Способ формирования отделов нефрона в имплантатах

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХСПУБЛИН УДАРСТВЕННЫЙ КОМИ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ СССР ТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН цинскии кистиС. Соловьев ерностии органов(56) Лазаренко Ф.М. Закономроста и превращения тканейв условиях культивированияции) их в организме. - М.: Медгиз,1959, с. 160-183,(54) СПОСОБ ФОРМИРОВАНИЯ ОТДЕЛОВ НЕФРОНА В ИМПЛАНТАТАХ(57) Изобретение относится к оэкспериментальной медицины и можетбыть исйользовано для образования функционирующих структур, нефроновпочки, предназначено для образованияфункционирующих структур органов,создания экспериментальной модели дляапробации фармакологических веществ,определения жизнеспособности биоптатов. Целью изобретения, является образование функционирующих зрелых отделов нефрона в имплантатах путемтого, что через 15-30 мин после извлечения почки у линейного животногодонора и измельчения ее до размеров0,5-1 мм проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществв соотношении 1:2 однолинейным животным-реципиентам равного или меньшеговозраста.Изобретение относится к эксперй= ментальной медицине и может быть использовано для образования функциони, рующих структур органон (образованиефункционирующих структур нефронов может быть использовано для определения жизнеспособности биоптатов и органов для трансплантациицля излучения органотипической детерминации тканей, 10 для изучения влияния на нее различных медикаментозных средств)Целью изобретения является образование функционирующих отделов нефрона, что достигается совместной имплантацией коркового и мозгового ве,ществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у доно ра.Способ осуществляют следующим об разом.У наркотизированного линейного животного-донора в стерильных условяях извлекают почку, скальпелем иссе,кают кусочек коркового и прилежащий к нему кусочек мозгового веществ в соотношении 1;2 и измельчают до размера 0,5-1,0 мм, кусочки коркового ,и мозгового веществ смешивают и имплантируют подкожно животному-реципиенту той же линии. Период от извлечения органа у донора до имплантации кусочков его реципиенту составляет не более 30 мин. Используют реци 35 пиентов и доноров одной линии и одного пола, при этом возраст реципиента не превышает возраст донора, Через 6-8 сут имплантаты извлекают из ар анизма реципиента, фиксируют в жид- кости Карнуа, заливают в парафин и отовят срезы для гистологического И гистохимического анализов. На гис" тологичееком препарате определяют. степень морфологической дифференцировки новообразованньж в имплантатах отделах.нефронов, гистохимически определяют степень функциональной зрелости этих структур50Пр и м е р 1. Проведена имплантация вещества почки линейных крыс"Август" однолинейным животным, Встерильных условиях под эфирным наркозом у донора в возрасте 4 мес извлекали левую Почку, в стерильной чаш 55ке Петри скальпелем вырезали кусочекг 1 очки, включающий на 1/3 корковое ииа 2/3 мозговое вешества, размель" чали корковое, а затем мозговое вещество до размера кусочков 0,5- 1,0 мм , смешивали кусочки корконозго и мозгового веществ в соотношении 1:2 и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента в возрасте 2,5 мес внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента зашивали стерильным шовным материалом. От момента извлечения почки у донора до имплантации прошло 20 мин.На стадии 8 сут опыта животному внутрибрюшинно вводили питуитрин из расчета 5 ЕЛ на 1 кг веса животного- реципиента. Через 30 мин после вве" дения провели эвтаназию реципиента путем декаптации, У реципиента экстирпировали почки и имплантат, фиксировали в жидкости Карнуа 1 ч, заливали в парафин, На гистологических срезах толщиной 5-7 мкм проводили гистохимическую реакцию связывания коллоидального железа по методу Хей" ла. Окрашенные срезы микроскопировали. В препаратах в разрастающейся соединительной ткани видны новообразованные эпителиальные структуры различных отделов нефрона, почечные тельца, включающие эпителиальный и соединительно-тканный компоненты и по своим параметрам идентичные таковым в интактных почках, В межклеточных пространствах новообразованных канальцев накапливаются гликозаминогликаны, при этом гистохимическая картина в имплантатах аналогична таковой в почках реципиента. Это, кроме морфологических тестов, служит еще одним подтверждением функциональной зрелости новообразованных в имплантатах отделов нефронов.