Способ получения препарата для кормления жвачных животных

%13Ф ;., г-; ТЕН качестве би иента в преп горопЬас 1 е штамм Че 8, или шт %00289. Ш Чеопе 1 алены из ру ированы по тучих жирных оло- араг 1 цт амм там зр. бца спо кис ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ (НО)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТАДЛЯ КОРМЛЕНИЯ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может бытьиспользовано в животноводстве для кормления животных, Цель изобретения - повышение продуктивности. Для этого вкачестве биологически активного ингредиента в препарате используют штаммРгар 1 оп 1 Ьастегоа зр. НчСМВ М 00287 илиштамм Че 1 опе 1 а зр, НМСМВ ЬВ 00288или штамм ВЮбоЬастегоа зр. НМСМВ.М 00289, Штаммц получают следующим обИзобретение относится к сельскохоэ ственной биотехнологии и может быть пол ьзовано в животноводстве д кормления животных.Целью изобретения является повышение и родуктивности,Цель достигается тем, что получают препарат, способный изменять соотношение уксусной и пропионовой кислот в желудочном соке рубца жвачных животных в интерразом; бактерии изолируют из отобранной иэ рубца пробы и исследуют способность отдельных изолятов к биосинтеэу летучих жирных кислот. На дополненной соответствующим кормом(сено, овес, меласса) содержащей рубцовую жидкость комплексной питательной среде при анаэробных условиях выращивают полученные иэоляты. Затем с помощью газохроматографического анализа определяют концентрацию уксусной, пропионовой и масляной кислот в культуре.Изоляты, продуцирующие указанные органические кислоты в предпочтительном соотношении, генетически маркируют, Далее исследуют их размножение в рубце жвачных животных. Полученные таким образом штаммы способны длительное время (не менее 60 дней) размножаться в рубце жвачных и поддерживать соотношение уксусной и пропионовой кислот в области (1,5 - 4,0):1, Полученные культуры микроорганизмов сами по себе или смешанные с используе-Я мыми в животноводстве носителями, разбавителями и/или консервантами и/или сзий другими обычно вводимыми жвачным животным веществами формулируют в оральный препарат. 9 табл. вале (1,5-4,0):1. При этом в гически активного ингред те используют штамм Р зр, НМСМВ М 00287 или 11 а зр. Н 1 чСМВ М 0028 В 01 боЬастетцщ зр. Н 1 чСМВ мы Ргор 1 опЬас 1 егаа зр ВВбоЬассегоа зр, выде жвачных животных, селект собности к биосинтеэу леТаблица 6 Таблица 7. Та блица 8 Не ели Исходный весКонт оль 29,5 28,0 26,5 29,0 30,0 27,5 28,0 29,526,5 26,5 30,0 29,5 26,028,0 29,5 27,0 27,5 30,5 30,5 26,0 28,0 30,0 28,5 27,0 30,0 29,0 26,5 27,5 29,5 27,5 27,0 30,5 30,0 25.5 27,0 29,0 27,0 28,5 30,0 29,5 25,0 27,0 Обработано штаммом Ргороп 4 Ьастегцт зр. НЙСМВ Ф 00287 (НЬУОК М 1-1235 а1625317 2122 Продолжение табл. 8ТаблицаСоставитель В, РомановаРедактор М. Циткина Техред М.Моргентал Корректор Л, Пата Заказ 204 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 1 О0,1 2,5 10,0 0,05 0,05 лот и депонированы в Национальной коллекции микроорганизмов при Венгерскомгосударственном институте эдравоохранения под номером 00287 и/или 00288 и/или00289,Для увеличения выхода мяса жвачныхживотных предпочтительно применять вкачестве биологически активного ингредиента культуры микроорганизмов, поддерживающие соотношение уксусной ипропионовой кислот в области (2,0-3,5);1,например 2:1. Для молочной продукции оптимальное соотношение уксусной и пропионо; ой кислот составляет примерно 3,0:1,для периода стельности 4,0:1, в то время какпри выращивании телок (2,0 - 3,0):1,Пример 1.