Способ консервирования изолированных клеток печени

ОЮЗ СОВЕТСНИХОЦИАЛИСТИЧЕСНИХСПУБЛИН 19) (10А 01 М 1 0 СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТИРЫТОБРЕТЕНИЯЕЛЬСТВУ усенина инсти; ечения Сб. рава.37. ОПИСАНИЕ АВТОРСКОМУ СВИД(21) 3347806/28-1322) 05.11,8146)15. 11. 83 Бюл. 9 42 72) Г.Е. Островерхов и В, лик71) 2-й Московский ордена государственный медицински тут им. Н.И, Пирогова 53) 6 б. 314-089 0888) (56) 1. Патогенид и методы печеночной недостаточности бот 2 МОЛГМИ им. НИ. Пиро М., 1978, т, ХХП, вып. 25,(54) (57) СНОСОВ КОНСЕРВИРОВАНИЯИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ путемпомещения их в консервирующие растворы, охлажденные до 2-4 С, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, .сцелью увеличения срока храненийи увеличения жизнеспособных клеток, взвесь изолированных клетоксначала помещают в отдельные емкости обьемом 1,0-1,5 см из полупроницаемой мембраной, смену средыпроводят трижды через каждые 1012 дней,1053803 Составитель И. Белянин Техред й. Гергель Корректор А. Ильин Редакор С, Лисина Эаказ 8957/3Тираж 721 Подписное ВНИИПО Государственного комнтета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иос.ква, Ж., Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение, относится к медицине и может быть использованоФпрн консервировании изолированныхклеток печени.Известе способ консервированияизолированных клеток печени путем помещения в консервирующиерастворы Тироде, Эрка, Хенса, Игла,среды 199 с последующим выставле.нием их в холодильник при + 2-4 С0и сменой средычерез.определенныеинтервалы 1,Однако известный способ характеризуется тем, что клеточная вэвес;при хранении в среде консервирования в нижних отделах Флакона образует осадок - многослой клеточнойвзвеси толщиной 10-1,.5 см и поэтому поверхностный слой клетокимеет хороший контакт оо средой,а нижние слои клеток - плохой,что и определяет значительное разрушение клеток и особеныо в нижних слоях осадка, что подтверждается проведенными морфологическимиисследованиями. В результате этогоспособ позволяет сохранить к 30дню только 47 клеток, которыепри окрашиванни 0,2-ным растворомтрипановой сини остаются светлыми,то есть жизнеспособнымиЦель изобретения - увеличениесрока сохранения и увеличение количества жизнеспособных клетокпечени.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу консервирования изолированных клеток печени путем помещения их в консервирующие .растворы, охлажденные до 2-4 ОС,взвесь изолированных клеток помещают в отдельные емкости объемом1,0-1,5 см иэ полупроницаемой мемфбраны, смену среды проводят триждычерез каждые 10-12 дней.Способ осуществляют следуюшимобразом.В стерильных условиях проводятзаготовку изолированных клеток печени путем использования Ферментно-механического способа . Полученнуюклеточную взвесь разводят в среде199 до концентрации 20 млн/мл и заполняют ими стерильный шприц сточной градуировкой и стерильнойсистемой гибких силиконовых .трубок,. Одновременно проводят подготовкуполупроницаемой целлофановой плен.5 ки 30, 100), которую помещают. в Физиологический раствор, затемпереносят в раствор диоцида1 :,2000 для стерилизации, а затемпромывают целлофан дистиллированной10 водой.В условиях операционной участок .пленки надевают на конец снликоново.го шланга и, отсупив на 1,0 см отего конца, накладывают лигатуру,15 после чего в эту полость вводят 1.млклеточной взвеси и, затягивая лигатуру, удаляют, силиконовый шланг, .Таким образом, образуется замкнутаяполость, в которой находится клеточная взвесь. В стерильный флакон500 мл) помещают 350-400 гранул,которые дополнительно заливают сре;дой 199, и флакон вновь герметичнозакрывают в холодильник с температурой + 4 С. Гранулы во флаконе находятся как бы воф взвешенном состоянии. За флаконом с гранулами проводятдинамическое наблюдение (10-12,20-24, 30-36 дн), следят за окраской среды, изменяют рН среды, черезопределенные временные. интервалыпроводят забор гранул, вскрытие йх,приготовление мазка клеток с последующим подсчетом клеток в поле зренияЭпосле обработки их витальными красиЗ 5 телями. Через каждые 10-12 дн проводят смену среды путем удалениястарой и заливки Флакона нойой средой 199. Гранулы сохраняют в течение30-Хб дн.40 Использование предлагаемого спо"соба консервирования изолированныхклеток печени позволяет увеличитьсрок сохранения и количество жизнеспособных клеток .с 47 до 76, прб- . 45 водить просто и быстро смену среды,,сохранять гранулы, а соответственнои изолированные клетки во взешенномсостоянии и, обеспечивая хорошийконтактфклеток со средой, упрощает 50 их использование