Способ иммунизации бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин

.5 И 4 А б 2 ССС КРЫ СУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ ОБР ЕНИ ИОАН ИЕ У МУ СВИДЕТ ТО 4 3416500/2815.04.8230,04.87.РостовскийЕ,П.Москалразовский615.373 (ОРоагп 1 с 11974, 1.СПОСОБ ИЬЕПАРАТАМИ( а антитела юи с н вотных не Бюл.16медицинский институт .енко, С.И,Ильина, и О,А,Кубасова88. 8)3. ес а 1, 1, ехр.140, р. 1189.ЯУНИЗАЦИИ БАКТЕРИАЛЬНЫСОДЕРЖАЩИМИ ЗНДОТОК 57) Изобретение относится к медици е, точнее к микробиологии, преднаначено для получения антибактериальных сывороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК. Цель изобретения - снижение токсических свойств бактериальных препаратов, содержаших эндотоксин. Для этого коклюшный гамма-глобулин титр в реакции агглютинации1:64 т) выделяют из ослиной стандарт.ной коклюшной сыворотки серии 143,полученной путем спиртового осаждения на холоду, Препарат вводят подкожно белым беспородным мышам в разведении 1:25. Через 4 ч мьппей иммуни.зируют внутримышечно коклюшными бактериями в дозе 11 Ою микробных тел (м.т.), другую группу - Б-брюшно-тифозными бактериями в дозе 1 10 м.т9 третью группу мьппей - эндотоксином Е.со 11 в дозе 50 мг, 3 контрольные группы животных иммунизируют аналогично, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. На 14-е сутки после иммунизации проводят анализ крови, центрифугируют при 5000 об/мин, адсорбируют 507-ными формалинизированными эритроцитами ба 0рана, подогревают при 56 С 30 мин, Иммунизация животных бактериями и эндотоксином Е,со 11 без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 100 Е случаях приводит к появлению в сыворотке крови животных антител к нуклеиновым кислотам, причем зти антитела специфически реагируют с нативной ДНК, Введение предварительно коклюшного гамма-глобулина перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотаспецифически реагируюДНК в сыворотке кровинаружены. 2 табл.Изобретение относится к медицине, а точнее к микробиологии и может быть использовано для получения антибактериальных сывороток, не содержащих аутоантител, в частности антител к нативной ДНК.Целью изобретения является снижение токсических свойств бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин.Способ осуществляется следующим образом.Коклюшный гамма-глобулин (титр в реакции агглютинации 1:64 т) выделяо ют из ослиной стандартной коклюшной сыворотки серии 143, полученной путем спиртового осаждения на холоду. Полученный таким образом коклюшный гамма-глобулин вводят подкожно белым беспородным мышам массой 16-18 г в разведении 1:25. Через 4 ч мышей иммунизируют внутримышечно коклюшнымиюбактериями в дозе 1 х 10 м.г., другую группу - Я-брюшно-тифозными бактериями в дозе 1 х 10 м.т., третью9группу мышей - эндотоксином Е.со 1. в дозе 50 мкг.Три контрольные группы животных иммунизируют теми же бактериальными препаратами, но без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина, Каждая группа животных состояла из 10 мышей, Кровь для анализа забирают общепринятым методом на 14-е сутки после иммунизации, центрифуги- руют при 5000 об/мин в течение 10 мин, адсорбируют 507,-ными формалинизированными эритроцитами барана и прогревают при 56 С в течение 30 мин.оЗатем с обработанной таким образом сывороткой ставят РПГА с эритроцитами, сенсибилизированными формализированной ДНК с последующим торможением формилинизированной и нативной ДНК для дифференциации антител к нуклеиновьм кислотам. Иммунизация животных коклюшными, брюшно-тифозными бактериями и эндотоксином Е.