А. Селекция таммов микроорганизмов, выделенных из рубца животных, аскармливаемых сеном,Овец в течени. месяца кормят сеном,затем через оперативно введенную в рубецзакрывающуюся фистулу отбирают пробу.Пробу непосоедственно после взятия отбора селекционируют на специальной питательной среде.Для получения питательной среды используют 7,5 мл солевого раствора 1, содержащего:Дикалийгидрофосфат, м 0,6Дистиллированная вода, мл До 1007,5 мл солевого раствора 1, содержащего:Хлорид натрия, г 1,2"ульфат аммония, г 1,2Дигидрофофат калия, г 0,6Хлорид кальция, г 0,12Гептагидрат сульфатамагния, г 0,25Дистиллированная вода, мл До 100а также0,01 О,-ный растворрезазурина,млАгар (бакто), гЖидкость рубца, млГлюкоза, гЦеллюбиоза; гМоногидрат гидрохлоридацистеина, г 0,058 -ный раствор карбонатанатрия,мл 5,0Дистиллированная вода, мл До 100Обозначение питательной среды КОСА.Отобранная из рубца проба фильтруется через рыхлый марлевый фильтр, фильтратзатем хранится при -20 в атмосфере СО 2.РН питательной среды устанавливают6,8, затем среду стерилизуют. Стерилизацию осуществляют в атмосфере С 02.Предварительно среду разбавляют стерильной смесью следующего состава:0,050,3 15,0 15,0 0,05 10,0 Солевой раствор, млСолевой раствор 11, млМоногидрат гидрохлоридацистеина, г5 Карбонат натрия, г0,1 оь-ный раствор резазурина, мл 0,1Дистиллированная вода,мл До 100Обозначение смеси НВ,10 Культуры инкубируют в течение 120 ч ванаэробных условиях при 35 С,Затем отдельными колониями засеваютсодержащую сенной экстракт питательнуюсреду следующего состава, ф:15 Солевой растворСолевой раствор 110,1;4-ный раствор резазурина 0,1Триптон 1 42 1,520 Дрожжевой экстракт 0,5Рубцовая жидкость 10,0Карбонат натрия 0,4Моногидрат гидрохлоридацистеина25 Сенной экстрактОбозначение ВОСР,Для приготовления сенного экстрактаразрезанные на мелкие кусочки части растений суспендируют в воде, кипятят и затем30 отфильтровывают. Остаток на фильтре перед стерилизацией добавляют к питательной среде,рН питательной среды устанавливают6,5 с помощью соляной кислоты, затем сре 35 ду стерилизуют,Стерилизованные в пробирках питательные среды объемом 5 мл засевают суспензией клеток, полученной изизолированных колоний, выросших на твер 40 дой питательной среде 86 СА, Культуры инкубируют в. течение 5 дней при 35 С прианазробных условиях, Рост контролируютмикроскопированием, затем культуру селекционируют на питательной среде БОСА45 указанного состава. Однако в среду не добавляют глюкозу, целлюбиозу,. используютвместо этого 2 бакто-целлюлозы.Культуры инку 1 ирукг при 35 С в течение,120 ч, затем отдельные колонии, развив 50 шиеся на способных усваивать целлюлозуклетках, изолируют путем центрифугирования в атмосфере С 02.Б. Генетическая маркировка полученных бактерий.55 Генетическую маркировку осуществляют с помощью ЕзсЬегсЫа со 1 Плаэмидар.1011.Плаэмидную ДНК изолируют и растворяют в смеси следующего состава, ммоль:Хлорид кальция 75( Грис) - (о кси метил)-(ами но метан) - гидрохлорид.Полученные в разделе А клетки суспендируют в смеси следующего состава, ммоль;Хлорид кальция 75Хлорид магния 5Трис-гидрохлоридный буфер,рН 7,5 10Моногидрат гидрохлоридацистеина 1Тиосульфат натрия 1В суспензии содержится 5 Х 10 клетокна миллилитр, Суспензию клеток разбавляют в соотношении 1:1 (0,1 мкг/мкл) смесью,содержащей р.1011 плазмидную ДНК, затем инкубируют при 4 С в течение 60 мин.