Способ определения глюкозы в биологических жидкостях

1 а где Срл- концентрация глюкозы вопытной -пробе, ммоль/л;С . - концентрация глюкозы вэталонной пробе, ммоль/л;Ер - оптическая . плотность опытной прооы;Е - оптическая плотность эталонэтной пробы,Известный способ имеет недостаточно высокую чувствительность. 50Цель изобретения - повышение чувствительности способа.Указанная цель достигается тем,что согласно способу определенияглюкозы в биологических жидкостях 55путем фотометрического определениякомплекса, образовавшегося при повы 1шенной температуре в реакции глюкозы Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при определении глюкозы в крови и других биологических жидкостях.Известен способ определения глюко зы в биологических жидкостях путем Фотометрического определения комплекса глюкозы с сртотолуидином в кислой среде при повышенной температуре, по которому глюкозу в крови определяют следующим образом: в пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л (ЗЖ) раствора трихлоруксусной кислоты выдувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и центрифугируют, 0,5 мл центрифугата переносят в .другую пробирку, добавляют 4,5 мл ортотолуиди-, нового реактива из набора для определения глюкозы НПО "Биохимреактив и помещают в кипящую водную баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранжевом или красном светофильтре (590- 650 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как опытную пробу, но вместо крови берут 0,1 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробй, которую ставят так же как опытную но вместо крови беУ35 рут О, 1 мл эталонного раствора глюко-; зы с известной концентрацией 11. Расчет ведут по формуле(1)эт 40 ортотолуидином в кислой среде, рН :.-.с ной среды доводят до 3,25- 355 путем добавления к ортотолуидиновому реактиву .водного раствора аммиака.П р и м е р 1 (макровариант).В пробирку наливают 0,9 мл0,18 моль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют. 0,5 мл центрифугата переносят в другую пробирку и добавляют 4,5 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортотолуидинового реактива из набора для определения глюкозы НПО "Биохимреак ив" 25%-ным водным раствором аммиака (12:1 по объему). Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатно,т температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранжевом или красном светофильтре (590-650 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как опыт, но вместо крови берут дистиллированную воду. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставя так же, как опытную, но вместо крови берут эталонный раствор с известной концентрацией глюкозы. Расчет ведут по формуле (1) .При Е 0 л= 0,120; Ет= 0060 Сэг= 2,0 ммоль/л0120Соп= 0 060 х 2 =: 4,0 ммоль/лЭ Аналогично определяют содержание глюкозы,в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче.П р и м е р 2 (микровариант), Впробирку наливают О, 15 мл О, 18 ммоль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,01 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют.0,1 мл супернатанта переносят в другую пробирку и, добавляют 0,7 мл модифицированного ортотолуидиноного реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортотолуидилового реактива для определения глюкозы из набора НПО Биохимреактив" 257-ным воднбм раствором амм 1 ака (12;1 по124228 Составитель Н. ГуляеваРедактор Л.Пчелйнская Техред,Ж.Кастелевич Корректор И. Эрдейи Заказ 8272/34 . Тираж 822 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгорд, ул, Проектная, 4 31 объему). Пробирку помещают в кипящую ьодян,к, баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на микроколориметре МКМФ 1 при красном светофильтре (615 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против коьтролна реактивы, который ставят так же, как и опытную пробу, но вместо крови берут 0,01 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставят так же, как опытную, но.вместо крови берут 0,01 мл эталонного раствора глюкозы с известной ее кон 4центрацней Расчет ведется по форкуле (1),При Е= 0,060; С, = 6 ммоль/л;Е . 0,2405 0 060С - -д - - х 65 имольл.д 0,240. Аналогично определяют содержаниеглюкозы в сыворотке крови, спинно О мозговой жидкости и моче.Влияние рН реакционной среды .навеличину оптической плотности подтверждается экспериментально приисследовании эталонных растворов 15 глюкозы с концентрацией 5,55 ммоль/л.Предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность определенияглюкозы в биологических жидкостяхна 36-37 .