Способ определения противовоспалительной активности

(19) (1 Ш 4 СО М 334 ЕНИЯ Бюл. В линичес цины СО ий и В. (088.8) ои и эксперАМН СССР.Щербаков ние. - М.: оспа ТИВОВОСтся к экспеии, можеткрининга про ств, обладаю ностью, Цель очност ния в качесвоспаление,утем использов спо тве гента, вызывающего ана и оценки проти ых свойств. Для эт евой полисахарид и егечзае в 0,857- вводят подопытным внутривенно после овоспа зимо тель о зим БассЬ а гошутворе еааС 1 ам) во его в ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЗОБ А ВТОРСНОМУ СВИ ТЕЛЬСТВ(71) Институт кментальной меди(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ(57) Изобретение относриментальной фармаколобыть использовано длятивовоспалительных вещ щих гепатотропнои акти изобретения - повышени тельной гомогенизации. Забой осуществляют путем декапитации через 2,5,9,15 и 21 сут после введения зимоэана - кусочки печени фикеируют в смеси Карнуа, заливают в парафин и делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зозином. В печени через 2 сут после введения зи- .мозана образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-57 площадисреза печени, через 5 сут площадьс инфильтратами - 20-257., они четковыражены. Пик инфильтрации - на 9-есут, площадь ее 30-357, после чегоидет обратный процесс. Испытуемыйпрепарат вводят в живой организм вфармакологической дозе за 2 ч до,через 2 ч после или через 5 сут после введения зимозана. Антивоспалительные свойства вещества оцениваютпо торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом и второмслучаях и по снижению уровня инфильтрации на 6-9 сут в третьемслучае.1 12Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для скрининга противовоспалительных веществ, обладающих гепатотропной активностью.1 ель изобретения - повышение точности способа для оценки гепатотропных средств за счет использования в качестве агента, вызывающего воспаление, зимозана и оценки противовоспалительных свойств по степени торможения мононуклеарной инфильтрации.Способ осуществляется следующим образом.Зимозан - дрожжевой полисахарид иэ БассЬагошусеэ сегечдзае в дозе от 0,02 до 2 мг в 0,5 мл 0,857-ный ИаС 1 на мышь линии (СВАхС 57 В 1) Р весом 18-22 г вводят внутривенно после его предварительной гомогениэации. Забой осуществляется путем декапитации через 2,5,9,15 и 21 сут после введения эимозана. Кусочки печени фиксируются в смеси Карнуа, заливаются в парафин, после чего делают срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивают гематоксилин-зоэином. Через 2 сут после внутривенного введения эимоэана в печени образуются мононуклеарные инфильтраты, занимающие 3-57 площади среза печени, Через 5 сут площадь, занимаемая ими, составляет 20-257 площади среза печени. В это время мононуклеарные инфильтраты четко выражены, имеют очерченные границы. Пик мононуклеарной инфильтрации приходится на 9-е сут, когда площадь, занимаемая мононуклеарными инфильтратами, составляет 30-35%, после чего происходит постепенное обратное развитие процесса. Морфологическая картина, наблюдаемая на срезах печени после введения эимозана, идентична морфологической картине мезенхимально-воспалительногосиндрома, развивающегося при вирусном гепатите. Морфометрия площади,занимаемой мононуклеарными инфильтратами, осуществляется по Автандилову Г.Г. в 50 полях зрения,Испытуемый препарат вводят в живой организм в фармакологической дозе за 2 ч до, через 2 ч после или через 5 сут после введения зимоэана. Антивоспалительные свойства вещества оценивают по торможению наступления мононуклеарной инфильтрации в первом72246 3 45 50 55 5 10 5 20 25 30 35 40 и втором случаях и по снижению уровня инфильтрации на 6-9-е сут в третьем случае.Пример 1, В опыте мыши весом 20 г линии (СВАхС 57 В 1) Р внутрибрюшинно вводят стандартный препарат гидрокортизона в дозе 1,25 мг/10 г массы тела, т.е, в среднем на мьппь вводится 2,5 мг гидрокортизона. Через 2 ч вводят эимоэан в дозе 1 мг/10 г массы тела, в среднем 2 мг на мьппь в 0,5 мл 0,857 ИаСЙ. Через 2 сут мышей забивают путем декапитации; забирают кусочки печени, фиксируют в смеси Карнуа, заливают в параФин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилин-эозиноми исследуют на наличие мононуклеарных инфильтратов. В этом случае мононуклеарные инфильтраты не обнаруживаются. Контролем служат мьппи той же линии, которым вместо гидрокортизона вводится 0,857.-ный 11 аС 1 и зимоэан по той же схеме, что и в опыте. В контроле мононуклеарные инфильтраты занимают .3-5% площади среза печени. Другой:. контрольной группе мьппей вводят трлько гидрокортизон, в печени инфильтратов не обнаруживают, По отсутствию мононуклеарных инфильтратов в печени у мьпйей, получающих зимоэан чеРез 2 ч после введения гидрокортиэона, заключают, что гидрокортизон оказывает антивоспалительное действие.П р и м е р 2. Гидрокортизон, введенный через 2 ч .после введения зимозана, при аналогичных условиях, описанных в примере 1, также оказывает антивоспалительное действие, т.е. мононуклеарные инфильтраты в печени через 2 сут отсутствуют. П р и м е р 3. Гидрокортизон вводят через 5 сут после введения зимозана, т.е. на фоне выраженной мононуклеарной инфильтрации. Забой животных осуществляют через 1,2,3 и 4 сут после введения гидрокортизона. В контроле вводят 0,5 мл 0,857-ного ИаС 1 через 5 сут после введения эимозана. В опыте введение гидрокортизона приводит к обратному развитию мононуклеарной инфильтрации в первые же сутки после его введения, в то время как в контроле она продолжает нарастать до 9 сут после введения зимозана. По обратному развитию мононуклеарной инфильтрации,.не достигшей своего пика, заключают, что гидЗаказ 6333/43 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений.и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическ 9 е предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4 рокортизон оказывает антивоспалительное действие.Использование предлагаемого способа для скрининга гепатотропных препаратов для оценки их антивоспалительных свойств обеспечивает по сравнению с известным способом для скри.нинга антивоспалительных веществ на модели карагинанового воспаления следующие преимущества: способ более 1 О достоверен, так как включенная в способ эимозановая модель обеспечивает развитие воспалительного процесса в печени, ближе воспроизводит реальную ситуацию, развивающуюся при 15 вирусном гепатите, поскольку воспроизводит один из главных морфологических признаков вирусного гепатита, каким является мононуклеарная инфильтрация. Кроме того, предлагае мый способ прост в исполнении и для 246 4количественной оценки воспалительного процесса. Формула изобретенияСпособ определения противовоспалительной активности путем введения животным вещества, вызывающего воспаление, с последующим введением испытуемого вещества, взятием пунктатаочага воспаления и оценкой противо- воспалительной активности испытуемого вещества по степени торможения клеточной инфильтрации, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа для оценки гепатотропных средств, в качестве агента, вызывающего воспаление, используют зимозан, а противовоспалительные свойства оценивают по степени торможения мононуклеарной инфильтрации.