Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

/5 г"1 6%-нойроиз си ли ленияри пер едоваие точ нос упр ба.Способ ообразом.Цельнуюделяют плаз ествлчется следующим кам добавляют с чества убитой 0 карских дрожжей сы 7, Томская, комнатной темпе госудд ственный комитетПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И РТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙА 1(ТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ(57) Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения иммунного статуса человека. Цель изобретенияповышение точности и упрощение способа. Способ определения фагоцитоза дрожжей заключается в том, чтоцельную кровь центрифугируют, отделяют плазму и к оставшимся клеткам Изобретение относится к не и может быть использован ческой иммунологии для опре иммунного статуса организмавичном иммунологическом исслнии больших контингентов.Цель изобретения - повыш ние и ускорение спосоовь центрифугируют, ота к оставшимся клет спензию равного коли%-ной культуры пепроизводственной ранкубируют 15 мин приатуре, добавляют ге добавляют суспензию убитой О,культуры пекарских дрожжей (пводственная раса 7, Томская), инкубируют 15 мин при комнатной температуре, добавляют гемолитическуюжидкость, готовят мазки, их фиксируют, окрашивают и фагоцитирующиеклетки подсчитьвают. Гемолитическая жидкость имеет следующий состав: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и 0,004%-ной 2-замещен-ной натриевой соли этилендиамййтетра.уксусной кислоты (трилон Б) с доведением рН до 7,2-7,4. Предложенныйсп позволяет увеличить числообследований, прост и может быть ипользован в полевых условиях,1 табл. молитическую жидкость следующего сос-,тава: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и 0,004%-ной 2-замещенной натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона Б) с дове-.дением рН до 7,2-7,4, центрифугируют,готовят мазки, которые фиксируют, ок- фДрашивают и фагоцитирующие клетки под-.считьвают известным способом.П р и м е р 1, Для анализа берут 0,3 мл гепаринизованной крови(20 ед, гепарина на 1 мл крови),центрифугируют при 200 д в течение5 мин, получившуюся плазму осторожно .отбрасывают в чистую пробирку длядальнейшего использования (например,для определения содержания иммуноглобулина)Оставшийся осадок осторож з 145 но, тщательно взбалтывают, часть клеток удаляют, чтобы в пробирке осталось 0,1 мл клеточной взвеси. К оставшейся клеточной взвеси добавляют 0,1 мл дрожжевых частиц в концентрации 0,6 % и выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин. По истечении срока инкубации клеток с дрожжами добавляют гемолитическую жидкость в объеме 5,0 мл с целью лизирования эритроцитов. После наступления лизиса добавляют равный объем среды 199, центрифугируют при 200 я, надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят мазки, которые высушивают, фиксируют метиловым спиртом и окрашивают метиловым зеленым, пиронином, В мазках подсчитывается процент фагоцитирующих нейтрофилов. Общее время постановки реакции 1 ч.П р и м е р 2. Донор В, 31 лет. Диагноз. практически здоров. Гепарилиэированную кровь в количестве 0,2 мл разделяют на 2 равные части, к каждой из которых добавляют равное количество 1,О, мл) пекарских дрожжей в концентрации 0,6 %. Контакт при комнатной температуре, продолжительность которого для 1-й пробирки равнялась 3 мин, для 2-й пробирки продолжительность .контакта была 15 мин. Фагоцитоз в первом случае был равен 31 %, а во втором - 72 %.П р и м е р 3. Донор Д, 36 лет. Диагноз: практически здоровГепаринизированную кровь, взятую в том же объеме, смешали с равным объемом дрожжей в концентрации 0,6 %. Контакт на столе при комнатной температуре для 1-й пробирки равнялся 30 мин, для 2-й 2-15 мин. Количество фагоцитирующих клеток для 1-й пробирки равнялось 100 %, аво второй - 69 %.Сравнение результатов определения фагоцитарной активности нейтрофилов по предложенному и известному способам представлено в таблице.Как видно из таблицы, % фагоцитиру" ющих нейтрофилов в обоихслучаях68954 почти одинаковый, Однако время затформула изобретения Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов, включающий добавление к клеткам цельной крож равного количества убитой нагреванием культуры пекарских дрожжей, инкубирование, приготовление мазков,их фиксацию, окраску и последующийподсчет фагоцитирующих клеток, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и упрощенияспособа, цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму,а к Оставшимсяклеткам добавляют йекарские дрожжипроизводственной расы 7, Томская,а инкубирование проводят в течение4-29 мин при комнатной температуре,далее проводят лизис эритроцитовс доведением рН смеси до 72-7,4. 45 50 раченное для постановки реакции, сократилось в 2 раза.Предложенный способ определения 5фагоцитоэа дрожжей по сравнению сизвестными позволяет быстро, безпотери клеток исследовать фагоцитарную активность нейтрофилов. Сохране ние количества клеток в первоначальном объеме дает возможность уменьшить исходный объем крови до 0,3 мл.Это позволяет использовать для анализа капиллярную кровь иэ пальца, что 15 значительно облегчает и упрощает забор крови для исследования и даетвозможность применить этот способ вдетской практике. Кроме того, предлагаемый способ обеспечивает получе О ние плазмы, которая может быть вдальнейшем использована для другихтестов первичного иммунологическогообследования (определения иммуногло- .булинов). Небольшой объем крови, не обходимый для исследования, быстрота и простота выполнения предложенного способа позволяет применять еГов целях проведения первичного иммунологического исследования в широком ЗО масштабе.6 1456895Ф КоличеПроцент фагоцнтарнойактивности нейтрофилов (в скобках даныминимальные и максиСпособ ремяостаство на- блюдений овки еакции, Ц мальные значения вгруппах) 6(12-74) Известный Предлагамый(16-68) 5 П, Бонарцевийиык Корре Составител Техред Л.О р В. Гири Редактор В. Дан 48/4 Тираж 788 Подписноекомитета по изобретениям и открытияМосква, Ж, Раушская наб., д. 4/5 ЗаказВНИИПИ при ГКНТ ССС осударственног 113035