Далее инкубацию продолжают 2 мин при41 ОС, после чего культуру наносят на плотную питательную среду, содержащую в качестве источника углерода целлюлозу, сдобавлением перед стерилизацией 500мкг/мл канамицина В. Культуры инкубируют 120 ч при 35 С и при анаэробных условиях, затем колонии, способные расти вприсутствии 500 мкг/мл канамицина В, исследуют,Плазмида р 1011 несет гены, определяющие резистентность к канамицину ихлорамфениколу и ог-участок, обеспечивающий репликацию плазмиды в клеткахЕ.со. Так как плазмида ДНК способна реплицироваться только в Е,со тона, она теряется после того, как попадает в другиебактерии, однако полностью или частичновстраивается в хромосомы, т,е. происходитгенетическая рекомбинация, Встроенный вхромосом ген проявляется в благоприятномслучае и обеспечивает устойчивость к канамицину и хлорамфениколу.Таким образом получают реэистентныек канамицину В колонии, частота трансформации которых составляет 3 Х 10Некоторые резистентные колонии изолируют и определяют чувствительность кантибиотикам исходных штаммов и резистентных по отношению к канамицину Б(К ) штаммов, Получены следующие реВзультаты:Микроорганизмы Минимальная подавляющая ростконцентрация канамицина В, мкг/млСодержимое рубца 31Исходные штаммы 4,0-7,5.Генетически мар 65 20 20 кированные КпВштаммы: НЬ - ОУОК 1-1,8 50027 25091 5005 123 1000142 500Штамм НЬ-ОУОК 1-1-123/К наносят насодержащую целлюлозу питательную средуЯ ОСА с добавлением 1000, 5000 и 1000010 мкг/мл канамицина В. Культуры инкубируют 168 ч при 35 С в анаэробных условиях,затем изолируют выросшие в присутствии"10000 мкг/мл антибиотика штаммы. Такимобразом селекционированный штамм, обоз 15 наченный как НЬУОК-123 х, синтезируют пропионовую кислоту. Бактерияявляется грамположительной и имеет палочковидную форму. Глюкоза и крахмалсбраживаются этой бактерией в пропионо 20 вую и уксусную кислоты, причем образуетсятакже немного масляной кислоты и углекислоты. На комплексных питательных средахпоявляются молодые микроорганизмы клеток палочковидной формы, которые позднее25 превращаются в полиморфные формы различной величины и содержания, не имеющие ресничек и часто расширяющиеся навершине, становятся шире. Организм такжехорошо растет в анаэробных и полуанаэроб 30 ных условиях, он факультативно анаэробный. Поэтому штамм, обозначенный какНЬ-ОУОК 1-1-123 Яг (как и. происходящийот него штамм НЬ-ОУОК 1-48 а) относят кроду РгоропЬас 1 егцп 1. Штамм35 РгоропЬастепшт зр. (НЬ-СУОК-123 Яг)депонирован в Национальной коллекциимикроорганизмов при Венгерском государственном институте здравоохранения подномером 00287.40 В, Внесение генетически маркированных микроорганизмов в рубец,Штаммом РгоропЬас 1 егОп зр.НМСМВ М 00287 засевают стерильную питательную среду ВОСГа следующего соста 45 ва, мл:Гидрофосфат калия 0,3;4 45Сульфат аммонияХлорид натрияМоногидрат сульфата50 магния 4.5Дигидрат хлорида кальцияДигидрофосфат калияБакто-целлюлозаАгар (бакто)55 Дрожжевой экстрактМоногидрат гидрохлоридацистеина 20Тиосульфат натрия 20Разведение культуры осуществляютпри анаэробных условиях в колбах объемом500 мл, содержащих 150 мл питательнойсреды. Спустя 48 ч контролируют рост, затем культуру примешивают в корм овец, 5получающих сено, Перед кормлением и впоследующие дни через введенную путемоперации в рубец фистулу отбирают пробыбъемом 50 - 200 мл.Пробы после соответствующего разбавления НВ-расгвором наносят на В 6 СА-пи-тательные среды, не содержащиеканамицина и других антибиотиков. Культуры инкубируют 72 ч при 35 С в анаэробныхусловиях, затем определяют число развившихся колоний бактерий. Животному вводят орально 340 мп культуры, содержащей4,7 Х 10 бактерии на миллилитр. Результабты представлены в табл, 1.