизнейспособных клеток, Женщинам второйгруппы не назначали местно лактобак-,терии. У женщин первой группы на 1-йи 2-й дни после завершения курса бактериотерапии отмечалась выраженнаянормализация вагинальной микрофлоры,которая сохранялась и в последующиесроки наблюдения, На 7-й день послеотмены лактобактерий количество стафилококков составляло 1 ОЗ кл,/г, энтеробактерий менее 10 кл,/г, дрожжей10 кл,/г, Лактобактерии, занимая доминирующее положение среди другихпредставителей вагинальной микрофлоры, составляли 10 кл,/г и превышалитуровни условно патогенных микроорганизмов в 10 раз.4У женщин второй группы в те жесроки наблюдения сохранялся выраженный вагинальный дисбактериоз: количество энтеробактерий, стафилококкови дрожжей составляло 10 - 10 , 1010 и 10 - 10 кл,/г соответственнопри значительном дефиците лактофлоры10 - 10 ф кл./г,П р и м е р 2. Изучение жизнеспособности лактобактерий Е,асЫорйд 1 цвВ, В, находящихся в вагинальных свечах,Получают биомассу суточной культуры лактобактерий, выросших на жидкойсреде МРС, содержащую 3 10 жизнеспо9собных клеток, Биомассу лактобактерий смешивают с 30 г масла какао изатем в смесь добавляют 2,0 г ланолина, который связывает свободнуюводу и обеспечивает гомогенностьсмеси, После этого гомогенную массураскатывают и выкладывают,.в специальный металлический дозатор, при помощикоторого готовят 30 свечей, Свечихранят в целлофановых обертках в хоолодильнике при 4 С на протяжении10 сут. На 1, 5 и 10-е сут храненияопределяют в свечах количество жизнеспособных лактобактерий, Установлено,что на протяжении 10 сут после изготовления свечей число жизнеспособныхлактобактерий в каждой свече составляет 110 клеток,8 Сравнительные данные по адгезивностной способности штамма представлены в табл, 2,1491884 Продолжение табл.1 Антагонистическая активность Ми нимал ьные ингибирующие концентрации, мгк/мп Препарат Зона звТест- штамм держки роста тест 10 штамма вокруг колоний лакто- бактерий, мм1 Гентамицин Б, дцЬ 11 п С К,Рпетлпопхае К 412 чгР,шдгаЬь 11 з 771 40 12,0 Линкоми 15,0 0,5 Ампиокс 9,0 25 Ампицил 9,0 5, а 1 Ьцз 0,5 лин Формула изобретения Таблица 2 30 Штамм лактбактерий окаэатели адгеэивностик клеткам хоэяина4 Штамм бактерий ЬассоЬас 111 цз ас 1- дорЬд 1 ця, ЦМПМ В(Центральный Музей промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика"), используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища,итроциты 1 гр, Вагикрови нальныеэпитеоцит екс Индексадгеэнвиосщти ге е"яосТаблиц внос 0 нтагонисти инимальепарИсходный Ь,асйо рЬ 11 ца ВРЛолучеиньв 1 луактивность ные инги- бируюшие 1,8 Зона Тест- штамм онцен ации,держк роста 45 тем се тестлекциивтамма1 ас ИорЬ 11 цв тамма окру олон 1,8 6,акт 50, ВтабЬ,Гет,аевСца(иэвестбактерий, мм евигра 00 аПроцент клдились двебактерий,ФеСреднее числоимодействующихоэяинае на которых нахоолее клетки лакто ПолимиксинКанамиактобактерий,вэс одной клеткой Со 11 01 16,000 Индекс адгезивности по отношению1 к эпителиоцитам влагалища определяют следующим образом.Культуру лактобактерий (В) выра 5 щивают на жидкой среде МРС в течение 36 ч, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин и трехкратно отмывают в растворе Хэнкса, Эпителиоциты из влагалищного отделяемого отмывают троекратно в среде 199, после чего подсчитывают их концентрацию в единице объема (с помощью камеры Горячева), Смесь лактобактерий и эпителиоцитов в соотношении 100;1 (в сре де 199) инкубируют 30 мин при 37 С. Для фиксации лактобактерий, взаимодействующих с эпителиоцитами, в смесь добавляют глютаровый альдегид, после чего на предметных .стеклах готовят 20 мазки и окрашивают их по Романовскому-Гимза.Индекс адгезии определяют как среднее число лактобактерий, прикрепленных к одному эпителиоциту (при подсчете на 100 эпителиоцитов, участвующих в адгезии) в препарате,