Способ определения иммунологического статуса больных туберкулезом

К 45/О 3/4 ЕНИЯ атель н ад в цова 2 УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ ОПИСАНИЕ ИЗО(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ (57) Изобретение относится к иммуно-. логии. С целью повышения точности способа к гепаринизированной крови больного туберкулезом легких добавляют 0,87%-ный раствор БН С 1 центЭ рифугируют, клеточную взвесь отмывают средой Игла и ресуспендируют. Концентрацию нейтрофилов во взвеси доводят средой Игла до 1 10 в 1 мп.5 Инкубируют 30 мин при 37 С в. присутствии интерферона в разведении 1;4- 1:16 и при концентрации 10 полистероловых частиц латекса. При увеличе- й нии фагоцитарного числа до 51 -683 и фагоцитарного индекса до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением выявляют снижение иммунологического статуса, 1 12Изобретение относится к медицине, а именно к ижунологии.Цель изобретения - повьппение точности способа за счет того, что нейтрофилы инкубируют в присутствии интерферона.Способ осуществляют следующим образом.К 4 ма гепаринизированной крови больного туберкулезом легких добавляют 10 мл 0,83 раствора БН С 1 и перемешивают. Смесь оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Этот процесс приводит к лизису эритроцитов. Затем смесь центрифугируют 5 мин при 800 об/мин, в результате нв дно пробирки оседает взвесь лейкоцитов с небольшой примесью эритроцитов. Клеточную взвесь трижды отмывают от раствора 3 Н С 1 средой Игла и ресуспендируют. В камере Горяева подсчитывают количество выделенных нейтро 6 филов, из 4 мл крови получают 1 10 1 10 клеток. Добавляют среду Игла и цоводят концентрацию нейтрофилов во взвеси до 1 10 в 1 мл. Берут 9 цент рифужных пробирок и в каждую иэ них выливают по 1 мл среды Игла с клеточ ной вэвесью. Предварительно подготавливают разведения интерферона, до бавляя к нему определенное количество среды Игла так, чтобы получитьразведения интерферона 1:2, 1;4, 1:6, 1:8, ."10, 1:12, 1:16, затем в каждую пробирку, содержащую по 1 мл среды Игла с клеточной взвесью, добавляют по 1 мл раствора интерферонв в соответствующих разведениях таким образом, чтобы получить следующие конечные разведения интерферона в смеси с клеточной суспензией: 1:2, 1:4, 1",8, 1:12, 1:16, 1:20, 1:24, 1:32 В последнюю 9-ю пробирку, которая служит контролем реакции, к 1 мл клеточной взвеси добавляют .1 мп среды Игла беэ интерферона. В каждую из 9 пробирок добавляют по 0,1 мл раствора полистероловых частиц лвтекса диаметром 1,3 мк в концентрации 10 "частиц в 1 мл среды Игла. Клеточную взвесь с латексом и интерфероном перемешивают легким встряхиванием пробирок и инкубируют 30 мин при 37 С, Затем пробирки центрифугируют 5 мин при 800 об/мин. Иэ осадка делают мазки, которые фиксируют метанолом 7 мин и окрашивают по методу Романовского-Гимза; .Способность ней- трофилов поглощать частицы латекса 89499 2:оценивают при помощи световой микроскопии окрашенных мазков под иммерсией (объектив х 90, окуляр х 7);частицы латекса имеют вид круглыхбесцветных опвлесцирующих тел.Фвгоцитарную активность определяют на основании подсчета 100 клеток,при этом учитывают следующие показатели: фагоцитврное число (двлее ФЧ) -10 процент фвгоцитирующих нейтрофилов;фагоцитарный индекс (двлее ФИ)среднее число частиц латекса в одномпрофагоцитированном нейтрофиле. Приувеличении ФЧ до 51-68 и ФИ до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением выявляют снижение иммунологического статуса,П р и м е р 1. Больной Н., 42лет, поступил с диагнозом: фиброзно 20 кавернозный туберкулез .