Из данных табл. 1 следует, что введенный микроорганизм длительное время существует в рубце и размножается,Животному также вводят орально 140мл культуры Ргороп Ьастег 1 цп зр., содержащей 2 Х 10 клеток на миллилитр. Результаты представлены в табл. 2.Из данных табл. 2 следует, что введенные микроорганизм имеется в значительном количестве в рубце, а такжеразмножается, 30Пример 2.А. Селекция штаммов микроорганизмов, выделенных из рубца животных, вскармливаемых зерновыми продуктами.Культуру получают аналогично и, А примера 1 с тем различием, что исходную пробуотбирают иэ рубца животных, вскармливаемых зерновыми продуктами, Отдельныеизоляты высевают на В 6 СГ-среду, содержащую вместо сена измельченное в порошок 40зерно (2;). Выросшие в жидкой Я 6 СР-среде культуры наносят на плотную В 6 СА-сред и из такой питательной среды изоЛируютколонии, развившиеся из клеток, усвэивэющих зерновые продукты, 45Б, Генетическая маркировка бактерий,разрушающих крахмал,Осуществляют аналогично и. Б примера 1,Реэистентность по отношению к канамицину В некоторых трансформированныхи Кп штаммов следующая:КМикроорганизм Минимальная подавляющая ростконцентрация 55канамицина В,мкг/млСодержимое желудка 31Исходные ш гаммы 1,8 Генетически маркированные К -штаммы;ВНй - 6 УОК 1 - 2 - 4 250 14 АЬ 250 37 250 81 125 Селекционированный штамм, обозначенный как НЬУОК 1-2-14 АЬ, неподвижный, грамотрицательный, не вырабатывает пигментов.Хорошо растет в анаэробных условиях при 37 С. В большом количестве появляются сферические клетки и располагаются одна рядом с другой. Их средняя величина составляет 0,3 - 0,4 мкм, Сбраживает углероды до кислоты и углекислого газа. На комплексных питательных средах образует сероводород, не разжижает желатину, гемолиза не вызывает, Поэтому штамм, обозначенный кэк НЬУОК 1-2-14 АЬ, относят к роду ЧеНопеа.Штамм Чеопеа зр, (НЬУ ОК 1-2- 14 АЬ) депонирован под номером 00288 в Национальной коллекции микроорганизмов при Венгерском государственном институте здравоохранения.В, Внесение генетически маркированных микроорганизмов в рубец,Определяют аналогично пункту В примера 1 с тем различием, что используют штамм ЧеНопеИа зр, (НЬУОК 1-2-14 АЬ) и засевают стерильную В 6 СРа-среду, содержащую вместо бактоцеллюлозы 1,8 растворимого крахмала. Затем культуру примешивают в корм животных, получающих зерно. Перед введением и затем ежедневно через фистулу отбирают пробу. Животному вводят орально 310 мл культуры, содержащей в целом 7,1 Х 10 бактерий. Число содержащихся в пробах Кп клетокВ указано в табл, 3,Иэ табл, 3 видно, что введенный микроорганизм длительное время остается живым и размножается,Пример 3,А, Селекция штаммов микроорганизмов, выделенных ь.з рубца животных, вскармливаемых мелассой.Культуру получают аналоги:.но пункту А примера 1 с тем различием, что исходную пробу отбирают из рубца животных, которы.-, кормят мелассой. Отдельные иэоляты высевают нэ Я 6 СЕ-среду, содержащую вместо дрожжевого экстракта глюкозу, Развившиеся в жидкой питательной среде культуры наносят на й 6 СА-среду. На такие же питательные среды высевают колонии, которые развились из клеток способных усваивать мелассу, 1625317 10Таким образом получают происходящиеиз рубца микроорганизмы, которые могутметаболизировать мелассу.Б, Генетическая маркировка использующих мелассу бактерий.