Способ получения пептидной фракции кумыса, обладающей иммуностимулирующим действием

(1% ПП К 37 02 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВИДЕТЕЛЬСТВ У Н АВТОРСН ственный униЗлищева,нуаенко,гика0888) видетельст 61 К 35(78 о СССР 1977. НОЙ ФРАК- НОСТИМУЛИ(56) Авторско В 571267, клк медициполучениятв. Цель ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДЦИИ КУМЫСА, ОБЛАДАКЩЕЙ ИММУРУЗВИМ ДЕЙСТВИЕМ(57) Изобретение относитсяне, в частности к способамбиологически активных веще изобретения - получение пептиднойфракции кумыса, обладающей стимулирующим действием, Кумыс из коровьегомолока и подсырной сыворотки центрифугируют. Надосадочную жидкость хрома-.тографируют на геле Мо 1 яе 1 есй С.Элюируют 0,9 Х-ным раствором МаС 1.Детекцию пептидной Фракции проводятспектрофотометрически. Собирают пептндную фракцию и упаривают на вакуумном испарителе. Выделенная пептидная дракция имеет следующий состав,йфС 37,74; Н 5,69; И 2,30; Р 7,14; Оостальное. Максимумы поглощения в Уфспектре при 226 и 280 нм, Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000,Вещество дает положительную реакциюна биурет и нингидрин.Чеции начинают приВообъем элюции фракции;объем колонки). Затеи 2,5 (где 7 е Ч - свободныйоупаривают при 1 129555Изобретение относится к медицийе,в частности к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуностимулирующим действием,Способ осуществляется следующимобразом,П р и м е р 1, 50 мл кумыса из коровьего молока и отходов сыродельческой промышленности - подсырной сыворотки центрифугируют при 10000 об/мин 10(6500 ) в течение 10 мин. Затем надэсадочную жидкость хроматографируютна геле Мо 1 зе 1 ес 6-75 (ВНР), (колонка 0,8 м х 0,05 мл, 450 мл геля). Элюируют 0,9 -ным раствором ИаС 1. Детекцию пептидной фракции проводят спектрофотометрически при 280 нм. Собирают400 мл пептидной фракции и упариваютпри пониженном давлении на вакуумномоиспарителе при 30-40 С до объема . 2015 мл. Выделенная пептидная фракцияпредставляет собой опалесцирующуюжидкость желтоватого цвета и имеетэлементный состав, Х: С 37,74; Н 5,691И 2,30; Р 7, 14; О остальное, Основныеполосы ИК спектра, см , растворв диметилсульфоксиде: 3400 с, 3000 ср,2950 ср, 2150 сл, 1680 с, 1250 сл.Максимумы поглощения в УФ-областипри.226 и 280 нм (в водном растворе)Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на биурет и нингидрин.П р и и е р 2, 50 мл кумыса, полученного из коровьего молока и отходов сыродельческой промьшленностиподсырной сыворотки центрифугируют втечение 12 мин при 10000 об/мин(6500 8) . 45 мл надосадочной жидкостихроматбграфируют на геле Мо 1 ве 1 есС, элюируют 0,9 .-ным растворомИаС 1. Получение химически чистогопродукта достигается за счет тогочто на хроматографическую колонку на 45носят 45 ил надосэдочной жидкости,полученной после центрифугирования50 мл кумыса.При хроматографнровании в результате размывания хроматографическойзоны, получают 400 мл пептидной фракции, содержащей смесь пептидов с приведенными характеристиками.Выход пептндных фракций детектируют спектрофотометрически, сбор фрак 55 7 230-40 С до объема 15 ип. Выделенная пептидная фракция представляет собой опалесцирующую жидкость желтоватого цвета и имеет элементный состав,.: С 33,64; Н 6,01; И 2,80; Р 8,56;0 остальное Основные полосы ИК"спект-ра, см , раствор в диметилмульфоксиде: 3400 с, 3000 ср, 2950 ср, 2150 сл, 1680 с, 1250 сл, в УФ-спект" ре: 226 и 280 нм в водном растворе. Молекулярная масса 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на нингидрин и биурет.При исследовании влияния пептидной фракции на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови у морских свинок берут 1 мл крови из сердца в стерильные пробирки беэ консерванта. 0,3 мл крови культивируют в пробирках иэ нейтрального стекла в общем объеме 5 мл на среде Игла МЭМ с добавлением 20%сыворотки крупного рогатого скота. Кровь культивируют в трех вариантах: 1) нестимулированнал контрольная группа; 2) культура с неспецифическимстимулятором фитогемагглютинином фирмы Кеапа 1 (Венгрия) в концентрагии 40 мкг/мл;3) культура, стимулированная пептидной фракцией., полученной иэ кумысав концентрации 40 мкг/мл, Череэ 72 ч снимают надосадочную жидкость, встряхивают осадок и в каждую пробирку добавляют по 10 мл 10 .-ной уксусной кислоты для гемолиза эритроцитов. Затем центрифугируют в течение 10 мин при 3000-4000 об/мин, снимают надосадочную жидкость, добавляют 5-6 капель фиксатора (этанола), ресуспендируют осадок и переносят на предметное стекло. Мазки. высушивают, окрашивают и проводят подсчет содержания бластов на 300"400 клеток. Анализ показывает, что пролиферативная активность лимфоцитов при стимуляции пептидной фракции в 1,3 раза выше, чем при стимуляции, например, фитогемагглютинином.При стимуляции фитогемагглютинином количество бластов 19,9+0,269, а при стимуляции пептидной фракций 25,01 ф 10,527.Формула изобретенияСпособ получения пептидной фракции кумыса, обладающей иммуностимулирующим действием, включающий центрифугиСоставитель Л.ШилинаРедактор Л,Волкова Техред И.Попович Корректор И.Эрдейи Заказ 1859 1Тираж 644 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 129555 рование пробы в течение 10-12 мин при 6500 .н, хроматографию на геле Мо 1 зеесй С, элюцию физиологическим раствором и получение целевого продукта в объеме элюции с максимумом по 7 4глощения в УФ-спектре 226 н 280 нмс молекулярной массой 500-4000 и имею".щего следующий элементный состав.Е:С 34) 50; +0,96; Н 6,00+0,40, О 273+