со 1. без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина в 1007 случаях приводит к появлению в сыворотке крови экспериментальных животных антител к нуклеиновым кислотам, причем эти антитела в 68-903 случаях специфически реагируют с нативной ДНК. Предварительное введение коклюшного гамма- глобулина перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащимиэндотоксин, способствует снижению уровня антител к нуклеиновым кислотам, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК, в сыворотке 5 крови экспериментальных животных необнаружены,П р и м е р 1, Перед введениембактериальных препаратов, содержащих 1 эндотоксин, в организм мышей подкож но вводят коклюшный гамма-глобулинв разведении 1:5, затем 1-ю группу животных иммунизировали коклюшной вакциной, 2-ю группу животных - брюшно-тифозной вакциной, 3-ю группу - эндотоксином Е.со 11. Контрольными группами являлись животные, иммунизированные бактериальными препаратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина. Полученные результаты приведены в табл 55 25 30 35 40 50 Антитела к ДНК определяли на 14-е сутки в РПГА Как видно из табл,1, предварительное введение коклюшного гамма-глобулина в организм животных перед иммунизацией бактериальными препаратами в разведении 1:5 приводит к значительному, снижению уровня антител к ДНК в сыворотке крови опыт ных мышей, а антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК, в этих сыворотках практически не выявлены.П р и м е р 2.Перед введением бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, в организм мышей подкожно ввели коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:25 и сбъеме 0,2 мл, Через 14 сут в сыворотке крови животных определяли антитела к ДНК. Контрольные группы животных иммунизировали бактериальными препаратами без предварительного введения коклюшного гамма-глобулина.Результаты исследования свидетельствуют о том, что предварительное введение в организм коклюшного гамма-глобулина в разведении 1:25 перед иммунизацией бактериальными препаратами приводит к снижению их токсических свойств В сыворотке крови экспериментальных животных антитела к нативной ДНК не обнаружены. П р и м е р 3. Перед иммунизацией бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, мышам подкожно вводили коклюшный гамма-глобулин в разведении 1;125. Затем на 14-е сутки исследовали сыворотку крови мышей в1306582 18 титровантител кДНК (1 Р+ш 1 Процент сывороток,реагирующихс нативнойДНК Коклюшный гамма-глобулин вразведении 1:5 Препарат 68 2, 29+0,110,99+0,13 Не вводили Коклюшная Вводили вакцина 830 1,94+0,1 0,84+0,13 2,45+0,13 0,89+0,13 90 Не вводили ЗндотоксинЕ.со 11 Вводили Таблица 2 1 д титровантител кДНК (1 вх+ш) Коклюшный гамма-глобулин вразведении1:125 Процент сывороток,реагирующихс нативной ДНК Препарат Коклюшная Не вводили 2,29+0,111,59+0,15 68 Вводили 20 вакцина 1,94+0,111,44+0,09 83 15 2,45+0,13 1,56+0,13 Эндотоксин Е.со 11 Не вводили 90 Вводили РПГА на наличие антител к ДНК, Результаты приведены в табл,2.Как видно из табл.2, введение коклюшного гамма-глобулина в разведении 1:125 не приводит к выраженному сни жению токсических свойств бактериальных препаратов. В сыворотке крови иммунизированных животных обнаружены в 20-357 случаях антитела, специфически реагирующие с нативной ДНК.Таким образом, коклюшный гаммаглобулин снижает токсические свойст - ва бактериальных препаратов, содержащих эндотоксин, и используемых для получения антибактериальных сывороток, в пределах от цельного препарата до разведения его 1:5 - 1:25, Ис - пользование гамма-глобулина в максиБрюшко-тифоз- Не вводилиная вакцина Вводили Брюшно-тифоз- Не вводилиная вакцина Вводили мальной дозе (цельный) считается неэкономичным ввиду повышенного его расхода, что влечет лишние затраты,Формула и э о б р е т е н и я Способ иммунизации бактериальными препаратами, содержащими эндотоксин, путем их внутримышечного введения, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью снижения токсических свойств бактериальных препаратов, пе. ред иммунизацией в организм подкожно вводят коклюшный гамма-глобулин в разведении 1:5 - 1:25 в объеме 0,2 мл, выделенный из ослиной стандартной коклюшной сыворотки и соответствующий ее исходному титру.Таблица 1