Способ определения клеточного иммунитета

СОЮЗ СОВЕТСНИСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИН 19) МИТЕТ ССС И ОТНРЬ ГОСУД АРСТВЕНН ЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ 1 ТИЙПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ ТОЧ- еле(21) 355 (22) 28(46) 23. (72) А.Н и В.Н. ф (71) Орд вироток,тоф ченк кратиации ногоиитут зе ч а В.И. гностики, ые Бе Знамениим. А.А.зоологии(56) НовКпеточнМинск,961/28-132.838.85. Бюл. Р 31Красюк, Н,А. Падорична Трудового Кранститут физиологБогомольца и Инсим. И.И, Шмальга375(088.8)ков Д.К., Новикометоды иммунодилорусь, 1979,(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕ НОГО ИММУНИТЕТА, включающий выд ние лейкоцитов из крови, культи ванне их и подсчет бластных кле о т л и ч а ю щ и й с я тем, ч с целью повышения точности и со щения времени определения, куль вирование лейкоцитов в концентр 1 5 10 - 2,0 10 осуществляют Уо предметных стеклах при 4-8 С в ние 1 - 2 ч.1 117403Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к цитологическим способам определения реакции трансформации лейкоцитов в краткосрочной культуре 1 п ч 1 гго, что ха рактеризует состояние клеточного иммунитета организма, и может быть использовано в клинических медицинских и ветеринарных лабораториях.Цель изобретения - повьппение точ ности и сокращение времени определения клеточного иммунитета.П р и м е р 1 У исследуемого донора берут иэ локтевой вены кровь в объеме 1-2 мкл в предварительно обработанную гепарином пробирку (8 - 10 ед/мл). С момента забора крови и ее доставки время не должно превышать 1 - 2 ч.Кровь отстаивают в течение 30 - 20 40 мин при комнатной температуре Затем взвесь лейкоцитов в плазме переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при 800 об/мин.Плазму отсасывают при помощи пас теровской пипетки и к лейкоцитам добавляют питательную среду, состоящую из среды 199 и 35-407-ной аутологичной плазмы. Конечная концентрация лейкоцитарных клеток должна З 0 составлять 1,5 10 - 2,0 10 в 1 мкл6 суспензии. В случае, если содержание нелимфоидных элементов более 707, их необходимо выделить отдельно и добавить в необходимой пропорции.Суспензию клеток наносят а виде капель на обезжиренное предметное стекло и помещают во влажную камеру.Инкубируют лейкоциты при 4-8 Св течение 1-2 ч.40Стекла вынимают из камеры, осторожно споласкиваютдистиллированной во.дой,высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают ро ПаппегеймуПодсчиты" вают числобласттрансформированных лим. фоцитов (по включению ЗН-тимидина) и транформированных клеток нелимфоидной природы. После инкубации число трансформированных лиифоцитов у здоровых людей 427, трансформированных клеток 50 нелимфоидной природы 217. П р и м е р 2. Больная К.,28 лет. Диагноз: ревматизм, активная форма, 11-111 степени рецидивирующий ревмокардит. Жалобы на боли в суставах и 55 в области грудной клетки слева, периодическое повьппение температуры. Болеет с пяти лет. Объем движений в коленных 3 2суставах ограничен, суставы болезненны, припухлость кожи над суставами,субфебрильная температура, комбинированный митральный порок.При поступлении: количество эритроцитов 4. 10 л, гемоглобин 110 г/л,ц.п. 0,8, количество лейкоцитов8,8 10 л, РОЭ 27 мм/ч, ревмопробаотрицательная. Количество лимфобластов 577., трансформированных клеток нелимфоидной природы 767.Больная принимала лечение: каплиСтражеско, бисептол, фуразолин, димедрол, адонизид, комплекс витаминов.В результате проведенного лечения состояние больной улучшилось и в удовлетворительном состоянии она была выписана.При выписке; количество эритроцитов 4,210 л, гемоглобин 113 г/л,ц.п. 0,8, количество лейкоцитов6 105 л, РОЭ 10 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобласты 417, трансформированные нелимфоидные клетки 357.Анализ препаратов по предлагаемому .способу показал, что изменение количества трансформированных клеток лимфоидной и нелимфоидной природы коррелирует с изменением клинического состояния больной.П р и м е р 3. Больная К., 23 года, поступила 02,12.82, выписалась24.12.82 г. Диагноз; ревматизм, активная форма, 1. ст., рецидивирующий миокардит. Жалобы на боли в суставах ив области грудной клетки слева, субфебрильную температуру, слабость.Заболевание началось 1,5 мес назадпосле острой, ангины. Хруст в суставах, .болезненность при сгибании,объем движений в суставах ног ограничен.При поступлении: количество эритроцитов 4,4 105 л, гемоглобин133 г/л, ц.п. 0,9, количество лейкоцитов 8,3 .10 л, РОЭ 8 мм/ч, ревмобпроба отрицательная. Лимфобластов 687.,трансформированных нелимфоидныхклеток 437.В стационаре больная получила лечение: аскорутин, пенициллин, аналь- .гин, олеотетрин, делагил, В результате проведенного лечения состояниебольной существенно улучшилось иона в удовлетворительном состояниибыла выписана из стационара,При выписке: количество эритроцитов 4,5 105 л, гемоглобин 136 г/л,3ц.п, 0,9, количество лейкоцитов 5,8 -10 л, РОЭ 6 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобластов 513трансформированных клеток нелимфоидной природы 277.Снижение степени трансформации лейкоцитов при выписке свидетельствует о нормализации клеточной иммунологической реактивности, что коррелирует с улучшением общего состоя ния больных и с другими лабораторными анализами.Таким образом, предложенный способ (таблица) позволяет в более короткие сроки (1-2 ч, а по известному 1 72 ч) с более высокой точностью определить состояние клеточного иммунитета и использовать его в качестве экспресс-метода при диагностике и подборе лекарственной терапии. 20 Длительно инкубаци об Предл мыйе 62,415,6 62 9+4,4 63,11 .,2 Н О, 2+О, 02 14 ф 012 е 2 56,0+3,1 48 72 63, 1+1,2 63, 1+1,2 Составитель Г. Крюкоедактор С. Саенко ТехредМ.Надь КорректорЕ. Рошк ираж 722 .енного комитета СССРтений и открытий5, Раушская наб., д. 4/5 Подписно филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Заказ 5090/5 Т ВНИИПИ Государст по делам нзобр 113035, Москва, Ж 1174033 4Соотношение количества ДНК-синтезирующих клеток в культуре стимулированной ФГА и по известному и предлагаемому способам представлено втаблице,