Способ определения витаминов и

(5Д АРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР АМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(57) Изобретение относится к химическим методам определения витаминов группы Д. Цель изобретения - сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа, Образец растворяют в хлороформе. Полученный. раствор наносят на пластинку с за" крепленным слоем сорбента, Хромвтографическое разделение витамина Дэ осуществляют в системе гексан - эфир - н-бутанол (49:49:2). Затем опрыскивают пластинку 0,23-ным раст" вором хлорида железа в этаноле, Пластинку высушивают и помещают в камеру, насыщенную парами йода. Пластинку извлекают из камеры, прогреваютдо полного удаления следов йода. После этого пластинку опрыскивают 0,5 й-ным раствором 2,2 -дипнридила в этаноле. Производят элюирование целевого продукта. Полученный элюат Я фотометрируют.1 12Изобретение относится к химическим методам определения витаминовгруппы Д с применением хроматографических методов очистки, в частности,тонкослойной хроматографии и можетбыть использовано при определениисодержания витаминов группы Д в масляных концентратах, тривитамине,тетравитамине и других объектах взоотехнических, ветеринарных, медицинских и прочих биологических иссле"дованиях, а также для контроля производства витаминов группы Д (преимущественно Д) для медицинских целей и ветеринарии (применяется длякрупного рогатого скота) и витамина Д для нужд птицеводства,эЦелью изобретения является сокращение длительности анализа и повышение чувствительности способа.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу определениявитамина Д путем хроматографическойочистки на пластинке а закрепленнымслоем сорбента в подвижной Фазе, содержащей органический растворитель,удалением целевого компонента спластинки и фотометрированием в качестве подвижной Фазы используютсмесь гексан:эфир:н-бутанол при объемном соотношении компонентов (45-53):;(53-45):( 1-3), а цветную реакциюпроводят непосредственно на пластинепутем последовательной ее обработкитреххлористым железом, парами йодаи 2,2 в .дипиридилом.П р и м е р 1. Определение витамина Д в масляном растворе.2,5 г препарата витамина Д растворяют в 2 мл хлороформа, переносятв.мерную колбу на 25 мл и,доводят до.метки хлороформом, На стартовую линиюпластинки "Силуфол с закрепленнымслоем силикагеля размером 15 х 15 смнаносят 0,1 мм полученного растворав виде полосы длиною 80 мм, рядом наносят точки стандартного растворавитамина Дз (1 мкг холекальциферола).Хроматографическое разделение ви -тамина Дз осуществляют в камере, насыщенной парами подвижной фазы (гекса:эфир:н-бутанол, смешанных в объемных соотношениях 49:49,2), через которую в течение 15 мин продувалиазот, Когда Фронт растворителя приблизится к. верхнему краю пластинки,ее извлекают из камеры и высушиваюто,в токе азота при 40 С. Затем опрыскивают пластинку 0,2 Е-ным раствором 54379 2.хлорида железа (ЕЕЕ) в зтаноле. Пластинку высушивают при комнатной температуре и помещают на 10 с в камеру,насыщенную парами йода. После этогопластинку извлекают из камеры, прогревают в токе теплового воздуха до, полного удаления из пластинки следовйода с последующим опрыскиванием ее0,57-ным раствором 2,2-дипиридила в Ю этаноле. На пластинке появляется розово-красная полоса целевого продуктана белом фоне.Локализацию витамина Д определя 315 ют по свидетелю и окрашенный участоксиликагеля количественно переносят в пробирку с притертой пробкой. Затем в пробирку приливают 3 мл элюирующей смеси, состоящей из этанола, О соляной и фосфорной кислот и дистиллированной воды в объемных соотношениях 6;3:1:2, энергично встряхивают в течение 20 с и отфильтровывают через беззольный фильтр (красная лента).25 Ополаскивают пробирку 1 мл элюирующей смеси, которую переносят на тот же фильтр. Полученйый розово-красный элюат фотометрируют при 492 нм.Содержание витамина Дэ в препарате определяют по формулеА 40 с 1 У,ш У где М - количество витамина Д, найденного в препарате, ЙЕ/мл;А - количество витамина Дз, найденного по калибровочнойкривой, мкг;40 - коэффициент пересчета винтернациональные единицы(ие);д - плотность масла гмл;У, - объем хлороформа, в которомрастворена навеска препараф 5та.(25 мл);Т - объем хлороформенного раствора препарата, нанесенногона хроматографическую пластинку (0,1 мл);5 Ош - навеска препарата (2,5 г).П р и м е р 2. Определение витамина Д в спиртовом растворе,1 мл спиртового раствора препарата витамина Д разбавляют хлороформом в мерной колбе до 100 мл, На 55стартовую линию хроматографическойпластинки наносят О, 1 мл полученногораствора в виде полосы длиной 80 мми рядом наносят точки стандартногоПреимущества способа заключаются в следующем: применение в качестве подвижной фазы предлагаемой системы растворителей дает возможность селективно определять витамины групСоставитель В. Каюкова Редактор М. Циткина Техред А.Кравчук Корректор С. ЧерниЗаказ 4713/47 Тираж, 778 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 45 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 12543раствора витамина Д (1 мкг). Хроматографическое разделение и вседальнейшие процедуры проводят .так же,как описано в примере 1.П р и и ер 3. Определение витамина Д в масляном растворе тетравиэЪтамина (смесь витаминов А, Е, Дэи Г).5 г масляного раствора тетравитамина вносят в мернуюколбу на 25 мл 10и доводят до метки хлороформом, Настартовую линию хроматографическойпластинки наносят 0,1 мл полученного раствора в виде полосы длиной80 мм, рядом наносят точки стандартного раствора витамина Д (1 мкг).Хроматографическое разделение и вседальнейшие операции. проводят также, как описано в примере 1.П р и м е р 4. Определение витамика Д в масляном етабилизированЭном растворе тривитамина (смесь ви таминов А, Е, Ди сантохина).4 г масляного раствора тривитамина вносят в мерную колбу на 25 мл 25и доводя до метки хлороформом. Вседальнейшие операции проводят так же,как описано в примере 1,79 4пы Д в присутствии других жирорастворимых витаминов и антиоксидантов;проведение цветной реакции непосредственно на пластинке согласно предлагаемому способу позволяет повыситьчувствительность способа; применениепредлагаемой в .,-движнай фазы,и цветной реакции непосредственно на пластинке сокращает продолжительностьанализа более чем в 3 раза; Йсключение из работы треххлористой сурьмызначительно улучшает условия трудааналитиков и расширяет возможностииспользования метода. Формула и з о б р е р- е н и я Способ определения витаминов Д и ДЗ путем растворения образца в хлороформе, нанесения на пластинку с закрепленным слоем сорбента, хром .- тографирования в системе органических .растворителей, проявления, злюирования и фотометрирования целевых соединений, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени анализа и повышения чувствительности способа, в качестве системы органических растворителей используют гексан - эфир - н-бутанол (49:49: :2), а проявление проводят последовательной обработКой раствором хлорного железа парами иода и раствором 2,2 -дипиридила.