Способ определения скорости реакции агглютинации

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО 1251908(5 в 4 А 61 39 00 6 01 )х) 33 555 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов АН СССР и Саратовский ордена Трудового Красного Знамени государственный университетим. Н. Г. Чернышевского(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ,включащий добавление к суспензии клеток агглютинина, инкубацию смеси с измерением оптической плотности суспензии до и после инкубации, отгичающийся тем, что, с целью повышения точности способа, оптическую плотность измеряют последовательно при двух значениях длины волны света в интервале 450 - 1 00 нм и по отношению этих величин времени инкубации определяют скорость агглютинации.1.06 р 1 и Ог)юсится к м;331(ице, з и енно к 3)л(л)л нопни, и может 6 ыпгь исц ,13 )О но нри онр(.,3 слс ни и Грл ивовой и И 0 ОИ 1)РИ Цс).3, Н.Ж ЦОС 1 И КРО 3333 Тс 1 КЖЕ ЛЛЯ ИС С,1 СДО 3ИЯ с НТГНОВ НОВРХ НОСТИ Л) И КРО. ОР )11 И ) ЧО.1 с )ь и н)6 ретсния новцшени 1 оч)н)- С)1(61 С ,111 В)С ЧС 11111)М СОКРс)11 С)11)С Ч РЧсн И сс)Л И ) с)1) иносе 0 ц редел ения с ко 10 ст и р(зк 1 н К,1 01 ОИ ЗГГГН)ТИЦ 1(ИИ, ВКЛЮЧЗК)ЕМ .3061.1 цС К СН(ц (ИИ КЛЕТОК ЗГ Л 0 ТИНИ- и;1, инку 61 Ин) счеси с измерением онти С КОИ Ц, 01 НОСТИ С С ПСНЗИИ ДО И ИОССИ. 3)цку 6311 ии, онтическун плотность изме- Р 51 Н)Т 110 ЛЕ 10 с)ТЕЛЬ)30 ЦРИ ДВЪ Х ЗНЗЧСЦИЯХ д,инц Клны света в ингср)яле 450 1100 цм, )1 С)сОРОГ РСЧ)К)И 3 )3 ГГ,)НТ(НЗ(СИИ ОНР(.ДСЛЯ. Н3 Н 0 ) С) Р Ч У, 1(. 3/21( )3,1)2 1 д (г, 7 г. )(1," ) / д (Р,2,1) (1)сс1) ) и 1) О Н Т И Ч ( С К с) Я Н Л О 1 Н 0 С Т 1 С Л С Н С Ц- )ии, измеряемая нри значени- ЯХ,3.)ИНЬ ВОЛНЫ СООТВЕТСТВЕН- но ,) и , до 3 нкчбзп)333: 1); и 1),. Игичекзя плот)пкть слснец)И, И )Л)СР 53 мс)51 НРИ УКЗЗЗЦ Ь Х (Н с)С ИЯХ ДЛ ИВЫ ВОЛНЫ нос) инку 6 ании; врл)я инку 6 знии)сРЯ )с) В 13 СИ) Рс);)Л)ЕРЗ 13 )ОКс)33 Г(.Г)Я Н РЛ Л 1,1 ЦИ 51 );)СТИ 3, ЦО Ц с) ВИСИТ ОТ ИХ Коц)3 ц)0)ии. 11 ри у нличении размера истиц 031 ТИЧС Кс и 0.10 НОС ГЬ К 1(10)НЫ Х СЛ (. ЦС. 33 Й с)знои с л 1 и)ои, с)тцосит(21 ьно слс)6 ес );)ися)э и(ь)инц 130 лнь) с 3 тз 11 озтому ); О);) г,)нгин;)вии клеток нзрзче)р НЛ 1 Н)сТСЯ.