Способ определения диметилсульфоксида

(19)(И) А 4 А 61 К 31/10 С 01 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУгЯ р 2 ь. Ъг вной дАН СССбидин ел 67,(56) ч. 5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Институт высшей нености и нейрофизиологии(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИИЕТИЛСУЛЬфОКСИДА(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - упрощениеспособа, Гомогенат мозга крысы центрифугируют. Супернатант вносят в пробирки с диьйтилсульфоксидом, раствором додецилсульфата натрия, тиобарбитуровой кислоты и выдерживают накипящей водяной бане. Пробы охлаждают и измеряют оптическую плотностьпри 533 нм. 1 ил. 1 табл.Изобретение относится к биохимиии медицине и может быть использованов фармакологии для определения концентрации диметилсульфоксида (ДМСО)в биологических объектах и лекарственных препаратах,Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа стадий,Цель достигается за счет того,что пробу с ДМСО добавляют в систему, содержащую липиды, в условиях,обеспечивающих протекание перекисного окисления липидов и образованиемалонового диальдегида, измеряютуровень малонового диальдегида спектрофотометрически в реакции с тиобарбитуровой кислотой, а концентрациюДМСО определяют по ингибированию образования малонового диальдегида,причем степень ингибирования пропорциональна десятичному логарифму концентрации ДМСО. Концентрацию ДМСО вопытной пробе определяют по предварительно построенному калибровочномуграфику зависимости оптической плотности от концентрации ДМСО,На чертеже показана зависимостьоптической плотности от концентрацииДМСО.П р и м е р 1, В качестве системы, обеспечивающей протекание перекисного окисления липидов и генерацию малоновогодиальдегида, испол:ьзуют гомогенат мозга крысы, Крысудекапитируют, выделяют мозг и гомогенизируют в тройном объеме холодного физиологического раствора, Гомогенат центрифугируют 5 мин при4000 об/мин и вносят по 200 мкл супернатанта в ряд пробирок.фВ эти про бирки вносят также ДМСО в концентрации от 0,5 мкг до 20 мг/мл затем .последовательно вносят 200 мкл 8,1% -ного раствора додецилсульфата натрия,1,5 мл 0,8%-ного раствора тиобарбиту ровой кислоты, объем пробы доводят.до 4 мл дистиллированной водой и вы-держивают на кипящей водяной бане втечение б 0 мин, Пробы охлаждают иизмеряют оптическую плотность при 50533 нм. Определение малонового диальдегида проводят по известному методу.Полученные данные представлены втаблице и на чертеже. 55 Как видно из чертежа, оптическая плотность линейно зависит от десятичного логарифма концентрации ДМСО в 68 2интервале концентраций 0,5-200 мкг/мл, Таким образом концентрация ДМСО может быть определена по кривой или по Формуле где С - концентрация ДМСО10 мкг/млК - тангенс угла наклона калибровочной кривой;ОД - оптическая плотность при533 нм.В качестве системы генерации малонового диальдегида можно использовать любую систему, содержащую липиды в присутствии кислорода: суспензию эритроцитов, эритроцитарные мембраны, гомогенаты тканей, модельныесистемы, содержащие фосфолипиды илиненасыщенные жирные кислоты и т.д.Объекты, в которых определяетсяДМСО, также могут бьть любыми. В случае раствора ДМСО неизвестной концентрации этот раствор вносят в пробы непосредственно по примеру 1, Если необходимо определить концентрацию ДМСО в ткани, проводят экстракцию ДМСО из пробы обычным способом,например хлороформом, затем при необходимости концентрируют в ацетонеи добавляют в пробирки. Возможнаэкстракция ДМСО из тканей водой споследующим непосредственным внесением экстракта в пробу.П р и м е р 2. Крысам в течениетрех недель вводят ДМСО в дозе 1 мл20%-ного ДМСО в день внутрибрюшинно,Затем крыс декапитируют, выделяютмозг, гомогенизируют и экстрагируютгомогенат хлороформом Хлороформенный экстракт переводят в ацетон, концентрируют и вносят аликвоту в пробы,содержащие супернатант гомогенатамозга контрольных животных и все реактивы для определения малонового ди-альдегида с тиобарбитуровой кислотой(пример 1). Пробы обрабатывают какописано вьппе и измеряют их оптическуюплотность. По оптической плотности0,09 при помоши калибровочной кривой(чертеж) находят содержание ДМСО впробе 0,1 мг/мл, С учетом разведениягомогената, объемов экстрагентов иобъема аликвоты рассчитывают, что содержание ДМСО в пробе мозга крыс составляет 35 мкг/мл,Предлагаемый способ определенияДМСО по сравнению с иэвестными спо