Способ получения и-рнк для специфической иммунотерапии и профилактики

СВОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН д 4 А 61 05, 37/10 РЕТЕНЙ ИКАНИЕ Шварцхауп ггГг гиг ше1 ору цпйз, 245. ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(56) 1 ас 11 еггк.", Хе.гзсЬЙхкгпгзсЬе. - МЖгоЬгоТпюыпо 1 о ду154 (1968) 4)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ и-РНК ЛЛЯЕЦИФИЧЕСКОИ ИММУНОТЕРАПИИ И ПРОФИ.ТАКТИКИ, включающий приготовлениесмеси и-ЛНК, нуклеотидов и нуклеазной ферментой системы из клеток ретикциоэндотелиальной ткани, обработку указанной смеси вирусным, бактериальным или опухолевым антигенами, инкубацию, экстракцию и-РНК, раствором фенола и додецелсульфата натрия с последующей очисткой целевого продукта, о т л ич а ю ш и й стем, что, с цельюповышени выхода продукта, очисткупроводят центрифугированием в градиенте плотности хлорида цезия/сахароза при 130 000 д, а в качестве нуклеазной ферме;тной системы используютс гомогенат ткани селезенки.Изобретение относится к т.1.( но - .ТЕРаПИИ, Д таКжЕ актИВНОЙ тв)МУНИ.ДЦПт И ПОЛУЧЕНИЮ ацтИСЫВОРОто В Р- анизме человека и ж 5 во", нвгс.ЦР)1 ь и;ОбрРтециЯ полу 1 С нцс : 11(, пецифического деиствин против д;(т(вгенов, переносимой человеком пр;1.рИМЕ)с НИ, В ЧаетНОСтц Прц НтНЕК;Г 1.1)СПОСОО Оеу 1 РСТВЛяЕТ, 51 СЛРПЮ)ИМобразом,11.) г О и О 1 т );1 т я т 1 с д 111 Р Р л с. 3 Р:к иНр ИГОТЯ БЛИН дО" СтЕе и - 1 1( НттС Р с Г 11 -,(ОН И ЦУКЛЕДЗНЫЕ ФЕРМЕ,: ДЛН СТМУпяции е 11 унцот( сис(нен 1с)брс 1 бдт 1 ндю 1ЭТУ (")ЕС 1 В;ХРУСНЫМ, 6 ДК ГЕРИДЛЬН 11 НОПукс):С.ВЫ.1 ЯНТИГЕНЯМИ ";ССТ;)ЯГИ;)у 1И - .1 К 1 ) - Н 1; ВОДНЫ рдетт) Г)Г)О 1,1(г,Е.Цт)ВС (.тфД.-Д НДТРИЯ И -Нс) ;1:В)РО(фецолд, с Д;п,ю очистки ; 11 К пен гр)1 фУГИР)ЛОТ 3 ГР;1 ДИР:Т Р ГЛ"о ( с 1рт 5)д ДРЗИЯСдкс 1 рОЗЫ;1 Тройне Г у:Рного рдст-,орд при ,ЗГ 000 с;,Эцсоцукл)вдзцые ст)ер. Риты :олу. н"ИЗ С(т)СЗЕ:Отц С) ГОКО.: РНДТД,ЕН ПН. - фугирован:ем з грацие)те пт;Отцостц сахдрозы нри 00 000 р.1 р и и е р. )1, 1 оп)сение сэ е:тНОЙ СИСТЕМЫ,ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СООТВР ГСТВУЮ 1 Ет ферментной системы можцс) исч;О 1), )1 лейкоциты и лнмсгоциты. Особе нно СПОСОб ПОСттЧЕНИя ИЗ С;:ЛРЗРН; т целею 1 - 2 1 свежей оыс.трс:.Ямр;)оСЕЛЕЗЕНКИ тНДПРСЕР, СРЛСЗР;11: СННи )не) размельчдют г ступке в порсл,: ксс стхим льДОм и жидкит; д 01 см. 11 ОР( пок вводят в 1,.") мл т)о:ного буфе,)- ного раствора А. в пробирке Для не: рифуги и замораживают с успензю пр) -70 С. Этот процесс повторяню окоп(10 раз. После этого пс)тготовленц:,;Р для обработки клетки От:ентт)ифу: иру(, в течение 30 мин тз у:вгрдцентрК 1)уг. Бекмана в РотоРе Бтт .)0,1 ПРН )О ,С":; После центриО)уг 5 тровстция О тоир Лют 1-1,5 мл красного ОСВРТ)Рнно о нд;,сядкя и приводят на и(.