Осуществляют аналогично пункту Бпримера 1,Резистентность некоторых Кп -клетокБпо отношению к канамицину В следующая:Микроорганизм Минимальная подавляющая рост концентрации канамицина В,мкг/млСодержимое рубца 31Исходные штаммы 7,5Генетически маркированные Кп -штаммы:Н 1 т - ОУОК 1 - 3 - 2 25014 50034 25081 Ме 500132 500Селекционированный штамм, обозначенный как НЬ-СУОК 1-3-81 Ме, факультативно анаэробный, грамположительный.Клетки имеют палочковидную форму, неподвижны. Концы палочек сдавлены, Образует уксусную кислоту, ферментируетглюкозу до молочной кислоты. Палочки растут на различных питательных средах, редкопо отдельности, в большинстве случаев вформе цепочек. Не образует пигмента, Поэтому штамм относят к роду ВОЫоЬастег 1 шп.Штамм ВйбоЬассег 10 а зр, (НЬ-ОУОК 13-81 Ме) депонирован под номером 00289 вНациональном собрании микроорганизмовпри Венгерском государственном институте здравоохранения.В. Внесение генетически маркированных клеток в рубец.Поступают согласно и. В примера 1 стем же различием, что штаммомВйбоЬастег 1 цв эр, НИСМВ М 00289 (НЬОУОК-81 Ме) засевают Я ОСЕ-а-среду, содержащую вместо целлюлозы 1,8глюкозы. Культуру примешивают в корм животных, получающих мелассу. Перед кормлением и затем ежедневно через введеннуюв рубец фистулу отбирают пробы, Животному вводят орально 380 мл культуры, котораясодержит 1,6 Х 10" клеток на миллилитр.Число содержащихся в пробах Кп -клейток указано в табл. 4,Из данных табл. 4 видно, что введенныймикроорганизм длительное время находится в рубце животного. П р и м е р 4. Изменение соотношения продуцируемых в рубце летучих жирных кислот при использовании полученных бактерий.0,08 15 15 0,3 0,5 0,050,0080,32,0 . Две овцы получают комплексный корм(смесь иэ сена и овечьего корма). затем спустя 14 дней через фистулу отбирают иэ рубца пробу, 2 л рубцового сока фильтруют5 через многослойную марлю, фильтрат отделяют. Остающиеся на марле кусочки суспендируют в 1 л физиологического буфера,затем после перемешивания также фильтруют, Оба фильтрата обьедйняют, оставляют10 стоять, спустя 1 ч удаляют абсорбирующиеся на поверхности твердые вещества, длисследования используют только жидкостьСостав физиологического буфера следующий, г/л:15 Динатрийгидрофосфат(гидрофосфат натрия 0,316Дигидрофосфат калия 0,152Гидрокарбонат натрия 2,260Хлорид калия 0,37520 Сульфат магния 0,112Дигидрат хлорида кальция 0,050Гептагидрат сульфатажелеза (11)Моногидрат сульфата25 магния 0;004Гептагидрат сульфата цинка 0,004Пентагидрат сульфата меди 0,002Гексагидрат хлорид кобальта (1) 0,00130 рН смеси контролируют, в случае необходимости устанавливают равным 7,2 с помощью разбавленного водного растворасоляной кислоты или раствора гидроксиданатрия,35 Полученную смесь в соотношении 1:1разбавляют указанным выше физиологическим буфером; и в 1 л раствора добавляют4 г кормовой смеси. По 30 мл полученнойсуспензии заполняют в колбы Эрленмейера40 обьемом 100 мл, затем 200 порций предварительно подготовленной питательной среды стерилиэуют, 200 следующих порций нестерилиэуют и засевают полученными попримерам 1-3 бактериями, .45 Исследуемые бактерии инкубируют при37 С в анаэробных условиях. в течение 48 чна В ОСА+ СО-питательных средах следующего состава, :Солевой раствор 150 Солевой раствор ПРаствор микроэлементов, Дрожжевой экстрактОтфильтрованная жидкостьрубца 10,055 Карбонат натрия 0,4Моногидрат гидрохлоридацистеинаТиосульфат натрияЦеллюлоза (бакто)ГлюкозаСостав раствора микроэлементов следующий, мг:Хлорид цинка 40Дигидрат