Способ определения антигенной активности вируса паротита

(51) 4 С 01 И 33/53 Ъ ЪРр. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯМ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) 17, 12, 84 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Московский научно-исследовательский институт вирусных препаратов(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕННОЙАКТИВНОСТИ ВИРУСА ПАРОТИТА(57) Изобретение относится к вирусологии. Цель изобретения - повыше ние точности. Группе морских свиноквводят подкожно вирус паротита. Через 4-8 недель у животных беруткровь и в сыворотке определяют титрвируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации с постоянной дозой эталонного штамма вируса паротита. Способ позволяет в условияхпроизводственного выпуска паротитнойвакцины контролировать антигенныесвойства вакцинного штамма. 2 табл.Таблица 1 Антигенная активность вариантов одного и того же штаммавируса паротита, отличающихся уровнем пассированияв культуре клеток Антигенная активность + вариантов вируса, изученная при разных условиях иммунизацииморских свинок по примерам Количество.пассажей Вариантвируса в культуреклеток 13 3,24 4,2 3,0 А 1,5 2,8(1,0 37Антигениая активность выражена значением 1 оя титра ВНА в сывороткахгкрови морских свинок, иммунизированных соответствующим вариантом вируса. 1 13Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано при изучении свойств вируса паротита.Цель изобретения - повышение точности определения антигенной активности вируса паротита.Способ осуществляют следующим образом.Беспородных морских свинок весом 200,0-250,0 г иммунизируют подкожно путем однократного введения 10-100 ГАДЕ (пятидесятипроцентных гемадсорбирующих единиц) вируса паротита в объеме 1,0 мл с последующим определением титров вируснейтрализующих антител (ВНА) через 4-8 недель после иммунизации.П р и м е р 1. 10 ГАДЕ р вируса паротита каждого из исследуемых вариантов штамма вводят подкожно группе морских свинок. Через 8 недель после иммунизации у всех животных берут кровь. Сыворотку крови от животных, иммунизированных одним и тем же вариантом штамма, объединяют. В смеси сыворотки определяют титр вируснейтрализующих антител (ВНА) в реакции нейтрализации с постоянной дозой (32 ГАДЕО ) эталонного штамма вируса паротита, Антигенная активность 3-х вариантов А,Б и В 20754 2одного и того же штамма вируса паротита, отличающихся уровнем пассирования в культуре клеток, представлена в табл. 1, пример 1.П р и м е р 2, Животных иммунизировали, как в примере 1. Для иммунизации использовали 32 ГАДЕСвируса. Кровь брали через 6 недельпосле иммунизации. Титр ВНА в сыво ротках морских свинок определяли какв примере 1. Антигенная активность3-х вариантов А,Б и В одного и тогоже штамма вируса паротита, отличающихся уровнем пассирования в культу ре клеток, представлена в табл. 1,пример 2.П р и м е р 3, Иммунизацию жи -вотных и исследование сыворотки проводили как в примере 2. Для иммуниза ции использовали 100 ГАДЕ вируса.Кровь брали через 4 недели после иммунизации. Результаты представленыв табл. 1, пример 3.Данные, представленные в табл. 1,показали, что все модификации(примеры 1, 2 и 3)предлагаемого способапозволили выявить различия антигенной активности у изученных вариантов(А, Б,В) вируса паротита, полученных ЗО из одного и того же штамма, но отличающихся количеством пассажей, проведенных в культуре клеток (от 7до 37).1320754 Клонированный Антигенная актив- вариант ность клонированного варианта Г Д ,Е 3,24 1,75 с 1,0 Составитель В.ФроловаТехред М.Ходанич Корректор В.Бутяга Редактор Е.КопчаЗаказ 2655/49 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, У(-35, Раушская наб., д. 45Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3П р и и е р 4. Иммуниэацщо животных и исследование сывороток проводили как в примере 1. Для иммунизации использовали 40 ГАДЕ вируса. Кровь брали через 6 недель после иммунизации. Титр ВНА в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных клонированными вариантами Г,Д,Е, полученными из популяции одного и того же штамма вируса паротита, представлен в табл. 2.Таблица 2 Антигенная активность выраженазначением 1 ор титра ВНА в сыворотках крови морских свинок, иммунизированных соответствующим вариантомвируса,Результаты опыта, представленныев табл. 2, показывают, что использование предлагаемого способа позволило выявить различия антигенной активности вариантов вируса паротита,полученных из популяции одного итого же штамма путем клонированияметодом бляшек. 4Таким образом, использованиепредлагаемого способа позволяет.более точно установить факт сниженияантигенной активности, наступающейв процессе длительного пассированиявируса паротита в культуре клеток,а также установить наличие в популяции штамма вируса паротита вирусных частиц с различной антигенной 10 активностью, что свидетельствуето гетерогенности популяции по признаку антигенности. Кроме того, предлагаемый способ определения антигенной активности вируса паротита позво ляет в условиях производственноговыпуска паротитной вакцины контролировать антигенные свойства вакцинного штамма, что способствует повышению стабильности и стандартности 20 свойств коммерческой вакцины;Формула изобретенияСпособ определения антигенной активности вируса паротита путем под кожной иммунизации морских свинокс последующим определением титра антител в сыворотке крови, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности, морских свинок 30 весом 200-250 г иммунизируют однократно подкожно в дозе 10-100 ГАЦЕвируса паротита и определяют титрантител через 4-8 недель после иммунизации.