р иоличес к ийградиент сахарозы. Этот Грддиен гтоит из 1 мл 602 - НОЙ; дхдроз В тройНОМ буфЕрНОМ раСтВОрР ст, цдд КОТ, рГнаходятся 2,75 мл 307.-Вго раствор(сахарозы в тройном буфернсм рд;тн( - .рЕ Л, ЦЕнтрнфугцрОВЯНИР Нррт;ОПЯ; Вультрацентрифуге 1 екм(нд) рдств;р н,50.1 т при 100 000 я, 0 С. (1 среэполучают необходимую (1)рск.и В н,скрасноватого осветленн; г; Р:с я., 11( (,езс:С(.и),1:)с"к.еи:1;)ВдяВКГта) Я)т: - ,11) . (С)1)ВОРМД(ИвНс .ОКЕ)1 ООт)НОГЯ Кт(С.С "д)Г б 1. рС З Н(О (ЛЕС 1 НО 1 Е ЕЛ РЕ НС И ) (.( К)ДН)РМОтт .:-;, ЗНН. ".Р,)ТЛЕНО ОТ) ДиваЗ Э 111 Т;( 1)ет О У(1)ЕГН(:О РС)У)( Н 1 Г:,)1) ") .:. Е 1 т.) с,г гет л. Ст-, С ,ЛВ ИГ Е т тРедактор С, Патруюева Техре,1 Оцоц:-тг Заказ 4027/59 тл - - 1 В 1111 И 1111 1 осуттлрс.т еттцоО кс:я.;т з СССР 1 О ГЕ:1 ЛМ ИЗ ".д ТЕ И.т тт С . .1 ТГТ130, ).,)СКВЛ. Т.т ., ат.,.;,т, О ПрОИЗВОдСТВЕКцс - :ОГТГрафтЕСКОС ПРЕЛ:.р - .,:, Г., :.ТЦЛГ.: т Ч ОЧ 111 ЦЦУ) ф 1):" т,",.)ЦТа ТахжЕ СМЕ СЬ ЦУКЛЕОТИ;ОВ Л 1) т КХТ и .т .Ф щ .15 Ксцгрсля Ссстацгц: ЫЕЦЬЦУО ЕМС т, С Гт 1 ЦЛ;ОВТт Кт;ттЕт ": - ВЕЦЦЫМ СООТЦСШЕЦ;ЕМ, Ц Кс ТОРУ)Е ЛЯЮТ . СФ, тЛРКЦРОВЛЦЦЫЙ ТРИТ 1 ЕЬ: .)Л" КаПЫВаЮт ВСЕГДа ОХЛЛжДЕЦЦОй ПтПЕГ.:;, й, Оптимальные концентрации отдельц,х компонентов определяют посреде.тво. нескольких опытов, Каждую из проб инкубируют в водяной ватие прц 37 С и уже через 3-б миц разбавляют зоОцм раствором 17-ного сульфата дадец 1-1 И 17-НОГО фЕНОЛЛ ВадНОГО. ОПт:МЛ:т время инкубирования также злвцсцт от КОНЦЕНтРаЦИй И СООТВЕТСГВУЮГЕГО Лтт."-. гена и может бьпгь Определено цл с "те ванин нескольких опытов. Ох:лжле тцПРОВОДЯТ В ВаННЕ СО ЛЬДТ)М, 1 Е:Т):, гируют при 2000 Г., Нлослтех сот.: ,": синтезированную сьрую и-РПК.Г, Очистка и - РПК. Из цлттсс; И-РНК ИЗОЛИруЮт ПО ПЕрИО;Ит.: СКТГ Л - диенту хлорид цез ия /слхлро. л. . этого в центрифужцой т)убк из л.;. - 2- тилцеллюлозы наслаивают по 1 мл рлс.; - вора хлорида цезия, плотность р - 1,9 г/мл, с 0,75 мл 30 Е-кого раствора в тройном буферном растворе )т. с рН 8,0, По 2 мл прод доблвнятт градиент и трубки злкрьгвают стер:лц гарафицом, После цецтрифугировлцгя при 18 С 130 000 р в течение тт центрифуге Бекмана с ротором Б,:1 5 Г,1 забирают слой хлоридл цезия. 1 ля зтт й цели центрифужцые трубки прокалывал)г на дне прокаленной иглой и весь рлст - вор хлорида цезия переводят в трубки До слоя сахарозы. Получецць,"т -л.тм образом раствор разблв 1 яют стерТтьцо)1 водой в соотношецт 1:2 и сохраня вт зевсмороженным при - 20 С, седтщектируя через лТЕТТтт;Гт:- .Т) З1, тт-гтттт тт Пт - ;:. С:О., СостттететпуЮ Т ИСПЫ ),Ц ТСК ЛЗ ЛГ:Т т т ГО ПСГ С 1 Г" 1 Т)СХ ТТ ТО ТСтицт ОбГ; т тЮ Г. 5 1 111. 1 Ь 1 ГСОС:ТСцц