Способ получения вакцины против клещевого энцефалита

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСНИ ЯО 13 А РЕСПУБЛИК 1 К 39/12 ОПИСК АВТО АНИЕ ИЗОБРЕТЕН(21) (22) (46) (71) изводст х п овьппеого пля выы кле ель изобрости и вых чет испол вируса ин сть спосо я к то Л.И рус .клещевого энц в культуре клето зеленых мартышек,ьн поче ыращиваю ои ткани ин 53 ор вис инте 088.8) 15.37 одер- ильтеПриют. астСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ МУ СВИДЕТЕЛЬСТ 3860499/28-1320.02.8507.11.87. Бюл. У 41Институт полиомиелита и вируснцефалитов АМН СССРМ.П. Чумаков, С.Г. Рубин,Авдеева, И.В. Семашко, Я.А. Саов, Л.И. Мартьянова и А.В. Гаг(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ . КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА(57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности, в ч ности к прпаратов.иммуногендукта заращивания руса осуществляют м рвалом в 2-3 дня, з жащую жидкость инак руют и сорбируют на обходимости вакцинутабл. вакцинытения -ода целезованияй культура сводит огократ тем вир ивируют носител высушив50 Готовая серия инактивированной культуральной вакцины КЭ из вируса, выращенного в культурах КПЗМ, перед выпуском для применения может быть поди вергнута, при желании, сорбированию на гидроокиси алюминия (02% А 1(ОН) )3 или высушена с подходящим наполнителем,7 2П р и м е р 2. Вакцина из КПЗМ серии 11 1/6329/1/4000/37 С.Первый сбор вируса иэ зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки 9 6329 с титром 10в 1 мл8,1обрабатывают формалином 1:4000 при 37 С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут.Содержание белка по Несслеру в серии Ф 1 131 мкг/мл. Для определения КЩ берут четыре трехкратных разведейия вакцины (1:3, 1:10, 1:30 и 1;90). К этим разведениям добавляют квасцы до 0,2% А 1(ОН) в качествеэадъюванта. Вакцину вводят четырем группам по 10 мышей на разведение подкожно по 0,5 мл трехкратно. Затем через неделю после третьей инъекции вводят живой вирус КЭ (штамм Абсеттаров) м 200 летальных доз, учет результатов опыта через 14 дней после заражения вирусом КЭ. 50%-ная защита вакцинированных мышей соответствует разведению исходной вакцины В 1 1:41,7. Из этих данных следует, что 1 МИД для серии У 1 равна 0,024 мп (3, 14 мкг белка), Для одной прививочной дозы вакцины в объеме 0,5 мл обычно рекомендуется 30 МИД антигена, что составляет в данном случае 0,48 мл исходной цельной вакцины. Содержание белка в прививочной дозе вакцины У 1 63 мкг. Следовательно, на 1 мг белка в вакцине У 1 приходится антигена 318 МИД . В 1 л вакцины серии Р 1 в КПЗМ содержится 2083 прививочные дозы.П р и м е р 3. Вакцина из КПЗМ серии У 2/6329/1/2000/32 ОС.Часть первого сбора вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки У 6329 с титром вируса 10в 1 мл обрабатывают форма 8,4лином 1:2000 при 32 С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут.Содержание белка по Несслеру в серии У 2 131 мкг/мп. Определение МИД на мышах проводят аналогично примеру 9 2. 50%-ная защита мышей, вакцинированных серией Ф 2, соответствует разведению исходной вакцины 1:64,6. Следовательно одна МИД 50 вакцины серии Р 2 равна 0,155 мл. Для одной прививочной дозы вакцины в объеме 0,5 мл обычно берут 20 КЩ О, что составляет в данном случае 0,31 мл неразведенной вакцины серии У 2. В та1349757 4Этому количеству вакцины соответствует 36,9 мкг белка. На 1 мг белка всерии В 3 вакцины приходится,542 МИДрВ 1 л вакцины серии В 3 содержится54065 прививочных дозСравнительные данные по чистоте,иммуногенности и продуктивности приведены в таблице. Белок в 0,5 мл вак цины мкг Количество Цена однойпрививочных прививочнойдоз в 1 л дозывакцины Вакцина Антиген (МИД в 0;5 мл) Известная неконцентрированная,неочищенная, из вируса на клетках куриного эмбриона(1960-1986 г.) Индекс реа)зистентнос-500 ти 5,0-7,0 1000 10 коп. очишенная, концентрированная (хроматография), из вируса на клетках куриного эмбриона (1983-1986 г) 40 (после 25- кратной концентрации) 28-38(сред.32) 10-25 2 руб. 92 коп. Предлагаемая (неконцентрированная, неочищенная,из вируса на КПЗМ) 21-62д)2000-6000 с 10 коп. (41,5) (среди.3500) (возможно) 30-60 а) В прививочной дозе этой неконцентрированной, неочищенной вакцины из виру-.са на клетках куриного эмбриона в 1 мл содержится 420-1000 мкг белка.б) В 1 мп очищенной концентрированной вакцины содержится 22-51 мкг белка.в) Возможные колебания зависят от метода определения белка по Несслеру илипо Лоури в различных сериях препарата.г) Иммуногенность определялась только по методу вычисления индекса резистивности, Вакцина имела удовлетворительную иммуногенность при индексе, равном 6, 0-8,0.д) По содержанию антигена, выращенного в единицах МИД , вакцина из КПЗМ неменее иммуногенна, чем очищенная концентрированная вакцина. ком количестве вакцины 9 2 содержится 40,6 мкг белка. Следовательно, на 1 мг белка в серии 9 2 приходится 492 МИД . В 1 л вакцины У 2 содержится 3225 прививочных доз.П р и м е р 4. Вакцина из КПЗМ серии 9 3/6329/3/2000/32 С.Третий сбор вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой марВ,З тышки У 6329 с титром вируса 10в 1 мл обрабатывают формалином 1:2000 при 32"С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут. Содержание белка по Несслеру в серии У 3 16 150 мкг/мл. Определение МИД , на мышах проводят аналогично примеру У 2.503-ная защита мышей, вакцинированных серией 9 3, соответствует разведению исходной вакцины 1:81,3. Следователь но, 1 МИД в объеме 0,5 мл равна560,0123 мп цельной вакцины 9 3, а в 20 МИД однои прививочнои дозы5 о, 0,246 мл неразведенной вакцины Ф 3. Формула изобретенияСпособ получения вакцины против клещевого энцефалитапутем выращивания вируса в культуре ткани, сбора вируса, инактивации его формалином с последующим фильтрованием, сорбцией и/или высушиванием, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенности и выхода целевого продукта, выращивание вируса осуществляют в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, а сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня.