Способ диагностики силикотуберкулеза

(5 1 Ы 33 ИСАЙКЕ ИЗОБРЕТ ЕЛЬСТ К АВТОРСН нсти- заботельск иональ О,Г. Алексеевалагущина ение - М; лез(54) СПОСОБ КУЛЕЗА (57) Изобрет не, точнее к предназначе ТУБЕРГНОСТИКИ СИДИ ициение относится нологи гностио у лиц,и силн ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Научно-исследовтут гигиены и нро 4 еслеваний АИН СССР(56) Рашевская А.М.силикоза и силикотубеМедицина, 1970, с. 2 клиническои иммуо для ранней диеркулеза 1.п чй контактирующих с высокофиброгеннойкварцсодержащей пылью. Цель изобретения - повышение точности, В пробекрови проводится иммунологическаяидентификация специфических рецепторов к туберкулину на субпопуляцияхлимфоцитов в реакции тройного розеткообразования и при содержании лимфоцитов с рецепторами к туберкулину 7 ЗЕ и лимфоцитов с рецепторамик комплементу и туберкулину ъ, 0,57реакция считается положительной ипозволяет провести раннюю диагностику силикотуберкулеза в 78,6 Х случаевПредлагаемый способ может быть внедрен в практику отделений профпатологии, а также лечебно-диагностическихи фтизиопульмонологическчх стационаров.Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике силикотуберкулеза, возникающего у лиц, работающих в контакте5 с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью.Цель изобретения - повышение точности диагностики силикотуберкулеза.Способ осуществляют следующим образом.Выделяют лимфоциты из гепаринизированной периферической венозной крови обследованных лиц в градиенте 14,5 Е верографина фирмы "Яроа" (ЧССР) на физиологическом растворе, рН - 7,35, о - 1,076, центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин. Из образовавшихся трех слоев отбирают второй слой (мутное кольцо) в силиконированную пробирку и добавляют питательную среду В 199 до 10 мл, дважды отмывают по 2 мин при 1500 об/мин и сливают до 1 мл, смешивают и счи тывают в камере Горяева в пять и более квадратах и разводят до 2 х10 кл/мл.В качестве индикаторных частиц применяют эритроциты барана и эимозан в виде О, 13-ной суспенэии Таллинского химико-фармацевтического завода или зимоэан для определения пропердина Олайнского БХЗ,Последний растирают в фарфоровой ступке с мерным количеством физиологического раствора, который добавляют по каплям.В качестве диагностикума применяют конъюгат предварительно окрашенного зимозана с раствором стандартного туберкулина, содержащего 20000 ТЕ в 1 мл (сухой очищенный туберкулин Предприятия по производству бакпрепаратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток). 45Зимозан предварительно окрашивают в контрастный цвет по способу Хилько Т.ф.Далее 5 мл раствора, содержащего 100000 ТЕ смешивают с 5 мл 0,17-ной 50 взвеси предварительно окрашенного зимозана, инкубируют 60 мин прио37 С, отмывают дважды центрифугированием при 1500 об/мин с физиологическим раствором, приготавливают из 55 осадка 0,17 Х-ную взвесь, которую используют в работе.Постановка реакции. В силиконированную микропробирку с 0,1 мл суспензии лимфоцитов 2 х10 в 1 мл среды У 199 добавляют 0,1 мл 0,5/-ной взвеси эритроцитов барана, 0,1 мл 0,17 -ной взвеси комплекса зимозан-туберкулин, Смесь инкубируют в течение 5 мин прио37 С, осаждают в течение 2 мин при 1500 об/мин, инкубируют в течениео60 мин при 10 С. После этого фиксируют 0,1 мл ЗЕ-ного глютарового альдегида в течение 20 мин. Далее заливают дистиллированной водой до края пробирки, центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость пастеровской пипеткой и готовят мазок на предметном стекле из тщательно ресуспендированного осадка, Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют в течение 10 мин в метиловом или абсолютном этиловом спирте, отмывают 2 мин в дистиллированной воде, подсушивают затем метиловым зеленым и пиронином по Браше,В мазках препаратов подсчитывают при микроскопии под иммерсией 200 лимфоцитов. За розетку принимают лимфоцит, присоединяющий к своей поверхности три и более индикаторные частицы одного типа. При подсчете клеток определяют процентное соотношение восьми субпопуляций лимфоцитов, учитывая, что комплекс зимозан-туберкулин имеет при окраске по Браше синий цвет.