Способ определения глюкозы в крови

(51)5 6 01 М 33 ЗОБРЕТЕНИЯ САН ЕТЕЛЬСТ К АВТОРСКОМ(57) Использование: медицина, биология для количественного определения глюкозы в крови. Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении проб, К пробам крови добавляют предварительно 0,20-ный водный раствор 9,10-бисметилтрифенилфосфонийантраценхлорида в соотношении проба:реактив 1:10,30,-ный раствор трихлоруксусной кислоты, центрифугируют с последующим добавлением к надосадочной жидкости орто-толуидинового реактива, перемешиванием, нагреванием инкубационной смесй на кипящей водяной бане в течение 10 мин. охлаждением и колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590 - 650 нм,(21) 4841180/14(71) Черновицкий государственный университет(56) Инструкция к набору химических реактивов для определения глюкозы в биологических жидкостях О-толуидиновым методом. Утверждена МЗ СССР М 290 от11.04;92. 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ ВРОВИ Изобретение относится к биохимии, аименно к лабораторной практике для количественного определения содержания глюкозы в биологических пробах,Известен способ количественного определения глюкозы в биологических пробах(О.Д.Кушманова, Г.М.Ивченко. Руководствок лабораторным занятиям по биологическойхимии. Москва, Медицина, 1983), недостатком которого является необходимость завершить анализ в день забора биологическихпроб, поэтому данный способ не может бытьиспользован для отсрочного определенияглюкозы в биологических пробах,Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении био-,логических проб,Это достигается за счет стабилизацииглюкозы в биологических пробах добавлением к ним 0,2;-ных водного раствора 9,10 бисметилтрифенилфосфонийантраценхлорида (ДФА),Способ осуществляют следующим образом.В три пробирки вносят по 1 мл 0,20-но. го водного раствора ДФА. Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды, Пробирки закрывают пробками и хранят в холодильнике при 2 - 8 С,В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливат в холодильнике, На 60-й день или в любой удобныйдля работника день, но не позже 60-го дня,.определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах.Например, В три пробирки вносят по 1 мл 0,2%-ного водного раствора ДФА, Далее в опытную пробирку приливают 0,1 мл крови, в стандартную 0.1 мл стандартного раствора глюкозы, в контрольную 0,1 мл дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками и помещают на хранение в 1 Ф ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 767436 А 11767436 Таблица кслользованная концентрация ДФ 4 в 2+0 0012 0015 002 0025 005 0075 01 015 02 025 03 До прибавления раствора ДФЦ т.е, по способу-прототипу5,48М 15 ммн хранения с раствором ДФД541 556 5,27 5,58 5,295 суток хранения с раствором ДФд295 344 386 3,92 4,561 О суток хранения с раствором ДФД0,71 0,90 098 1,82 4,4820 суток хранения с раствором ДФД+н аьь 1,44 4,3030 суток храненияс раствором ДФА+н +н 067 3,81 5,35 5,67 5,44 5,41 5,59 5,36 5,41 1,66 2,440,34 0,66 5,37 5,44 5,4 5, 70 535 74 5,60 5,29 5,61 5,64 5,68 5,52 5,44 5,70 568 5,74 524 536 534 541 550 5,30 5,22 5,60 5,58 5,27 5,25 5,49 5,70 5,44 5,50 5,71 5,66 5,31 5,52 5,54 564 5,58 5,49 5,68 П р и н е ч а н и е, + - вместо ДФД к биологическии пробан приливали 1 мп дистиллированной воды и хранили их 75 суток+ь - подчеркнуты показатели проб, в которых содермание глюкозыуменьюнлосьпроцессе хранения по сравнению с результатои,полученным ло способу-прототипу 5,48 им/л+ф+ - пробы разломились холодильник при 2 - 8 С. В последующие 60 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 60-й или в любой удобный для работника день, но не позже,60-го дня, определяют количество глюкозы во всех накопившихся пробах, для чего добавляют с ним по 1 мл 10070-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирунй, переносят по 1;5 мл центрифугата в химические пробирки, приливают по 4 мл орто-толуидинового 3 еактива, перемешивают