Способ эксклюзионной жидкостной хроматографии полимеров

(21) (22) (46) (71) 0 960.0 4. 10 3. 11 23 КОСТНОЙ 86. Бюл,Трудовоут высокАН СССР М 43 о Красного Зна- молекулярных рден нсти ений . Г. евер менисоеди(56) Николлимеры и иМ.: Химия,РазсйеРо 2 уш селеш 4(088.8) ев А.Ф., астмассы 1964, с.е а 2. Ей. 15,Синте на их 706-7 ,2. Ро 197,ические пооснове.5.уш. Бс 1р. 983-989. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ЭКСКЛЮЗИОННОй ЖИДХРОМАТОГРАФИИ ПОЛИМЕРОВ(57) Изобретение относится к спосо-бам разделения полимеров.в потокеэлюента на силикатных сорбентах.Целью изобретения является сокращение процесса разделения и устранение разложения полимеров при разделении. Поставленная цель достигается тем, что в качестве сорбентаиспользуют силикагель, а в качестверастворителя и элюента используютвещество, содержащее трифторуксуснуюкислоту с незначительным количеством воды 0,5-47 и бензола 0,5-2 Х.2 з,п. ф-лы, 1 ил.Изобретение относится к способам разделения эксклюзионной хроматографией путем фракционирования на пористых силикатных сорбентах синтетических полимеров (лавсана, термотропных5 полиэфиров) и биополимеров (синтетических полипептидов, пептидов и белков) по размерам и может найти использование в лабораторной практике и в заводских лабораториях в качест ве экспресс-метода оценки молекулярной массы (ММ) и молекулярно- массового распределения (ММР) полимеров.15Цель изобретения - сокращение процесса, разделения и устранение разложения анализируемых полимеров при разделении.Трифторуксусная кислота (ТФУК) практически прозрачна в интервале260-280 нм, который используется для спектрофотометрического детектирования полиэфиров, белков и пептидов. Новые свойства ТФУК позволяют эффективно испольэовать ее в качестве растворителя и элюента в эксклюзионнои жидкостной хроматографии (ЭЖХ).На чертеже изображены кривые 1 и 2 спектрофотометрирования элюата двух образцов полиэтилентерефталата (ПЭТФ) с разной характеристической вязкостью. По оси ординат - погло 35 щение Э, по оси абсцисс - время удерживанияП р и м е р 1. Эксклюзионную жидкостную хроматографию полиэтилентерефталата (ПЭТФ) проводят на фто 40 ропластовой микроколонке с внутренним диаметром 0,5 мм и длиной 40 см.Колонку заполняют смесью микросферических силикагелей Лихросфер Яи Ы, взятых в массовом45 соотношении 3:2Эффективность колонки составляет 10000 теоретических тарелок (тт).В качестве растворителя и элюента используют свежеперегнанную ТФУКс т.кип. 72-72,5 С (760 мм рт.ст.), содержание воды 0,5%. 0,5 мг ПЭТФ 1 с и = 0,72 растворяют в 1 мл свежеперегнанной ТФУК Я = 1,480) при 20 С в течение 20 мин. На вход колон ки вводят 0,2 мкл раствора ПЭТФ, т,е,О, 1 мкг полимера. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа" 12 мин, время удерживания максимума пика= 8,8 мин.В этом случае, если белки и пептиды содержат Б-Б-связи, проводят предварительное окисление надмуравьиной кислотой.П р и м е р 2. Эксклюзионную жидкостную хроматографию пептида брадикинина проводят на микроколонке по примеру 1, 0,5 мг пептида с ММ 1060 растворяют в 0,25 мл ТФУК (й 4 = 1,480) с добавкой 2% воды и 1% бензола при 20 С в течение 10 мин. На вход колонки вводят , 0,2 мкл раствора, т,е, 0,4 мкг пептида. В качестве элюента также используют ТФУК с 2% воды и 1% бенэола. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа 14 мин. Время удерживания максимума пика= 12 мин.П р и м е р 3. Эксклюзионную жидкостную хроматографию белка химотрипсиногена с ММ 25000 проводят на микроколонке по примеру 1. 2 мг белка обрабатывают 0,2 мл надмуравьиной кислоты, Полученную смесь вьдерживают в течение 12 ч при 20 С и упаривают. Остаток растворяют в 1 мл ТФУК с 3% воды и 0,5% бензола. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа 14 мин. Время удерживания максимума пика= 9,3 мин. В качестве элюента также используют ТФУК,П р и м е р 4. Для доказательства отсутствия денатурации полимеров в условиях анализа готовят растворы ПЭТФ и ТФУК с д = 1,480 (исходная) и с добавкой 1, 4 и 5% воды. Измеряют удельную вязкостьи1 время удерживания Т полученных растворов через 30, 45 и 120 мин. Удельная вязкость почти не меняется.Формула изобретения1. Способ эксклюзионной жидкостной хроматографии полимеров путем растворения полимера в растворителе, введения раствора полимера в хроматографическую микроколонку с сорбентом и разделения в микроколонке в потоке.элюента, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью сокращения процесса разделения и устранения разложения полимеров при разделении, в качестве сорбента используют си1272227 07 7,5 2,5 ии ставитель Л.Жаркхред А,Кравчук аКорректо охман Редактор А.Козо Тираж 778Государственногоелам изобретенийМосква, Ж,Заказ 6333 4 Под митета ССсно ВНИИ открытиишская наб.,4/5 30 оектная, 4 роизводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород,ликагель, а в качестве растворителя и элюента используют вещество, содержащее трифторуксусную кислоту.2, Способ по и. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения растворимости, при разделении синтетических полимеров, растворитель и элюент содержит трифторуксусную кислоту и воду, причем количество ингредиентов равно:трифторуксусная кислота в количестве99,5-987, остальное вода.3. Способ по п. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью по вышения растворимости и подавленияадсорбционных взаимодействий полипептидов и белков с носителем, растворитель и элюент содержат трифторуксусную кислоту в количестве 99947 вода 0;5-47., бензол 0,5-27,.