Прием реакции роэеткообразования позволяет отдифференцировать субпопуляции розеткообразующих лимфоцитов на основании образования розеток со всеми использованными индикаторами: Л 6, Н ,+,. На основании анализа полученных результатов в группе больных и контрольных лиц выделены в качестве диагностики значимых субпопуляция-лимфоцит только с туберкулиновыми рецепторами, Выявление предлагаемых диагностических показателей возможно только в предлагаемой реакции.При содержании процента лимфоцитов с рецепторами к туберкулину (Л .,) 7,37 реакцию считают положительной и диагностируют силикотуберкулез.П р и м е р 1. Больной 58 лет, в прошлом в процессе работы длительно подвергавшийся воздействию кварцсодержащей пыли, направлен в клинику.1442919 ВНИИПИ Заказ 6379/42 Тираж 847 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 для уточнения диагноза. На рентгенограмме на всем протяжении легкихопределялись мелкопятнистые тени,имеющие слева в верхнем поясе различную величину. Клинически симптомов интоксикации не было, температура нормальная, Лабораторные показатели, включающая общий анализ кровии биохимические данные, воспалительных изменений не выявили. Градуированная кожная туберкулиновая пробаПирке была отрицательной во всехразведениях. При иммунологическом исследовании крови в реакции тройногорозеткообразования с туберкулиномвыявлены Л -7,67. Таким образом,реакция расценивается как положительная, что позволило впервые у больного диагностировать силикотуберкулез20и рекомендовать проведение противотуберкулезной терапии,П р и м е р 2. Больной 60 лет,в прошлом работал в условиях воздействия кварцсодержащей пыли. Направлен в клинику для обследования иуточнения диагноза. На рентгенограмме легких на фоне диффузно усиленногои деформированного легочного рисункавидны множественные различной величи 30ны кольцевидные тени с перифокальнымвоспалением. Клинически имелись симптомы интоксикации (субфебрилитет,слабость, потливость). В общем анализе крови и при биохимическом исследовании определялись воспалительные 35изменения в виде ускоренной СОЭ, повышенного содержания гаптоглобина, фибриногена к сиаловой кислоты, Градуированная реакция Пирке отрицательная,При постановке реакции тройного розеткообраэования Л, - 1,07. Реакциярасценена как отрицательная. Такимобразом, на основании комплексаклинико-рентгенолабораторных исследований, включая микробиологическое 45исследование мокроты, где обнаружены пневмококк и гемолитический стрептококк, у больного диагностированпневмокониоз, осложненный хроническойнеспецифической инфекцией с формированием кист и с перифокальным воспалением вокруг них. Проводилась неспецифическая антибактериальная терапияс положительным эффектом. Таким образом, преимуществом предлагаемого способа диагностики является возможность установления диагнозасиликотуребкулеза на ранних этапах,в том числе и при клинически не определяемой активности силикотуберкулезного процесса, а также и при туберкулиновой энергии, что являетсяположительной стороной и важно длясвоевременного назначения специфического лечения,Диагностическая ценность изученау 30 больных с подозрением на силикотуберкулез в возрасте от 45 до60 лет с длительным стажем работы впылевых условиях.По клинико-рентгенологическимкритериям диагноз силикотуберкулезавызывал затруднения у больных с отрицательной кожной туберкулиновой пробой Пирке (14 человек). Всем больным была проведена предлагаемая реакция тройного розеткообразования, которая окалазась положительной у 11 из 4 больных с отрицательной туберкулиновой кожной пробой (78,6 Х), что позволило установить диагноз силикотуберкулеэа на ранней стадии его развития, ко 1 да остальные методы этого не позволили и повысить точность диагностики на 283.Предлагаемый способ осуществляется дп чхТго и исключает обострение заболевания в результате диагностического исследования. Формула изобретения Способ диагностики силикотуберкулеза, включающий исследования больного с помощью туберкулина, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности, у больного выделяют иэ крови лимфоциты, добавляют эритроциты барана и обрабатывают окрашенным коньюГатом зимозана с туберкулином, подсчитывают розеткообразующие клетки и при содержании розеткообразующих туберкулин-зимозановых клеток равном 3/ и вьппе по отношению к общему числу роэеткообразующих клеток диагносцируют силикотуберкулеэ.