хлорида меди (И) 10Декагидрат тетраборатанатрия 10Тетрагидрат малибдатааммония 10Гексагидрат трихлоридажелеза 200Тетрагидрат хлорида марфганца10Свободная от ионов вида, мл До 1000Культурами засевают предварительноприготовленные, как указано выше, питательные среды в колбах Эрленмейера, Посев осуществляется в соотношении 2 млкультуры на 50 м питательной среды, Также высевают нестирильную культуру,Посев инкубируют в течение 40 ч прианаэробйых условиях, затем размножениепрекращают с помощью 100, концентрированной муравьиной кислоты и исследуют содержание летучих жирных кислот. Для этогокультуры фильтруют через марлю и затем втечение 15 мин центрифугируют в роторе счислом оборотов 4000. Смесь еще разфильтруют и затем для определения жирных кислот с 2 - 5 С-атомами вносят в разделительнуюю колонку газового хрома 1 ографа,снабженного плазменно-иониэационнымдетектором, Температура колонки 150 С.Разделительная колонка длиной 2 м, стеклянная трубка с внутренним диаметром 4мм; заполнение; 1 С 0 зтиленгликольадипинат + 2;(, ортофосфорной кислоты на силанизированном силикагелевом носителе(0,2 - 0,3 мм). Температура инжектора 190 С.Скорость потока И 2 50 мл/мин. Скоростьпотока Н 2 50 мл/мин, Скорость потока воздуха 200 мл/мин, Скорость бумаги 160 см ч.Время хроматографирования 20 мин. Количе:тво пробы 1 мл,Для каждой пробы осуществляют 4 параллельныхх измерения.Стандартный раствор содержит уксусную, пропионовую, иэомасляную, масляную, изовалериановуо и валериановуюкислоты,Полученные результаты представлены втабл. 5, В табл, 5 использованы следующиеобозначения;+Я - высевается после стерилизации; ЙЯ - высевается из пробирки, содержащей живую флору рубца;а - незначительное количество;Ь - отрицательный контроль; содержание в питагельной среде (жидкость рубца, 1020 2530 физиологический буфер и корм) летучих жирных кислот (среднее из 12 измерений);с - положительный контроль; содержание в содержащей первоначальные бактерии рубца и инкубированной культуре (питательная среда из жидкости рубца, фиэ;".ологического буфера и корма) летучих жирных кислот (среднее из 12 измерений);б - аналогично с, но в питательной среде с добавлением 5 рра моненцина (натриевая соль), среднее из 6 измерений;е - как и с, но в питательной среде с добавлением 100 ррщ моненцина (натриевая соль), среднее из 6 измерений.Иэ данных табл, 5 видно, что при введении предлагаемых культур микроорганизмов соотношение образующихся в рубце летучих жирных кислот может изменяться вшироких пределах. С помощью полученной из штамма НЬ - СУОК - 48 а культуры можно, например, повысить количество образующейся пропионовой кислоты, одновременно благодаря культуре микроорганизма НЬ - ОУОК 1 - 109 в повышается количество образующейся уксусной кислоты. Увеличение количества образующихся отдельных жирных кислот можно наблюдать также напитательных средах, которые не содержат никаких других микроорганизмов (Я) или в присутствии обычных бактерий рубца (ИЗ). В используемой опытной системе с натриевой солью моненцина соотношение уксусная кислота/пропионовая кислота (б, е) уменьшается на 1-2 десятых.П р и м е р 5. Получение бактериальногопрепарата для кормления животных, Вводимую бактерию выращивают на К6 СА+ СС-питательных средах указанного впримере 4 состава в анаэробных условиях, После выращивания клетки известным образом отделяют, например, путем фильтрации или центрифугирования. Отделенные кле гки суспендируют в физиологическом буфере (см, пример 4) и подвергают сушке 45 50 55 вымораживанием, Лиофилизированный бактериальнь 1 й препарат собирают. и при известных условиях в виде соответствующего препарата вводт (задают ) животным.