П р и м е р 2. Проведена имплантация ткани почки линейных крыс "Вистар" однолинейным животным-реципиентам, Как донор, так и реципиент имели одинаковый возраст 3 мес. В, стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекали левую почку, в стерильной чашке Петри отделили корковое вещество от мозгового, с помощью торсионных весов отделили кусочек мозгового вещества весом 005 г и кусочек коркового вещества весом 0,025 г,Полученные кусочки коркового и мозгового веществ скальпелем размельчили до размера кусочков. 0,5-1,0 мм, смеша,пи кусочки коркового и мозгового веществв соотношении 1:2, через разрез на коже брюшной стенки реципиента сте-, рильным зондом внесли полученную массу в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента ушили наглрухо. От5 момента извлечения почки у донора до наложения шва на разрез на коже реципиента прошло 18 мин.На стадии 6 сут опыта животному 10 внутрибрюшинно ввели питуитрин из расчета 5 Ед на 1 кг веса животного. Через 30 мин после введения проведена эвтаназия реципиента путем декапитации, у животного экстирпированы имплантаты и почки, зафиксированы в жидкости Карнуа 1 ч, залиты в парафин. Изготовлены гистологические срезы толщиной 5-7 мкм, на которых проведена комплексная реакция связыва ния коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Мак-Манусу. В полученных гистологических препаратах четко видны сформированные почечные тельца и срезы канальцев различных 25 отделов нефрона, при этом гистохимическая картина и сформированных дистальных отделах аналогична таковой в почках реципиента, что подтверждает функциональную дифференцировку отделов нефрона в имплантатах., П р и м е р 3. Проведена имплантация ткани линейных крыс "Август" однолинейным животным. Возраст донора и реципиента равен 3 мес. В стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекли левую почку, в стерильной чашке Петри скальпелем вырезали кусочек коркового вещества весом 0,03 г и кусочек мозгового ве щества весом 0,06 г, размельчили полученные кусочки до размера 0,5- 1,0 мм, смешали полученные кусочки коркового и мозгового веществ в общую массу и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиентаушили стерильным шовным материалом. От момента извлечения почки у донора до имплантации ткани почки в подкожную клетчатку реципиента прошло 16 мин.На стадии 15 сут опыта у реципиента под эфирным наркозом экстирпировали имплантат, зафиксировали в жидкости Карнуа, залили в парафин, На гистологических срезах толщиной 5- 7 мкм проведена комплексная реакция связывания коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Мак-Манусу. Проведена докраска гематоксилином Гарриса. На гистологических срезах хорошо видны сформированные канальцы различных отделов нефрона и почечныетельца по своей морфологической структуре аналогичные таковым в почках. Гистохимическая картина выявления нейтральных гликопротеинов и гликозаминогликанов позволяет четко дифференцировать сформированные прокснмальные и дистальные отделы нефрона, что подтверждает органотипическую детерминацию эпителия неФрона и возможность Формирования дифференцированных отделов нефрона в имплантатах,Время (15-30 мин) пребывания материала после извлечения из организма донора до момента имплантации обусловлено тем, что при хранении донорского материала более 30 мин наступают изменения в компонентах нефронов и мочеотводящих путей в результате ишемизации тканей. Имплантация длительно ишемизированного материала не позволяет сформировать отделы нефрона. Имплантация материала ранее 15 мин невозможна по техническим причинам. Соотношение коркового и мозгового веществ 1:2 подобрано экспериментальным путем.Предлагаемый способ позволяет мо-, делировать в имплантатах индуктивную систему нефрогенеза, устранить иммунологический конфликт в системе донор-реципиент, сохраняет жизнеспособность имплантируемых тканей, обеспечивает функциональную дифференцировку образующихся в имплантатах отделов нефрона.Ф о р м у л а изобретенияСпособ формирования отделов нефро. на в имплантатах, включающий извлечение почки у донора, измельчение ее и имплантацию реципиенту, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью образования функционирующих отделов нефрона, проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у,тонора,