Способ определения сзв рецепции нейтрофилов человека

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 148 1 И 33 54 ИЗОБРЕТЕН ИС ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ М АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Горьковский научно-исследовательский педиатрический институти Горьковский государственный медицинский институт им. С.М. Кирова(56) Б.Вагге 11, О.Оагга 11 у, Се 11 зГасе Ье 1 егояеЬеСу оГ Ьлчап Ыоойпеи 1 гор 1 п.1 з апй шопосуез. - Вг 1 С 1Х. оГ НаешаСо 1 ояу, 1979, 43, р. 57588.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЗв РЕЦЕПЦИНЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к иммунологик. Цель изобретения - упрощениеспособа. Взвесь сефадекса смешиваютс цельной сывороткой, инкубируют иотмывают, После инкубации сефадексас нейтрофилами в пробирки добавляютсреду 199. Затем подсчитывают числоклеток в супернатанте. Способ можетбыть использован для оценки состояния защитной системы организма.1361489 В опыте нейтрофилы активнее присоединяются к сефадексу, а меньшее их количество. по сравнению с контролем остается в надосадке. Разделив количество нейтрофилов в опыте на количество нейтрофилов в контроле и умножив на 100, получают процент клеток, оставшихся в надосадке. Следовательно, оставшиеся клетки (от 100% вычесть % клеток в супернатанте) присоединяются к сефадексу - это и.есть % клеток, содержащих рецепторы к СЗв-фактору комплемента.1 П р и м е р 1. Проводят оценкуСЗв-рецепторов нейтрофилов у исследуемого донора, 21 г. В стерильныхусловиях из вены получают 2,5 мл крови, Нейтрофилы выделяют путем центрифугирования в двойном градиентеплотности (1,116 и 1,077 г/см ) фиколл-верографин. После двухкратногоотмывания в среде 199 (общий объем20 мл) клетки ресуспендируют в томже растворе. Конечная концентрацияклеток нейтрофилов 5 млн/мл, Всеманипуляции проводят в силиконированной стеклянной посуде,1 мл взвеси сефадекса смешиваютс 1 мп цельной сыворотки, инкубируют30 мин при 37 , трижды отмывают физиологическим раствором (общий объем15 мл) и взвешивают в физиологическом растворе, конечная концентрацияопсонизированного сефадекса 10 мг/мл,В контроле используют неопсонизированньп сефадекс, Инкубация 30 минпри 37 С. Во время инкубации сефадекс с нейтрофилами. надосадок переливают в другую пробирку, предварительно измерив его объем, к осадкудобавляют еще 3 мл среды 199 для отмывки от свободных (несвязанных)нейтрофилов. Определяют общий объемнадосадка, В камере Горяева подсчитывают число клеток в супернатантепосле инкубации нейтрофилов с опсонизированным (опыт) и неопсонизированным (контроль) сефадексом, Опыт 2 Ь,контроль 88, ПРН СЗв = 71%,Использование предлагаемого способа определения СЗв рецепции нейтрофилов позволяет упростить способ засчет снижения количества необходимойдонорской крови при использовании 50 где опыт - количество нейтрофилов,подсчитанных в 225 квадратах камеры Горяеваиз опытной пробы;контроль- количество нейтрофилов,подсчитанных в 225 квадИзобретение относится к медицине,а именно к иммунологии, и может бытьиспользовано для определения наличияСЗв рецепторов на нейтрофилах и оцен 5ки состояния защитной системы организма,Целью изобретения является упрощение способа.Способ осуществляют следующим образом,Используют коммерческий сефадекс0-25, который заливают дистиллированной водой, затем доводят до концентрации 100 мг/мл. Для опсонизации 15сефадекса используют лиофилизированный пул сывороток крови. Смешивают1 мл взвеси сефадекса и 1 мл цельнойсыворотки, инкубируют 30 мин при37 С, трижды отмывают физиологическим 20раствором, взвешивают в исходномобъеме (рабочая концентрация опсонизированного сефадекса 10 мг/мл). Хранят при 4 С. Нейтрофилы выделяют изкрови здоровых доноров в двойном25градиенте плотности фиколл-верографин(1,116 и 1,077 г/смз), суспендируютв среде 199 в концентрации клеток5. млн./мл. Затем смешивают по 0,2 мпвзвеси опсонизированного сефадекса . 30и нейтрофилов (контролем служитреакция с неопсониэированным сефадексом), инкубируют 30 мин при 37,С.После инкубации сефадекса с нейтрофилами в каждую пробирку заливают по3 мл среды 199. Через 2 мин, когдагранулы сефадекса (присоединившиенейтрофилы и беэ них ) осядут на днопробирки, подсчитывают число клетокв супернатанте с помощью камеры Горяева, Подсчет клеток для опытной(с опсонизированным сефадексом) иконтрольной (с неопсонизированным сефадексом) проб ведется по всей камере Горяева (в 225 квадратах). Показатель СЗв рецепции нейтрофилов(ПРН) - % нейтрофилов, содержащих рецепторы к СЗв, выражается по формуле ПРН СЗв = 100 - ( --- х 100) опыт контрольратах камеры Горяева из контрольной пробы,з 1361489 4свежих донорских эритроцитов в методе ф о р м у л а и з о б р е т е н и яопределения СЗв рецепторов 1). Составитель В.Литовченко Редактор И.Булла Техред А.Кравчук Корректор О.Кравцова Заказ 6220/45 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. проектная, 4 Кроме того, способ обладает хорошей воспроизводимостью, стабильностью тест-системы срок годности сефадекса, покрытого комплементом, 12 мес и более), может применяться в клинической практике для динамического наблюдения за больными. Способ определения СЗв рецепции нейтрофилов человека, включающий инкубацию нейтрофилов с носителем, обработанным комплементом, и подсчет клеток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве носителя используют сефадекс.