Способ выявления факторов адгезии у бактерий рода

(51) 4 С 1 Я 1/04//(С 12 Я 1 С 12 В. 1 й 37) 1 Л Р л,г ОП Е ИЗОБРЕТ ния что исследуемую культуру протея выращивают на плотной питательной средеов течение 24 ч при 28-30 С. Для постановки реакции гемагглютинации используют 37-ную взвесь эритроцитов цыпленка на физиологическом растворе с добавлением 0,67. П-маннозы. Полученную суспензию эритроцитов смешивают в равном соотношении с суспензией исследуемой культуры протея концентрацией 1 млрд/мл, По образованию агглютинационных хлопьев в течение 1-2 мин определяют способность культуры протея давать Р-маннозорезисф тентную реакцию гемагглютинации, т.е. наличие факторов адгезии. 1 табл. ный 15-летиясследоваи сывороток арен з эпидеми984, У 3,ОВ ГЕ дици зобре АРСТВЕННЦЙ КОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Башкирский государстмедицинский институт им.ВЛКСМ и Уфимский научно-ительский институт вакциним. И.И.Мечникова(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФАКТЗИИ У БАКТЕРИЙ РОДА РВОТЕ(57) Изобретение относитской микробиологии. Цель овышение специфичности спосоность способа сводится к томуИзобретение относится к медицин-.ской микробиологии и касается выявления этиологической значимости бактерий рода РгоГеыв.Цель изобретения - повьппение специфичности способа,П р и м е р. Выращивание исследуемой культуры проводят на скошенномагаре, который готовят на основебульона Хоттингера (рН 7,4-7,6) с добавлением к 98 мл бульона 15 г промытого вымороженного дальневосточного агар-агара и 0,5 г дрожжевого экстракта. Выращивание проводят в течение 24 ч при 28-30 С.Для приготовления суспензии эритроцитов используют эритроциты цыпленка, из которых готовят 37-нуювзвесь на физиологическом растворес добавлением 0,6 Х 0-маннозы. Концентрация эритроцитов 250 млн/мл,Постановка 0-маннозорезистентнойреакции гемагглютинации (ДМГ). 20 В качестве контролей проводят реакцию с интактной культурой н без культуры. 55Изучают 112 штаммов протея, выделенные от больных с гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями, среди которых Рг.чп 18 агв 14, Рг. пп.гаНа чистое предметное стекло нано 25сят по 0,05 мл суспензии эритроцитови 0,05 мл суспензии исследуемой культуры протея с концентрацией 1 млрд/мл,Осторожно перемешивают при комнатнойтемпературе. По образованию агглютинационных хлопьев в течение 1-2 минсудят о способности культур даватьВ-маннозорезистентную реакцию гемагглютинации,Для определения степени адгезивной 35активности бактерий реакцию ДМГ ставят с культурой различной оптическойплотности (1 млрд/мл - 250 тыс./мл)и результаты оценивают следующим образом, Наличие агглютинационных хлопьев при смешивании суспензии эритроцитов и культуры с оптической плотностью 1 млрд/мл - 25 млн/мл считается слабо положительной реакцией,25 млн/мл - 15 млн/мл - положительной активности реакция, 15 млн/мл5 млн/мл - средней положительнойактивности реакция, 5 млн/мл -500 тыс./мл - высокой активности реакция. Отсутствие хлопьев свидетельствует об отрицательной реакции. Ьг 1 гв 86, М,шогяап 3. 11 штаммов иРг, вгпагггг 1 штамм.Параллельно для сравнения с известным методом ставится 0-маннозорезистентная реакция гемагглютинациис 37.-ной взвесью бычьих эритроцитови с ЗЕ-ной взвесью эритроцитов человека. 11 группы крови,Результаты опытов представленыв таблице,Из таблицы видно что с помощьюпредлагаемого способа выявлено32 штамма с положительной реакцией0-маннозорезистентной гемагглютинации, а по известному не выявлено ниодного такого штамма, что свидетельствует о более высокой специфичностипредлагаемого способа,Из выявленных 32 штаммов 18 обладают высокой, 7 средней, 6 положительной и 2 слабой активностями.Специфичность способа подтверждается также следующими опытами.В одном из опытов получают сыворотки от кроликов, шестикратно иммунизированных внутривенно культурамипротея с положительной реакцией Юманнозорезистентной гемагглютинациии с отрицательной реакцией ДМГ ипроверяют их действие на Э-маннозорезистентную гемагглютинацию. Установлено, что сыворотки, полученныеот иммунизации культурой с положи"тельной ДМГ, тормозят реакцию Э-маннозорезистентной гемагглютинации, авторые не оказывают никакого действия на эту реакцию, что свидетельствует об антигенном характере фактора адгезии бактерий рода Ргогецв.В другом опыте исследуют корреляцию свойств штаммов давать реакцию ДМК с их способностью вызывать острую токсическую пневмонию у экспериментальных животных (мыши весом 17- 18 г). Устанавливают, что все исследованные 23 штамма протея, вызывающие острую токсическую пневмонию у животных, дают с эритроцитами цыпленка положительную реакцию ДМГ.Применение для выявления адгезионных свойств бактерий рода РгоСеов эритроцитов цыпленка повьппает специфичность способа, дает возможность получить количественную характеристику адгезии, что позволяет достоверно определить этиологическую значимость бактерий рода РгоГеыв в возникновеыил гнойно-септиче=ких и кишечныховоревистеитиая реакция по способу оличесттаннов иолинический ти иввестио предлагаенону итроциты бык 4"троциты 11 грви человека тр ку 1. 1 и 20 бб 1 2 9Составитель В.ДроздовРедактор Н.Гунько Техред Л.Кравчук Корректор С.Че Тираж 500 ПГосударственного комитеелам изобретений и открытийМосква, Ж, Раушская наб. 1935 24 Зак одписноета СССР В о 4/ 113035 оизводственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 3 1312098 4заболеваний и проводить целенаправ- нонкой с ней Р-маннозорезистентной1ленную профилактику и лечениереакции гемагглютннации с 3%-нойвзвесью эритроцитов и учетом получен- формула изобретенияных результатов, о т л и ч а ю щ и йСпособ выявления факторов адгеэии 5 с я тем, что, с целью повышения спеу бактерий рода Рго 1 еоз путем выращи- цифичности способа, реакцию гемагвания исследуемой культуры на плотной глютинации проводят с эритроцитами питательной среде с последующей поста- цыпленка,