Разведение культуры микроорганизмов можно осуществлять также на других известных питательных средах, например на питательных средах, содержащих в качестве источника углерода глюкозу, крахмал и т.д в качестве источника азота - неорганические соли,Препарат можно вводит. в смеси с кормом, питьевой водой, самостоятельно или вместе с другими биологическими активными веществами, например с антибиотиками, витаминами.Кроме лиофилизированного препаратаможно приготовлять также другие продукты. Микроорганизм можно вводить такжепосле смещения отделенной путем центрифугирования или фильтрации массы бактерий с соответствующими носителями илиразбавителями, например с карбонатомкальция, зерновыми культурами, премиксом или другими кормовыми средствами,В зависимости от применяемого корма 10и от направления выработки устанавливают, какой из приготовленных с помощьюпредлагаемого сп соба и благоприятно влияющих на флору рубца микроорганизмоввоспринимается и в каком количестве. Если 15нужно снизить частное уксусная кислота -пропионовая кислота, то вводят, например,культуру штамма РгоропЬас 1 егот эр.НИСМВ М 00287, если нужно увеличить эточастное, то дают, например, культуру микроорганизма ВМдоЬасегот вр. НМСМВМ 00289 (НЬ - ОУОК 1 - 3 - 81 Ме). Если вводятсвязывающие азот бактерии, то количествовводимого жвачным животным органического источника азота может уменьшаться. 25Культуру вводят в таком количестве, чтобы в1 мл содержимого рубца функционировалооколо 5 Х 10 и 5 Х 10 клеток.Пример 6.А, Получение сухого замороженного 30препарата,Полученная в соответствии с примером5 путем центрифугирования влажная бактериальная паста ОЕ - 950 весом 100 г лиофилизируется в установке для сушки 35сублимацией. Затем полученные 54 г продукта тщательно смешивают с 486 г пшеничных отрубей и помещают вобеспечивающий защиту бактерий мешокнепроницаемый для бактерий). Получают 40препарат, содержащий 10; биологическиактивного вещества,Б, Получение препарата, содержащего вкачестве носителя пшеничные отруби,100 г полученной в соответствии с примером 5 путем центрифугирования влажнойпасты микроорганизма равномерно перемешивают со 100 г или 900 г пшеничныхотрубей, затем помещают в обеспечивающий защиту бактерий мешок или контейнер. 50Таким образом получают содержащий 5 или10 биологически активного вещества препарат.В, Получение препарата, содержащегов качестве носителя бантонит. 55100 кг бентонитного порошка стерилизуют при 160 С в течение 2 ч, затем послеохлаждения до комнатной температуры помещают в смеситель. Смеситель приводят вдействие, с помощью дозатора жидкостей. распыляют 10 кг полученной в соответствии с примером 5 суспенэии.микроорганизмов. Полученную суспензию высушивают при 30 С до достижения влажности 6 - 8 и помещают в обеспечивающие защиту бактерий мешки (емкости).5 г продукта хранят при 4 С, при комнатной температуре или при 37 С, на нулевой, 20-й, 51-й и 72-й день берут пробы, затем препарат суспендируют в стерильный НВ-смеси и после соответствующего разбавления засевают на агар ЙОСА. Выращивание осуществляют 48 ч в анаэробчых условиях, затем определяют количество выращенных колоний.Результаты приведены в табл. 6, Из данных табл. 6 видно, что количество бактерий в продукте, содержащем бентонит, практически не изменяется.