Способ тестирования дофаминергической активности химических соединений

. льйЪ ЬСТВУ ТОРСКОМУ СВИ 7 ательский инстилогии им.П.К.Аноут етельство СССРН 38/48, 1975.ВАНИЯ ДОФАМИНЕРХИМИЧЕСКИХ СОЕносится к мед о для испытан мических соединия - сокращениеселективности ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(71) Научно-исследот нормальной физи хина(54) СПОСОБ ТЕСТИРОГИЧЕСКОИ АКТИВНОСТИДИНЕ НФ(57) Изобретение оцине и предназначедофаминергическнхнений. Цель изобревремени и повьппени способа за счет хронического вживления электрода в медициальный гипоталамус кролика и регистрации реакции на однократную электрическуюстимуляцию до и после введения тестируемого соединения. Кроликам в область медиального гипоталамуса вживляют электрод. Проводят однократнуюэлектрическую стимуляцию. Регистрируют количество ударов задними конечностями, время продолжительностиреакции и латентный период появления ударов. Затем вводят тестируемоесоединение и снимают те же показатели. Об эффективности исследуемоговещества судят по изменению количественных показателей каждого парамет 124600235 40 45 5 О 55 Изобретение относится к медицинеи касается разработки экспериментальной модели для испытания дофаминергических химических соединений,которые могут найти применение длялечения нервных, психических и Функциональных заболеваний, связанныхс эмоциальным стрессом.Цель изобретения - сокращениевремени и повьппение селептивностиспособа за счет хронического вживления электрода в медиальный гипоталамус кролика и регистрации реакции на однократную электрическуюстимуляцию до и после введения тестируемого соецинения.Способ осуществляется следующимобразом,Кроликам стереотаксически хронически вживляют биполярный электродиз нихромового провода в изоляции(диаметр провода 0,15 мм) в областьмедиального гипоталамуса (вентромедиальное или дорсомедиальное ядра гипоталамуса). Затем на свободнопередвигающемся животном определяютпороговую силу электрического раздра.жения, при котором в ответ на однократную стимуляцию появляется 1-2удара задними лапами, В дальнейшемдля вызова тест-реакции используютудвоенную пороговую силу раздражения. Экспериментальным контролемслужат 10 последовательных раздражений, предъявляемых с интервалом3 мин. По результатам этого тестирования находят средние величины количества ударов лапами в ответ наоднократное раздражение (Х), латентного периоца появления первого удара вслед .за окончанием подачи раздражения (ЛП) и общую продолжительностьповеденческой реакции (Т) . Дополнительным параметром, характеризующимдинамику поведенческой реакции, может служить суммарный график количества ударов в зависимости от времени.Об эффективности Фармакологического вещества., в даннбм случае гормона коры надпочечников кортизола,судят по изменению количественных показателей каждого из исследуемых параметров ответной двигательной реакции (Х, ЛП, Т). Для определения достоверности различий по каждому из параметров поведения используется непараметрический критерий и-Стьюдента,. Все зти операции проводят на одном или г 1:.уппе.животных в зависимости от величины наблюдаемого эффекта от введения препарата.П р и м е р.Тестирование дофаминергической активности гормонального препарата - кортизола.Отбирают одного в тр интактных кроликов весом 2,5-4 кг. С поверхности черепа под местной новокаиновой анестезией (27,-ный раствор) удаляют мягкие ткани. В черепной кости просверливают отверстие диаметром 0,5 в точке, лежащей на 1 мм сзади и на 1 мм латеральнее от места пересечения медиального черепного шва с брегмой. В это отверстие в соответствии со стереотаксическими координатами (перпендикулярно к поверхности черепной кости) погружают на глубину 12 мм биполярньп электрод. Конечное положение электрода Фиксируют на поверхности черепной кости самотвердеющей зубной:пластмассой "Протакрил". Через 3- 5 дн после операции животное помещают в экспериментальный бокс, контакты от раздражающих электродов присоединяют с помощью гибкого кабеля к электронному стимулятору, Постепенно увеличивая интенсивность раздражения производят одноразовые стиму-." ляции. Во время подачи электрического раздражения (5 с) обычно наблюдается двигательная реакция кролика в виде побежки, При достижении пороговой величины раздражения сразу вслед за побежкой кролики начинают производить удары задними лапами по полу. На самопишущем приборе регистрируют число ударов лапами при удвоенной величине пороговой силы раздражения,. Производят 10 последовательных раздражений с интервалом 3 мин. Затем внутрибрюшинно вводят кортизол в дозе 10 мг/кг, разведенный в 1 мл физиологического раствора. Через 5 мин после этого наносятеще 10 раздражений с той же силой и интервалами как и в контроле,На основании результатов исгтания сроят два графика динамики поведенческой реакции и подсчитывают достоверность различий между данными,по Х, ЛП и Т в контроле по сравнению с аналогичными параметрами пос ле введения препарата. В приведенном примере Х для контроля равно 13,4 - 2,8 ударов, а после введения кортиэола Х=6,7+1,3 (Р С 001). Со-.1246002 Составитель Н. Гуляева Техред О.Сопко Корректор И. Эрдейи Редактор Н.Яцола Эаказ 3993/37 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие,г.ужгород,ул.Проектная,4 ответствующие значения для среднеговремени поведенческой реакции (Т)равны 588 с и 34+4 с (Р ( 0,05),Для латентных периодов появленияпервого удара вслед за окончанием подачи раздражения различия недостоверны (4,6+2,4 с и 4,111,2 с соответственно). Делается заключение .обактивации эндогенной дофаминергической системы мозга кортизолом на основании увеличения общего числа ударов и продолжительности реакции,вызванной стимуляцией дофаминергических путей гипоталамуса. Формула изобретения Способ тестирования дофаминергической активности химических соединекийпутем определения числа ударов задних конечностей кролика до и после введения тестируемого соединения с последующей оценкой дофаминергической активности по изменению измеРяемых параметров, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени и повышения селективности способа, в область медиаль- .10 ного гипоталамуса моз- кролика хронически вживляют электрод, проводят электрическую стимуляцию, регистрируют количество ударов задними конечностями, время продолжительности 15 реакции после однократной стимуляции и латентный период появления 1ударов, затем вводят тестируемое соединение и снимают те же показатели.