( )1 н 6 и л)ис)132 Я 1(я слЗлющим 06- ;ЛК р;) вору;)3 глнтнинс 3 в О,5 3 рзство- ) Л) З(,.106 с) В,)Я Н)1 ТЗ КОС КО, Ч(СТВОкои.и ГР иРО)3 н ои ( х нс)РЯ,кс 10 с м ) КГ)ТО)НОИ 13.13 И, 1 ТО Цс Чс 1 Г 1 ЬНОС З 1(с) ЧС НИЕ 0ИсКОЙ 312 ОТ(КТИ НО;1 ЧЧСНИОЙ СусиН- (и кг)10 к ц нрс в 3 И 13 т О, / ВО Всс ч дизцс)зо. и длин олн Культура клеток иредвариТС.1 ЦО ОГЛ) ЫВЗ 0 Т фИЗИОС 30 ГИЧЕСКИМ Рс 3 СТВО- роч,;) зритрониты обра 6 зтцвзнг триисицом. НГИ 3(СК)Н ИЛГГНОСтЬ И:)МЕРЯН)т ЧЕРЕЗ Каждь)с; 1 О мин в т и ние р мени инку 6 ) ). О;)л)н 3) го 20 60 л)ин. 11 ер(л и:3 л(;Ф ( елс н)6 рззно нс рел фотозлеменОМ НОМНи 1 Ь КРЛ),1 УК) Ис)1)Рс)1 Л)Л ( ОТ 3(Рс)ием дис)ч 1 роч 2 1 лм д,)я сциж 1 И 513) ЗффКТЗ МЗГОЧ,)ОВОГО РЗСС(51 ЦИ 51 С)3 тс). НЫ.ты проводят В стандартных кн)ветзх толщиИй 5, 5, 1050 и 50 л)ч, которыми ко )илектук)тся лкзззцць)с цри 60 ры., 215 К 01 тн)Г)япроводят и )мерения с уснензий, нлученныхнрн те., жс лсланях в О, 1) Ч х;(,3 и );1 Г 1, Н ) 1 И Н И Н 11,10 ре)чл)1; г;)ч изчс р ни и н)гич(ской1,(1 О.13 1 с ЗТЗ 3 Х 1 КЛ )с)1 И 1С.СГ 5 Нн с 1 Р с м с 11)522 с,): )( )., (,с7 Г 1 -с 1 (,5)2( 1), 1), ) ) ( ), .), )Н р С, С)12)я Н) Н(И И С О 6) 0 И дОЛ Н) )1 3 ) Е Г с Г О В К.1 С.тОк, 06 рззовзнихс Я к,)31 ноч чйл)нт вр(ЛНИ, ОТ ООНЕГО 1 ИСГс) 1 ЗСИ)3 В СЛИЦИЕр 5 ОО ЬСЧ 1 К ЕТОЧИОИ ВЗВЕ(30 ЦсЧЛ 1 с)Г К)1 )нс)Н 3 И. 5 ИТС Рс).) РСЛ)СНИ (, И 310.11 31 С- чцй В формул (11, и соответ"1 у)они ечу)нзченв( Е и л= - Р онрсде.)ян 1 но резульг;3- Г;)Ч 01 ЕНКИ )с)ВИ)ЛС 101 ВЯ Ч( НИ ИНКУ 61)И ИИ В Ь 6 И р и Н) Т р 3 Н 1 Л) Ч с К С И Ч )1 Л Ь ц) И30ХН)Ч)3)3 НРСЛ)С Нн)0 И НРЗГ 1)1, Н К 010 РОЧизрзметр Р р;)нтич ски 31 нир)1)он;)лс ир мс ни инку 6 ии. 77 р(с)1( ) . 11 сс,)еду н) и;) книн;31 3 лнп нз.ции чикрооных к,)сок 20. р)г)1 иЧ 1;. р. 7 цо3.ЙСТВИЕЛ),НК 3 нц; НН)СЧИ)11.1 кзчес)щ ирси;)р 1;) лекгин;1 ис)п,)ь нг ЗКС 3)с)К 1 М Я)К)И ЯРООИ Н ЦС 1 И )с 1 (,)131 0 - ск;)я - 52, 0,1 л чс ц)ьи як. Гр;Гир);)цис м чл ки сред)3 го )н)мола 0,05 х(;, к(а)в 1 р;11 ия 4 Г 6 С.К;3 0,;) ЧГ,Л),1. К Р 1 СТВОРЧ,)СКИ 31рз (цсдс нии 1:12 061)лн 1 к(а)в )г рировзннлю (л О см ) )нсь к) п)к ко)и)стСЧ,0 )с) ) ОЧНОМ,.Я ЦОГ Л )С ЦИЯ )Нс)ЧС ЦИИ нп ической 1 логк)и с)с)1 н.)