Способ получения гепарина

, ДР ьердь Кереи,дольф, Палржебет Несмел е и 8. 8) 5.7(08ва И,ВМ Способы пол77, с. 11. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНАпутем экстрагирования гепаринсодержащего сырья в щелочных условиях принагревании, отличающийсятем, что, с целью повышения выходацелевого продукта, гепаринсодержащеесырье с 90-957.-ным содержанием сухого вещества обрабатывают 1,5127-ным раствором поваренной солипри рН 8-12,8 при периодической илинепрерывной противоточной экстракциипри 20-80 С,30 В качестве сырья, богатого гепарином, берется сырье, которое содержит минимально на 5-357. (в расчете на сухое вещество) больше гепарина,55 чем любое природное сырье.1Противоточную экстракцию проводят в аппарате периодического действия вплоть до полного извлечения или же Изобретение относится к медицине,а именно к фармакологии, в частностик способам получения фармацевтическихпрепаратов.5Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигаетсятем, что гепаринсодержащее сырье с90-953-ным содержанием сухого вещества обрабатывают 1,5-127-ным растворомповаренной соли при рН 8- 12,8 припериодической или непрерывной проти-.овоточной экстракции при 20-80 С.Способ осуществляют следующим 15образом.Богатое гепарином, аморфное, зернистое, с устойчивой формой сырье сбольшой удельной поверхностью, содержащее 90-957 сухого вещества, в воднои среде при температуре и величинерН, оптимальных для данного способапереработки сырья, подвергают периодической или непрерывной противоточной экстракции солевым раствором. 25Противоточную экстракцию проводятпри 20-80 С, концентрации электролита(концентрации соли 1,5-12,03),и прирН 8-12,8 или в 0,5-1,0 н.щелочномрастворе,В ходе всего процесса экстракциицелесообразно поддерживать постоянство концентрации электролита, температуры и величины рН. Соотношениемежду экстругирующим солевым раст 35вором и сырьем следует установить таким образом, чтобы образующаяся экстракционная вытяжка содержала 150300 1 Е/мл гепарина. Для этого целесообразно поддерживать соотношениесухого вещества и жидкости примерноравным 1:5. Для установления величины рН применяют основания одновалентных или многовалентных металлов, целесообразно едкий натр или другиещелочи, обычно используемые для экстракции гепарина, В качестве электролита применяют любые соли, инертныепо отношению к гепарину, предпочтительно хлористый натрий.50 непрерывным образом, целесообразно в Н-образном экстракторе.В качестве исходного материала применяют богатый гепарином сухой концентрат, который является зернистым и аморфным и имеет высокую удельную поверхность.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1, Содержащее гепарин сырье аутолиэируют и экстрагируют в присутствии толуола растворами элект ролита, 20 кг этого материала интенсивно перемешивают в реакторе с рубашкой вместе со 100 кг тонкоизмельченных свиных кишок, содержащих 18% сухого вещества и 150 л 10%-ного раствора сульфата аммония. После. смео шения смесь нагревают до 38 С. Затем при перемешивании устанавливают рН смеси 8,8-9,2 прибавлением 403-ного раствора едкого натра. Чтобы избежать вредных микробиологических процессов к смеси прибавляют 3 л толуола.После прибавления ферментов при 38 С в течение 36 ч проводят аутолиз, при этом смесь время от времени перемешивают, Контролируют рН среды каждые 6 ч и по мере надобности устанавливают на заданную величину прибавлением 403-ного раствора едкого натра.После 36 ч аутолиза рН среды уста. навливают равным 7,3-7,7 187.-ной соляной кислотой и смесь кипятят. После 10-минутного кипячения отделяют скоагулировавшиеся части на сито чатом фильтре. фильтрат при 60 С сепарируют, освободив его от жира. Получают 638 г темно-коричневого экстракционного бульона, концентрация в котором гепарина составляет 18,1 1 Е/мл, что соответствует 11,54 М 1 Е гепарина, Выход составляет ,лишь 767.П р и м е р 2. 