Способ диагностики атеросклероза

(19 1 11 33/9 ВИДЕТЕЛЬСТВ венныи инврачей ническаяМедицина,медици я относительно нтеросклероз. 1диагности ие точ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(71) Белорусский государстститут усовершенствования(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТЕРОСКЛЕЗА(57) Ик зобретение относится ль изобретения - повь ности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклерозаВ пробе крови определяют содержаниехолестерина и липидов. Липиды экстрагируют иэ тромбоцитов и эритроцитов.Остаток растворяют в хлороформе и наносят капилляром "старт" хроматографических пластин. В смеси растворителей проводят разделение фракций.Затем пластинки проявляют и высушивают. Определяют фракции липидов.Пластинки денситометрируются. Послеэтого вычисляют содержание холестерина. При увеличении этого показате1276991 Фракции На старте011 + 0,007 Фосфолипиды 15 Холестерин Свободные жирные кислоты 0,26 + 0,01 0,45 + 0,02 20 Триглицериды Эфиры холестерина 0,72 + 0,01 Пластинки денситометрируются споследующим вычислением процентногосодержания по формуле:30 показатель денситометра пятна ХС х 100% содержание ХС -интегральный показатель денситометравсех фракций липидов.И при увеличении этого показателя 35 получают плазму, обогащенную тромбоотносительно нормы диагностируют ате- цитами, Для этого берут утром наторосклероз, щак у больного из локтевой вены вП р и м е р 1. Больной Василь- силиконированную посуду 5 мл кровиев Н.В., 45 лет, поступил с клиничес- с 3,8%-ным цитратом натрия в соотким диагнозом: ИБС, стенокардия на ношении. 9:1, Цитратную кровь центри.:;ряжения, атеросклероз аорты, коро- фугируют при 1000 об/мин в течениенарных артерий. 10 мин или отстаивают в течение одного часа при комнатной температуре,Для диагностики заболевания были Полученная плазма содержит 300использованы два способы. Содержание 400 тыс. тромбоцитов в 1 мм . Под 45 Ъобщего ХС общепринятым способом АЬе // счет тромбоцитов проводят под микропоказал, что содержание ХС в плазме скопом с применением фазового конткрови составляет 170 мг/дл. Получен- растного устройства. 2 мл плазмы,ный показатель ниже среднего уровня обогащенной тромбоцитами, центрифунормы, следовательно, он не выявляет 50 гируют при 3000 об/мин в течениеу данного больного признаков атеро мин. Полученный тромбоцитарныйсклероза, хотя диагноз ИБС и атеро- осадок трижды отмывают раствором,склеротического поражения сосудов содержащим 0,279 г ЭДА (этилендиаминбыл поставлен врачами клиницистами тетраацетат), 0,21 г Тгдз, 0,186 гна основании инструментальных и дру КС 1 на 500 мл дистиллированной вогих методов исследования. ды. Отмывание производят в процессеПоэтому определяют относительноецентрифугирования при 300 об/мин всодержание ХС в тромбоцитах, Вначале течение 15 мин; Изобретение относится к медицине,а именно к кардиологии, и может бытьиспользовано для диагностики атеросклероза,Цель изобретения - повышение точности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклероза.Способ осуществляют следующим образом,У больного производят забор крови,в пробе которой определяют содержание холестерина ХС) и липидов. Липиды экстрагируют из тромбоцитов и эритроцитов 20 объемами смеси хлороформметанол 2:1. Разделяют на 2 фазы добавлением 0,5 мл подкисленной водыи центрифугированием в течение 10 минпри 1500 об/мин. Нижнюю фазу, содержащую липиды, отбирают и выпариваютв токе азота при 37 С, Остаток растворяют в 100 мкл хлороформа и наносят капилляром "старт" хроматографических пластин. Разделение фракцийпроводят на пластинах Б 1 п 1:о 1(ЧССР) в смеси растворителей: петролейный эфир, диэтиловый эфир ледяная уксусная кислота - 30:10:02.Проявляют пластинки 2%-ным спиртовымраствором фосфорномолибденовой кислоты и высушивают при 100 С в течение 5 мин.Определяют следующие фракции липидов: фосфолипиды, ХС, свободные 5 жирные кислоты, триглицериды, эфирыхолестерина со следующими значениямиКГ.В таблице приведены значения К 1полученных липидных фракций.101276991 Составитель Н,ВалееваРедактор В.Ковтун Техред Л.Сердюкова Корректор М.Демчик Заказ 6661/37 Тираж 78 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 ГПроизводственно-полиграфическое предприятие,г.ужгород,ул.Проектная,4 Экстрагируют липиды тромбоцитов. Для этого в пробирку с отмытыми тром; боцитами добавляют 2,4 мл хлороформа и метанола (2:1), закрывают плотно пробкой и оставляют для экстракции 5 на 5 мин. Добавляют 0,5 мл подкисленной воды (0,5 мп концентрированной серной кислоты на, 1 л дистиллированной воды), встряхивают 20 раз и оставляют на 10-20 ч для разделения на 2 фазы. Отбирают нижнюю фазу содержащую липиды и выпаривают в токе азота при 37 С. Сухой липидный экстракт разводят в 100 мкл хлороформа и капилляром наносят на старт хроматографической пластины, покрытой силикагелем (например, "Ы 1 цйо 1", ЧССР). Разделение фракций проводят в смеси растворителей: петролейный эфир, диэтиловый эфир, уксусная кислота (30:10:0,2). Проявляют пластинки 2 -ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и высушиованием при 100 С в течение 5 мин.Определяют фракции липидов исходя из значений КГ и денситометрируют пластинки на денситометре ("Виан"). Интегральный денситометрический показатель равняется 357, а для ХС - 104. ЗОВычисляют относительное содержание ХС в тромбоцитах (29,1 ). Полученный показатель превышает норму, что свидетельствует о,наличии у больного атеросклеротических изменений в 35 организме с последующей клиникой ИБС. П р и м е р 2Больной Григорьев Н.Р., 36 лет, поступил в клиникус неясными болями за грудиной, сходными с клиникой ИБС, являющейся отражением атеросклероза коронарных артерий,Проведенные инструментальные методы не могут подтвердить наличие атеросклеротического процессаОпределение ХС по прототипному способу выявило показатель равный 220 мг/дл, что является пограничным показателем между нормой и патологией,- Определение относительного содержания ХС в тромбоцитах по предлагаемому методу составило 21 ., что явля- ется критерием нормы. Последующее клиническое обследование больного выявило, что происхождение болей эа грудиной связано с периодическими спазмами пищевода и не имеет отношения к клинике ИБС. Формула и э обретения Способ диагностики атеросклероза путем определения холестерина относительно общего содержания липидов в крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет диагностирования в период регрессии атеросклероза, определение проводят в тромбоцитах и при значении этого показателя выше нормы диагностируют атеросклероз.