ии 13 60,(с 0,7 во В ем ыбрзнич ди;)нз )ц,лн 45 130 лц, 1 ч сни 1 ов(, я ц; 1 г 1)( 0 л) грзх (:Ф 4 А и)1 И (:Ф 2 к)0"Х)х с рс)ССТО 51133 Л) ЛСж,Ч СТСНК 1 Ч И0 Ч Ч, НОЧ 13 и ЦСРЕ, Н)ТОСН 1(МС 10 Ч ДИ ЗР 3 Л) Ч КРЧ , 31 М 1 13 Е )" И М,И с) М С Т Р ЧМ Ч ., Л и И К, Н )-(, 11 И Я У ф( К Т с(., 1 И Л) С 1Т с)1 13 К Л (. 1)) 1 14 Х ) 1 3 ) . - г;пон кнвемикрнргзнисчзчи встря,и;)нт пере,3 изчерени 5 чи в гс с ци,О с нгическун) 1 логносгь изч(рянг чз)инзх 1)олн 450 и 20 нм. 110 рзл.Ьт;) ;л) и).черсний и опенки )анисим(кти Р г вре М(.ци иКЛ 6 с)1 ИИ онрС лег 5 Н)Т ИТСрзг 1 р(.- ч(саи (= 0 мин и Рс 1 ссчитывс 1 кт скоР(кть рЕЗК)ИИ;)13,)НГИ 3;)НИИ Лс=-с (,)+ и( ЧИН НООР Л) Л,)( () .1251908 4 Время, мин 0,217 0 0,39 1,86 1,82 0,40 0,224 30 10 1) 79 О) 38 0,217 л 2 1,73 039 0226 60 20 1,61 0,38 84 30 0,37 0,23 1,52 г;осдниели 11 Ьашкаен Редактор О, 10 рконенкая 3 ехрел 11 Б рес Кор 1 шкр Ч 11 ожо заказ 45555 Тирак Ньп Полни ни ВНИИПИ Государственного комитета (.О:Р по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., л 4 5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород. ул, Проектная, 4В таблице приведена зависимость оптических и структурных параметров суспен. зий Лковр 1 г 111 пш Ьгаз 11 епве зр. 7 от времени инкубации с экстрактом пшеницы, содержащим .ц ктин. Способ дает информацию о ранних специфичных стадиях реакции агглютинации, когда эффект седиментации еще не наблюдается. Время считывания результатов реакции сокращается до 20 40 мин.Г 1 овышение точности способа иллюстрируется следукнцим образом.Изучена лектиновая активность сортов пшеницы к эритроцитам кролика. Скоростьр огреакции агглютинации (Ъ= -о- т где1,мин1= 20 мин) для сортов пшеницы Саратовская, Саратовскаяи Саратовскаяравна соответственно 4,7; 1,8 и 0,3.Одновременное определение скоростиреакции агглютинации при однолучевой фо.тометрии по времени снижения оптической плотности на 50 о от первонача 1 гной вели.чины (1= 150 мин) дало значение 0,0118 для всех трех сортов пшеницы, т.е. точность метода однолучевой фотометрии нс нзволяет выявить различия в содержании лекти наТаким образом, использование предлагаемого способа определения скорости реакции клеточной агглютинации позволяет с высо.кой точностью количественно охарактеризо.15вать наиболее ранние и специфичны с адин реакции агглютинации и сократить в 3 5 раз время анализа.