5,0 кг содержащего гепарин сухого концентрата разделяют на 10 равных частей, Эти порции, по 0,5 кг каждая, обрабатывают способом периодической пятиступенчатой противоточной экстракции. Отдельные стадии проводят следующим образом. Первую порцию высушенного концентратао органа и подогретого до 40 С 0,25 н.раствора .едкого натра, содержащего 67 поваренной соли, прибавляют к 3,2 л экстракционной смеси, Через 20 мин экстрактотфильтровыва1375115 ВНИИПИ Заказ 622/57 Тираж 655 Подписное Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ют под разрежением через воронкуБюхнера. Поверхность фильтра образуется металлической сеткой с диаметром отверстий 0,6 мм. Первый экстракционный раствор собирают, определяютего объем и замеряют его гепариновуюактивность.Влажный остаток органа, оставшийсяна проволочном сите, снова смешиваютс подогретым до 40 С 0,25 н,раствором едкого натра, содержащим 6 Ж поваренной соли, при этом снова устанавливают объем экстракционной смеси 3,2 л.Вторую экстракцию уже однажды проэкстрагированной массы органа проводят таким же способом, Фильтрат,образующийся при второй экстракциипервой порции концентрата органа,смешивают со второй порцией высушенного концентрата. Снова устанавливают объем экстракционной смеси,3,2 л,Последующие стадии соответственнопроводят аналогично. В конечном результате проводят периодическую противоточную экстракцию в 5 стадий.Зкстракционный объем всегда составляет 3,2 л, температура 40 С.Из 5 кг исходного материала, содержащего 90,4 Е сухого вещества,пятиступенчатой периодической экстракцией получают 2,599 М 1 Е гепарина.П р и и е р 3. Содержащий гепарин сухой концентрат экстрагируют.40 кг сырого материала хорошоперемешивают с 400 л воды. Устанавливают рН 2,7 соляной кислотой иосмесь нагревают до 38 С. Прибавляютпепсин в количестве, соответствующем10 кг слизистой оболочки свиного желудка, затем снова устанавливают рН 2,7. При постоянном перемешивании в течение 20 ч проводят протеолиз, поддерживают температуру 37-39 С. 45 После 20-часового протеолиза устанавливают рН среды 8,0 40 Х-ным раствором едкого натра и к смеси прибавляютопри 37 С 20 л активированной смеси поджелудочной железы. Второй протеолиз продолжается 10 ч. Каждые 2 ч контролируют величину рН и по мере необходимости снова устанавливают ее 8,0 при помощи раствора едкого натра, Температуру поддерживают 37 С. После второго протеолиза смесь кипятят и затем фильтруют через ситчатый фильтр. Получают 417 л фильтрата коричневого цвета, концентрация гепарина в котором составляет 32,0 1 Е/мл, т,е, общее содержание гепарина равно 13,32 М 1 Е.П р и м е р 4, Богатый гепарином сухой концентрат экстрагируют непрерывным противоточным способом в П -образном экстракторе.Высушенный исходный материал непрерывно подают в аппарат при помощи шнекового доза- тора. Из распылительной головки, расположенной над дозатором, прибавляюто двойной объем подогретого до 70 С 0,55 н.раствора едкого натра, содержащего 67. поваренной соли. Время пребывания материала в шнековом доваторе составляет 10 мин.Противотоком к набухшему материа лу, находящемуся в отдельных камерах Н-образного зкстрактора, подают 0,1 н.раствора едкого натра, содержащего бповаренной соли. В ходе непрерывной противоточной экстракции поддерживают постояннуюотемпературу 50 С, с целью улучшения массообмена включают вибратор, расположенный у днища П-образного экстрактора. Объем непрерывно образующегося почти совершенно прозрачного экстракта светло-соломенно-желтого цвета замеряют при помощи ротаметра. Концентрацию гепарина определяют в пробах, отбираемых каждые 0,5 ч.Гепарин, содержащийся в экстракте, высаждают также непрерывно, образующийся осадок отделяют на фильтре барабанного типа. Применяемая аппаратура имеет производительность 10 кг сухого концент рата/ч, время пребывания составляет 35 мин, При 10-часовой работе получают 210 л экстракта, средняя активность которого по гепарину составляет 252 1 Е/мл, Выход составляет 52,9 М 1 Е в расчете на 100 кг исходного материала, содержащего 90,4 Е сухого вещества,