верхней долиправого легкого в фазе распада,БК-,Больного беспокоит кашель с небольшим выделением слизистогнойной мокроты, общая слабость. Объективно:больной умеренного питания, нормального телосложения, кодные покрытияи видимые слизистые без особенностей,Тоны сердца ритмичные. Пульс92 уд/мин, хорошего наполнения и30 напряжения. В легких на фоне жесткого дыхания выслушиваются рассеянныесухие хрипы. Печень пвльпируется украя реберной дуги. Живот мягкий,безболезненный, стул и диурез без35 особенностей, На обзорной рентгенограмме органов грудной клетки видныдеструктивные изменения верхней доли правого легкого. Общий анализкрови: Эр 4,8 г/л, Л 9,4 г/л, Э,40 П, С, Л, М. СОЭ 17 мм/ч.Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике, предлагаемой в изобретении: выделениенейтрофилов из периферической крови5 больного и доведение концентрации до51 10 клеток в 1 мл среды Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофиламн частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферона50 в разведении 1:4.В результате осуществления реакций показатели фагоцитврной активности нейтрофилов до обработки клеток интерфероном составляли: ФЧ 38 55 и ФИ 2,3. После обработки клетокраствором интерферона в разведении1:4, ФЧ составляет 51% и ФИ 4,4,П р и м е р 2. Больной 35 лет,поступил с диагнозом: ннфильтративформула изобретения Составитель М, ПознякРедактор А. Долинич Техред В.Кадар Корректор В, Бутяга Э Заказ 7837/6 Тираж 617 . Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 128949ный туберкулез левого легкого в фазераспада, БК-. Больного беспокоит кашель с небольшим отделением мокроты,общая слабость. Объективно: умеренного питания, нормального телосложения. 5Кожные покровы и видимые слизистыебеэ особенностей, Тоны сердца ясные,чистые. Пульс 90 уд/мин. Анализыкрови и мочи в пределах нормы. Наобзорной рентгенограмме органов груд Оной клетки фиброзно измененное правое легкое.Иммунологические исследования выполнены согласно методике, предлагаемой в изобретении: выделение нейтро-филов из периферической крови больного и доведение их концентрации до51 10 клеток в 1 мл среды Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофилами частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферонав разведении 1;8.В результате осуществления реакции, показатели фагоцитарной активности нейтрофилов до обработки клеток интерфероном составили: ФЧ 403и ФИ 3,0. После обработки клеток интерфероном ФЧ 60 и ФИ 5,1.П р и м е р 3, Больной Н., 40лет, поступил с диагнозом: диссеминированный туберкулез обоих легкихв фазе распада, БК+, Больного беспокоит кашель с большим отделениемгнойной мокроты, общая слабость,Больной пониженного питания, нормального телосложения, Кожные покровычистые, со стороны органов брюшнойполости изменений нет, Анализы крови 94и мочи в пределах нормы. На обзорной рентгенограмме фиброзно измененные правое и левое легкое.Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике. предлагаемой в изобретении: выделение нейтрофилов из периферической крови больного и доведение их до концентрации 1 О клеток в 1 мл среды Игла; осуществление реакции поглощения нейтрофилами частиц латекса до и после обработки клеток раствором интерферона в концентрации 1:16.В результате осуществления реакции показатели фагоцитарной активности нейтрофилов до обработки клеток раствором интерферона в концентрации 1:16 ФЧ 687. и ФИ 6,7. Способ определения иммунологического статуса больных туберкулезом путем выделения из .крови нейтрофилов больного и инкубирования клеток под действием лекарственного вещества с последующей оценкой их функциональной активности, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, инкубирование нейтрофилов осуществляют в присутствии интерферона в разведении 1:4-1:16 на 1 10 клеток в мл и при увеличении5фагоцитарного числа до 51-687 и фагоцитарного индекса до 4,4-6,7 по сравнению с исходным значением, выявляют снижение иммунологического статуса.