Г, Получение препарата, содержащего в качестве носителя аттапульгит,100 кг коллоидного аттапульгита стерилизуют 2 ч при 160 С, затем после охлаждения до комнатной температуры помещают в смеситель.Смеситель приводят в действие, и через насадку дозатора жидкостей полученная в соответствии с примером 5 распыляемая суспензия микроорганизмов в количестве 10 кг распрыскивается на аттапульгит.Полученную дисперсию высушивают при 30 С до достижения влажности 6 Д и помещают в обеспечивающие защиту бактерий мешки (емкости).По 5 г продукта хранят при 4 С, при комнатной температуре или при 37 С, затем на нулевой, 20-й, 51-й и на 72-й день берут пробы. Препарат суспендируют в стерильной НВ-смеси и после соответствующего разбавления засевают на агар ЙОСА. Выращивание осуществляют 46 ч в анаэробных условиях, затем определяют количество выращенных колоний,Результаты приведены в табл. 7.Из данных табл, 7 видно, что количество бактерий в продукте, содержащем аттапульгит, не изменяется. П р и м е р 7, Питательную среду ЙОСА. + СО указанного в примере 4 состава засевают культурой штамма РгоропЬас 1 егогп ар. НИСМВ М 00287 (НЬ - ОУОК 1 - 1 - 1235 л), Выращивание осуществляют в двух ферментерах с полезным объемом 5 л при 37 С в анаэробных условиях, Ферментацию начинают с посева 10 мл приготовленного на питательной среде такого же состава инокулята и продолжают в течение 48 ч. Затем клетки отделяют центрифугированием в роторе с числом оборотов 5000/мин и получен15 1625317 16 Таблица 1 Таблица 2 ный отцентрифугированный влажный осадок в количестве 53 г тщательно смешивают с 4 кг кукурузного шрота, Смесь разделяют на 8 частей и вводят 8-ми овцам. Животных предварительно заставляют голодать один день.Животные получают препарат в возрасте 3 мес. В качестве контроля служат 8 животных, После дачи препарата продолжают кормление сеном, еженедельно определяют вес животных. Корм: луговое сено аб ИЫ 10 а (600 - 900 г/день) и 100 г/день добавки минеральной соли и витамина в носитель из кукурузного шрота.Результаты указаны в табл, 8,Из приведенных данных рассчитывают средний ежедневный прирост веса одного животного. Результаты приведены в табл. 9.У животных контрольной группы при скудном корме в течение 35 дней отмечается прирост веса 360 г; у обработанных штаммом РгоропЬастегце зр, ННСМВ гв 00287 (НЬ-ОУОК 1 - 1 - 1233 г) животных увеличение веса 2620 г; у обработанных штаммом НЬ 6 УОК 1-48 а животных прирост веса 3875 г.Из приведенных данных видно, что полученные с помощью предлагаемого способа препараты значительно повышают прирост веса овец.10 Формула изобретения Способ получения препарата для кормления жвачных животных, включающий смешивание культуры микроорганизмов с 15 целевыми добавками, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения продуктивности, в качестве культур микроорганизмов используют штамм Ргороп 1 Ьас 1 ег 1 ощ зр.НЙСМВ В 00287, или штамм ЧеопеИа 20 зр. НМСМВ М 00288, или штаммВйбоЬастегот зр, НМСМВ М 00289.1625317 4 б правильный отбор проб Табли Изовале риа.новаяя кислота мкг/мл Уксус- Пропионая кис- новая лота, кислота, мкг/мл мкг/мл риме- ание Уксусая (пропионоая кислота Валериановая кислота, мкг/мл 1,7 2,0 0,35.0,50 0,35 0,52 а 0,39 0,51 0,41 0,37 0,0 аБактериальный штамм НЬУОК 1 - 1 - 12352 НЬ.ОУОЮ -2-14 АЬ НЬ.ОУОИ -3-81 Ме 0,38 1,952,21 2,81 1,51 1,68 1,69 1,61 1,87 2,60 0,58 1,36 0,67 0,81 0,74 0,91 1,08 0,91 Изомас- Масляляная ная кискислота, лота, . мкг/мл мкг/мл Таблица 3 0,91 0,77 0,65 1,43 3,29 3,47 2,04 1,84 1,67 1,77