содержимое, помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, охлаждают до комнатной температуры и колориметрируют опытную и стандартную пробы против контроля в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине световой волны 590- 650 нм. Расчет проводят по известной формуле,Проведенные исследования показали, что ДФА в концентрациях 0,1 - 0,300 обеспечивает сохранность глюкозы в пробах сыворотки крови неизменной на протяжении 75 суток (табл. 1). В табл. 2 представлены результаты содержания глюкозы в крови, которые хранились на протяжении 1-60 дней после добавления к ним 0,2% раствора ДФА в сравнении б результатами глюкозы в аналогичных пробах, хранившихся без ДФА. Как видно из этих данных этот показатель значительно отличается начиная с 3-го дня хранения.Средняя относительная ошибка заявляемого способа определения глюкозы, вычисленная из 200 определений исследуемого показателя (по 100 определений в кровии в сыворотке крови) в сроки, указанные втабл. 2 равнялаСь 4,5700,5 В табл. 3 приведены определения глюкозы в сыворотке крови доноров, у которыхнаблюдались минимальные, средние и максимальные отклонения от величин полученных по способу-прототипу в день забора10 крови, которые показывают, что ни одна иэвеличин полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных поспособу-прототипу в день забора крови, которые показывают, что ни одна из величин15 полученных по заявляемому способу, не отличается от величин полученных по способу-прототипу более чем на 5.Формула изобретенияСпособ определения глюкозы в крови,20 включающий добавление к пробе 307 ь-ногораствора трихлоруксусной кислоты, центрифугирование с последующим добавлениемк надосадочной жидкости орто-толуидинового реактива; перемешиванием, нагрева 25 нием инкубационной смеси на кипящейводяной бане в течение 10 мин, охлаждениеми колориметрированием в кювете с толщиной слоя 10 мм при 590 - 650 нм, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения30 точности способа за счет стабилизации глюкозы, к пробе предварительно добавляют0,2-ный водный раствор 9,10-бисметилтрифенилфосфонийантрацен хлорид в соотношении проба: реактив 1:10,1767436 Таблица 2 Нспольэованньй способопределенияглюкозы хранения биологицских иидкостей в сутках 1 1 3Сроки13545 60 мСыворотка крови 414+021 4,07+0,18 4302022 4,07+0,21 3,95+0,17 3,98+0,17 4,220,22 4162022 4,2520,16 403+ 0,21 2,2 2,2 4 3,2 1,5 1,2 3,9 1,2 0,5 Сывороткахранивщая"ся беэ ДФА Сыворотки разлэщились 3,0120,20 0,5320,03 87 1 26,9 Кровь По заявляеиому сноса. бу 3,26+0,17 3,09+0,14 З,Э 4+0,19 3134017 3,2120,09 3,18+0,14 332 ЭО 16 3392017 3,3120,15 3,194024 2 отличияот показателей,полученных по способу-прототипу 0,9(3,233023 им/л) 1,2 4,6 4,9 2,5 0,6 1,5 содеркание глюкозы в пробах уненьщипось из"за продолкительного хранения их,содерщание глюкозы в сыворотке крови по способу-прототипу, равнялось 4,12 0,21 мм/л и определялось в день забора сыворотки у доноровсодерщание глюкозы в цельной крови по способу"прототипу равнялось 3,23 0,23 ми/л и определялось в день забора крови у донорасредняя величина 2 отличия по данной горизонтали 2372средняя величина 2 отличия по данной гориэонтелн 2,702количество доноров, в крови которых определялось содерщание глюкозысредняя велицина, полученная путем статистической обработки,средняя ощибка средней величины Примецание, Фн+н+ +н+ и Н 2 щ Таблица 3 Донор Содерие- Сроки хранения сыворотки в сутках Среднее лрототи 1 3 5 7 1 О 15 20 30 45 60 ние,2 Характер от.клонений Нинимальные Г,О,Н. 4,29+ 1,41 Э,90 Средние Л,П.А. 1,81 3,98 Наксимальные С.А.О,4,40 П р и и е ц а н и е. + - в строке указано содерыание глюкозы в ни/л н " в строке указано отклонение в процентах от показателя, полученного по способу-прототипу Составитель Г. ЯрмольчукТехред М,Моргентал Корректор М. Ткаь( Редактор С. Кулакова Заказ 3546 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4//5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 По заявляв" мону способу2 отлична от показателей,полученныхпо способупрототипу