Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии

СОЮЗ СО 8 ЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 9) 1 К 37 12 НЫЙ КОМИТЕТ СССРОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ГОСУДАРС ПО ДЕЛА тг,-,НЙ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМ ТЕЛЬСТВУ ЛВ 1 йЕО едов(71) Московский научительский институт микглаза( 54 ) СПОСОБ ИЗ ГОТОВЛЕВОГО ПОКРЫТИЯ ДЛЯ ИСПОФТАЛЬМОЛОГИИ(57) Изобретение относится к офтальмологии. Цель изобретения - снижение воспалительных реакций и повышение прозрачности. Склеру глаз свиньиподвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте. Полученный раствор разливают на матрицы .дляформования и проводят воздушную сушку. После радиационной стерилизацииопределяют рН водной вытяжки навескицелевого продукта, Для материала,контактирующего с тканями переднегоотрезка глаза, оптимальное значениерН 7,2,1 13214Изобретение относится к офтальмологии, а именно к области коллагенопластики, и может быть использованоьпри кератомии, кератопластике.Пель изобретения - снижение вос 5 палительных реакций при использовании покрытия и повышение их прозрачности.Способ осуществляется следующим образом. 10Склеру глаз свиньи тщательно очищают от внутренних оболочек глаза, остатков конъюнктивы мышц и прочего и выделяют строму, которую нарезают небольшими кусками, Навеску ткани 15 промывают дистиллированной водой до полного удаления механических примесей и кровипереносят в колбу и заливают 1 ОЕ-ным раствором едкого натра в насыщенном растворе сернокисло го натрия (из расчета 500 мл раство -О ра на 10 г ткани) на 48 ч при 18-20 С. Раствор сливают и проводят нейтрализацию ткани до рН 6,0-7,0, перемеши-, вая ее в 2 Е-ном растворе борной кислоТы и неоднократно меняя раствор, Ткань промывают дистиллированной водой до полного удаления иона сульфата в промывной жидкости и заливают 1 М раствором уксусной кислоты из 30 расчета, чтобы конечная концентрация белка в растворе составила 13. Массу перемешивают и оставляют в холодильнике на 1-3 сут,при 4 С, Массу гомогенизируют, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставляют на суткиьпри 4 С. Полученный раствор Фильтруют через стеклянный Фильтр с помощью водоструйного насоса. Для нейтрализации и десольватации 1 Ж-ный уксусный раствор коллагена разбавляют 0,5 М уксусной кислотой до концентрации белка 0,7-0,8 Х и диализуют против 0,2 М фосфатного или цитратного буфера при 18-20 С до рН 4,5-7,5. Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 02 до 0,002 14 в 3-4 этапа, на последнем этапе используют подогрев до 28-30 С. Полученный раствор коллагена центрифугирувт 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу в течение 48 ч при 10-20 С. Готовые покрытия стерилизуют гамма-излучением при дозе 2,5 Мрад и мощности 0,5 Мрад/ч,о 2П р и м е р 1. 20 г очищенной инарезанной стромы склеры заливают1 л 107.-ного раствора едкого натрав насыщенном растворе сернокислогонатрия и оставляют при 18-20 на 48 ч,Затем раствор сливают, ткань промывают небольшим количеством дистиллированной воды, заливают 1 л 27.-ногораствора борной кислоты и перемешивают на магнитной мешалке 2 ч, дважды меняя раствор борной кислоты.Ткань при непрерывном перемешиваниитщательно промывают дистиллированнойводой (общий объем воды 5 л) до полного удаления сульфат-иона из промывной жидкости. К 250 мл полученной обводненной ткани добавляют 350 мл0,5 М уксусной кислоты, перемешиваюти оставляют на 1 сут при 4 С, Затемомассу гомогенизируют при помощи микрораэмельчителя тканей, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставляют на 3 сут при 4 С. Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтрПолученный 1 Е-ный раствор коллагенаразводят 0,5 М раствором уксуснойкислоты до концентрации 0,8 Е, Диализ0,8 Е-ного раствора коллагена проводят против 0,2 М цитратного буфера,доводя рН раствора коллагена до 6,8.Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0,2 до 0,002 М в 3-4этапа, на последнем этапе используютподогрев до 28-30 С,Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин,разливают на матрицы, повторяющиеконтур переднего отрезка глаза, ипроводят воздушную сушку в пылезащитьном шкафу в течение 48 ч при 15 С иотносительной влажности 40-503. Готовые покрытия стерилизуют гамма-лучами при дозе 2,5 Мрад и мощности0,5 Мрад/ч.После радиационной стерилизацииопределяют рН водной вытяжки навескицелевого продукта Полученное значение рН 7,2 оптимально для материала,контактирующего с тканями переднегоотрезка глаза. П р и м е р 2 Аналогичен примеру 1, за исключением того, что после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют; промывают и растворяют в уксусной кислоте по предлагаемой методике. Диализ 0,87-ного раствора коллагена в уксусной кислоте провоФормула изобретения Составитель В. ГаврилюкТехред М.Моргентал Корректор Н. КорольРедактор А, Шишкина Заказ 2487 Тираж 595 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 45Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 13214 дят против буфера до рН 4,5. Полученный раствор разливают на матрицы для формования и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафуПосле радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Полученное значение рН 5,2лежит на нижнем пределе, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза. 10П р и м е р 3, Аналогичен примеру 1, после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке, затем нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте по предлагаемой методике, Диализ0,8 Ж-ного раствора коллагена в уксусной кислоте проводят против буфера до рН 7,5. Полученный раствор разливают на матрицы для формования и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу. После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта, Полученноезначение рН 8,3 лежит на верхнем пре деле, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза,В результате получают прозрачные коллагеновые покрытия, при импланта- ЗО ции которых в слой роговицы отмечается почти полное отсутствие воспалительных реакций: в строме обнаружены 20 4лишь единичные лейкоциты, плазматические клетки практически отсутствовалн, В покрытиях, изготовленных изколлагена кожи, аллергические реакцииимеют место в 607 случаев, наблюдается инфильтрация стромы большим количеством лейкоцитов и плазматическихклеток. Предлагаемые покрытия обладают гораздо большей прозрачностью по сравнению с покрытиями из коллагена кожи - коэффициент светопропускания на303 выше. Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии путем щелочно-солевой обработки животного сырья, нейтрализации, промывки, растворения коллагена, сушки, отличающийся тем, что, с целью снижения воспалительных реакций, повышения прозрачности, в качестве животного сырья используют склеру глаз, удаление низкомолекуляр ных примесей из растворов коллагена одновременно с доведением рН этих растворов до 4,5-7,5 проводят диализом, а сушку проводят одновременно с формованием тонкого прозрачного сферического покрытия.