Способ определения маркеров вирусных гепатитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРОО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОП Е ИЗОБРЕТЕНСВИДЕТЕЛЬСТВУ Н АВ 1 ОРСКОМ( 54) ( 57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАРКЕРОВВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ путем проведениярадиоиммунологического анализа натвердой фазе и выявлением радиоактивности иммунного комплекса, о т л ичающий с я тем, что, с цельюупрощения способа при сохраненииего высокой чувствительности, в качестве твердой фазы применяют полиэтиленовую пленку, а радиоактивностьиммунного комплекса выявляют авторадиографически,У 35соло гииогоина,Н,ПВ. ДорМ. Стаха Семенощенко, ова8)У 401241977.Изобретение относится к медицинеи может быть использовано для диагностики вирусных гепатитов человека,Цель изобретения - упрощение способа при сохранении его высокой 5чувствительности за счет использования полиэтиленовой пленки в качестветвердой фазы и выявления радиоактивности методом авторадиографии.Способ осуществляется следующимобразом.В качестве твердой фазы используют полиэтиленовую пленку (ПЭП) в виде бытовых "мешков полиэтиленовых хозяйственных" 400 х 230 см, толщина50,02 мм, цена 5 коп, Пригодна полиэтиленовая пленка любой толщины,ПЭП расчерчивают шариковой ручкойвзаимоперпендикулярными линиями синтервалом 1 см. Затем ПЭП укладывают на стеклянную пластину (расчерченной стороной вниз), покрытую влажной фильтровальной бумагой, Точкипересечения линий служат точками нанесения реагентов, Реагенты наносятв объеме 20 мкл, инкубируют 3-18 чво влажной камере при комнатной температуре и отмывают под струей холодной водопроводной воды, После отмывания последнего реагента - иодированного препарата антител ( 1-АТ)12отмытую и высушенную ПЭП авторадиографируют, т.е, помещают на контактс рентгеновской пленкой на 18 чРентгеновскую пленку затем проявляют.Способ поясняется сл",дующими примерами,П р и м е р 1, Диагностика гепатита В по выявлению НВзАд в сыворотках больных, 40Б точки на ПЭП наносят антителапротив НВзАд (анти-НВ) в количестве 200 нг в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатнойтемпературе 3 ч. ПЭП промывают под 45струей водопроводной воды и высушивают фильтровальной бумагой,Наносят исследуемый образец - сыверотку человека, неразвеценную вобъеме 20 мкл. Инкубируют при условиях в течение 18 ч ПЭП промывают и высушивают.Наносят1-анти-.НВз 0,02 мкК в объеме 20 мкл. Инкубируют при условиях в течение 5 ч, ПЭП промывают, высушивают и укладывают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч. Рентгеновскую пленку проявляют и визуально оценивают результаты. Отмечаютномера затемненных точек, соответствующих образцам, содержащим НВзА.Таким образом, образцы, обеспечившиезатемнение рентгеновской пленки, содержат ЧВзАд, а образцы не обеспечившие затемнение рентгеновской пленки, НВзАд не содержат.П р и м е р 2. Диагностика гепатита А по выявлению вируса в фекалиях.В точки на ПЭП наносят антителапротив вируса гепатита А (анти-НАУ)в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 3 ч. ПЭП промывают под струейводопроводной воды и высушиваютфильтровальной бумагой,Наносят исследуемый образец -экстракт Фекалий в объеме 20 мкл,Инкубируют во влажной камере прикомнатной температуре 18 ч. ПЭП про"мывают и высушивают.Наносят 1-анти-НАУ 0,02 мкКв объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере 5 ч. ПЭП промывают, высушивают и помещают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч. Рентгеновскую пленку проявляют и визуальнооценивают результаты,Образцы, обеспечивают затемнение рентгеновской пленки, содержатвирус гепатита А, образцы, не обеспечивающие затемнение рентгеновскойпленки, вируса гепатита А не содержат,П р и м е р 3, Диагностика гепатита А о выявлению в сывороткахбольных антивирусных антител класса М (1 дМ).В точки на ПЭП наносят антителапротив антител человека класса М( анти-М) в объеме 20 мкл. Инкубируютво влажной камере при комнатной температуре 3 ч. ПЭП промывают подструей водопроводной воды и высушивают фильтровальной бумагой,Наносят исследуемый образец -анализируемую сыворотку человека вобъеме 20 мкл. Инкубируют во влажнойкамере при комнатной температуре 18 ч.ПЭП промывают и высушивают.Наносят раствор, содержащий вирусгепатита А: вируссодержащий экстрактфекалий больного в объеме 20 мкл,инкубируют во влажной камере прикомнатной температуре 5 ч. ПЭП проч"мывают и высушивают.1258416 Составитель М. ВасильевРедактор С, Патрушева Техред И.Верес. Корректор С. Черни Заказ 5052/4 Тираж 660 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1 13035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д, 4/5Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 4,3Наносят д 1-анти-НАУ 0,02 мкК в объеме 20 мкл. Инкубируют, отмывают и высушивают. ПЭП помещают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч. Рентгеновскую пленку промывают и визуально оценивают результаты,4Образцы, содержащие антитела против вируса гепатита А класса М, обеспечивают затемнением рентгеновской пленки, Образцы, не обеспечивающие затемнения рентгеновской пленки, антивирусных антител не содержат,