Штамм 17-5, используемый для получения ингибитора трипсина

,БТВ.ЕР ЛЬЗУЕ ТРИПС Бг.гер 8-644 енных "ВНИИ вв Сошусев ЬЖпде(Центральный му микроорганиз енетика"), исп ия ингибитора но химиимоно со 17-5 ЦМПМзей промышлинститутамый для п м в зуе- ипсиолуч ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Ордена Ленина институт бим. А.Н.Баха и МГУ им. М.В.Лова(56) Авторское свидетельство СССВ 659610, кл. С 12 Р 1/06, 1977Авторское свидетельство СССРУ 1130603, кл. С 12 Р 1/06, 198 ОМУСЕБ В 1 К 1 М 1 ЕНЯМЫЙ ДЛЯ- ПОЛУЧЕНИЯ50 55124252Изобретение относится к биотехнологии и может быть использованодля получения ингибриторов протеаэ.Цель изобретения - повышение выхода ингибитора трипсина.Штамм ЯСгергошусез ЬЖгп 1 епз 1 з17-5 выделен из образца бурой гор.ной почвы из района Майкопа,Штамм Ясгергошусез ЬИп 1 епзгз17-5 хранится в центральном музее 10промьшленных микроорганизмов института "ВНИИГенетика 1 под номеромБКПМ Яи хараКтеризуется следующими признаками.Культурально-морфологические признаки.Споровые цепочки прямые, спороваяоболочка гладкая.На среде У 1 Гаузе субстратный мицелий неокрашен, воздушный бело-серый, серый, Растворимый пигмент отсутствует.На среде Чапека субстратный мицелий бесцветный, в центре колониичернеющий, воздушный мицелий беловатый, до светло-серого, растворимыйпигмент отсутствует.На глюкозо-аспарагиновой средесубстратный мицелий тонкий, грязнокремовый, воздушный мнцелий беловатый, растворимый пигмент отсутствуетНа среде Линденбайна субстратный мицелий тонкий, бесцветный, воздушныймицелий слабый, белый, растворимыйпигмент отсутствует,На среде У 2 Гауэе субстратныймицелий тонкий, темно-бурый, воздушный мицелий обильный, светло-серыйрастворимый, пигмент бистровий.На овсяной среде субстратныймицелий тонкий, бесцветный по краю 40буровато-коричневый, воздушный мицелий обильный, порошистый, среднесерый, растворимый пигмент слабый,светло-ореховый. Меланинотрицательный. Физиолого-биохимические свойства.Желатин не разжижает, молоко пептонизирует, крахмал гидролиэует, наклетчатке растет. Усваивает глюкозу,рафинозу, маннит; не усваивает сахарозу, рамнозу, арабинозу, ксилозу,инозит,Антагонистические свойства: угнетает рост грамположительных и грамотрицательных бактерий.П р и м е р 1. Трехсуточную .культуру штамма 17-5, выращеннуюна среде следующего состава, 7 О: 1пептон 0,.5; перевар Хоттингера 3 об./, глюкоза 1; МаС 1 0,5; вода водопроводная рН 6,8-7,2, стерилизация 0,5 атм 30,.мин, засевают в среду того же состава в количестве 107. Через 28 ч роста при 28 С с перемешиванием культуральную жидкость подвергают центрифугированию.Активность ингибитора составляет в этот момент 130 ед,/мл.Характеристика целевого продукта: препарат ингибитора трипсина, частично очищенный из фильтрата культу- ральной жидкости адсорбцией на активированном угле, элюцией кислым спиртом, обессоливанием и частичным обесцвечиванием на смоле Рочех 18 (Яега) и хроматографией на КМ-целлюлозе, представляет собой смесь из трех пептидов с мол.мас. 400-500, щелочной и нейтральной природы. Активность препарата 25 ед./мг.П р и м е р 2. В качестве посевного материала используют трехсуточную культуру штамма на среде следующего состава, 7,: пептон 0,5; перевар Хоттингера 3 (по объему); МаС 1 0,5; глюкоза 1; вода водопроводная:, рН 6,8-7,2, стерилизование при 0,5 атм 0,5 ч. Посевной материал засевают в количестве 107. в описанную среду без глюкозы. Культивируют в течение 28 ч при 28 С с перемешиваонием. Культуральную жидкость отделяют фильтрованием.Активность ингибитора определяют по подавлению гидролиэа 17 казеина 5 мкг трипсина в 2 мл 0,1 М боратного буфера рН 7,4 за 30 мин при 37 С. Реакцию останавливают добавлением 2 мл 107.-ной трихлоруксусной кислоты. Количество гидролизованного каэеина определяют спектрофотометрически по поглощению растворимых в трихлоруксусной кислоте компонентов при 280 нм. За единицу активности принимают такое количество ингибитора, которое вызывает 507-ное подавление гидролиэа казеина. Активность в культуральной жидкости достигает 130 ед ./мл по сравнению с 33 ед,/мп при использовании известного штамма. Препарат ингибитора, полученный хроматографией на КМ-целлюлозе, опробован на способность ингибировать грибные протеазы. При получении Фермента Ю-ацетилР-глюкоэаминидазыСоставитель Г.СмирноваТехред О.Сопко Корректор Л.Пилипенко Редактор В.Петраш Тираж 490 Подписное ВНИИНИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб. д.4/5Заказ 3668/26 Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 3 1242524 4из фильтрата культуральной жидкости ингибитора на 1 мл культуральной жидАсшепюп 1 цш 237 высаливанием сульфа- кости выход препарата увеличивается том аммония при добавлении 1 О ед. на 207